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PF-477736 Chk Inibitore

N. Cat.: S2904

PF-477736 (PF-736, PF-00477736) è un inibitore selettivo, potente e ATP-competitivo di Chk1 con Ki di 0,49 nM in un saggio acellulare e inibisce anche VEGFR2, Aurora-A, FGFR3, Flt3, Fms (CSF1R), Ret e Yes. Mostra una selettività ~100 volte maggiore per Chk1 rispetto a Chk2.
PF-477736 Chk Inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 419.48

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.80%
99.80

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
TC32 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for TC32 cells 29435139
U-2 OS qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for U-2 OS cells 29435139
A673 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for A673 cells 29435139
Saos-2 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Saos-2 cells 29435139
RD qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for RD cells 29435139
SK-N-SH qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-SH cells 29435139
OHS-50 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for OHS-50 cells 29435139
SJ-GBM2 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SJ-GBM2 cells 29435139
SK-N-MC qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-MC cells 29435139
NB-EBc1 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB-EBc1 cells 29435139
LAN-5 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for LAN-5 cells 29435139
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 419.48 Formula

C22H25N7O2

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 952021-60-2 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi PF-736, PF-00477736 Smiles CN1C=C(C=N1)C2=C3C=NNC(=O)C4=C3C(=CC(=C4)NC(=O)C(C5CCCCC5)N)N2

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 84 mg/mL (200.24 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
Chk1
(Cell-free assay)
0.49 nM(Ki)
VEGFR2
(Cell-free assay)
8 nM(Ki)
Fms
(Cell-free assay)
10 nM(Ki)
YES
(Cell-free assay)
14 nM(Ki)
Chk2
(Cell-free assay)
47 nM(Ki)
In vitro

PF-477736 (128 nM) abrogates the camptothecin-induced DNA damage checkpoint in a dose-dependent manner in CA46 and HeLa cells. This compound effectively abrogates the -induced S-phase arrest with a corresponding increase in apoptotic cell populations in HT29 cells. This chemical (540 nM) enhances -induced cytotoxicity in a time- and dose-dependent manner in HT29 cells. It potentiates the growth-inhibitory activity of a panel of chemotherapeutic agents across a broad spectrum of p53-deficient human cancer cell lines in the MTT assay. Addition of this compound (360 nM) to -arrested cells induces a dramatic increase in the intensity of H2AX phosphorylation, reflecting a greater number of γ-H2AX molecules near sites of DNA damage. This chemical (0.5 nM) selectively blocks p73 and P53 phosphorylation in presence of curcumin in HL-60 cells. It (360 nM) suppresses -induced phosphorylation of histone H3 (Ser10) and Cdc25C (Ser216) and potentiates apoptosis in COLO205 cells. This compound (250 nM) combined with MK-1775 has marked synergistic cytotoxic activity in OVCAR-5 cells. It (250 nM) combined with MK-1775 causes accumulation of cells with a DNA content between 2N and 4N in OVCAR-5 cells. This chemical (250 nM) combined with MK-1775 causes premature mitosis before the end of DNA replication, with damaged DNA leading to apoptotic cell death in OVCAR-5 cells.

Saggio chinasico
Saggio di legame
Il saggio viene eseguito in una piastra a 96 pozzetti per 20 minuti a 30℃ in 0,1 mL di tampone di saggio contenente 50 mM TRIS pH 7,5, 0,4 M NaCl, 4 mM PEP, 0,15 mM NADH, 28 unità di lattato deidrogenasi/mL, 16 unità di piruvato chinasi/mL, 3 mM DTT, 0,125 mM Syntide-2, 0,15 mM ATP e 25 mM di cloruro di magnesio. I saggi vengono iniziati con 1 nM del dominio chinasi CHK1. L'inibizione dell'attività di CHK1 è determinata misurando le velocità iniziali in presenza di concentrazioni variabili di questo composto. I dati vengono analizzati utilizzando il software Enzyme Kinetic ed Excel e adattati a un modello cinetico per l'inibizione competitiva per ottenere un valore di Ki. La selettività chinasi di questa sostanza chimica viene valutata mediante screening a 1 μM o 10 μM contro un panel di circa 100 proteine chinasi.
In vivo

PF-477736 (4 mg/kg i.v.) results in terminal half-life (T1/2) of 2.9 hours, AUC of 5.72 μg×hr/mL and CLp of 11.8 mL/min/kg in rats. This compound dose-dependently enhances the antitumor activity of a maximum tolerated dose in the Colo205 xenograft mouse model. This chemical (12 mg/kg) induces an increase in the phosphorylation of histone H3 (Ser10) and of phospho-histone H2AX in the Colo205 xenograft mouse model. This compound (15 mg/kg i.p.) enhances induced tumor growth inhibition and tumor growth delay in COLO205 and MDA-MB-231 xenograft models. This chemical (10 mg/kg once daily i.p.) combined with MK-1775 (30 mg/kg twice a day oral) leads to greater tumor growth inhibition in mice bearing OVCAR-5 xenografts.

Riferimenti
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22713237/

Applicazioni (Applications)

Metodi Biomarcatori Immagini PMID
Growth inhibition assay Cell viability
S2904-viability1
29167438
Western blot p-ATM / γ-H2AX p-53 / p-p53 / p21 / MDM2
S2904-WB2
31362335
Immunofluorescence p-p53
S2904-IF1
31362335

Informazioni sullo studio clinico (Clinical Trial Information)

(dati da https://clinicaltrials.gov, aggiornato il 2024-05-22)

Numero NCT Reclutamento Condizioni Sponsor/Collaboratori Data di inizio Fasi
NCT00437203 Terminated
Neoplasms
Pfizer
 December 2006 Phase 1

Domande Frequenti (Frequently Asked Questions)

Domanda 1:
Can you advise the vehicle suggested for S2904: 2% DMSO/40% PEG 300 at 5mg/ml, is it a suspension or clear solution? I wanted to know how to dissolve it for an i.p. injection in mice.

Risposta:
It can dissolve in 2% DMSO/40% PEG 300 at 5mg/ml as a clear solution. If you are going to use this kind of vehicle, please dissolve this compound in DMSO clearly first, then add PEG300, then water.