PF-477736

PF-477736 (128 nM) abroga il checkpoint del danno al DNA indotto dalla camptotecina in modo dose-dipendente nelle cellule CA46 e HeLa. Questo composto abroga efficacemente l'arresto della fase S indotto da con un corrispondente aumento delle popolazioni di cellule apoptotiche nelle cellule HT29. Questa sostanza chimica (540 nM) aumenta la citotossicità indotta da in modo tempo- e dose-dipendente nelle cellule HT29. Potenzia l'attività inibitoria della crescita di un panel di agenti chemioterapici in un ampio spettro di linee cellulari tumorali umane deficienti di p53 nel saggio MTT. L'aggiunta di questo composto (360 nM) alle cellule arrestate da induce un aumento drammatico dell'intensità della fosforilazione di H2AX, riflettendo un maggior numero di molecole di γ-H2AX vicino ai siti di danno al DNA. [1] Questa sostanza chimica (0,5 nM) blocca selettivamente la fosforilazione di p73 e P53 in presenza di curcumina nelle cellule HL-60. [2] Esso (360 nM) sopprime la fosforilazione indotta da dell'istone H3 (Ser10) e di Cdc25C (Ser216) e potenzia l'apoptosi nelle cellule COLO205. [3] Questo composto (250 nM) combinato con MK-1775 ha una marcata attività citotossica sinergica nelle cellule OVCAR-5. Esso (250 nM) combinato con MK-1775 provoca l'accumulo di cellule con un contenuto di DNA tra 2N e 4N nelle cellule OVCAR-5. Questa sostanza chimica (250 nM) combinata con MK-1775 provoca una mitosi prematura prima della fine della replicazione del DNA, con DNA danneggiato che porta alla morte cellulare apoptotica nelle cellule OVCAR-5. [4]

PF-477736 (4 mg/kg e.v.) determina un'emivita terminale (T1/2) di 2,9 ore, un'AUC di 5,72 μg×hr/mL e un CLp di 11,8 mL/min/kg nei ratti. Questo composto potenzia in modo dose-dipendente l'attività antitumorale di una dose massima tollerata nel modello murino di xenotrapianto Colo205. Questa sostanza chimica (12 mg/kg) induce un aumento della fosforilazione dell'istone H3 (Ser10) e della fosfo-istone H2AX nel modello murino di xenotrapianto Colo205. [1] Questo composto (15 mg/kg i.p.) potenzia l'inibizione della crescita tumorale indotta e il ritardo della crescita tumorale nei modelli di xenotrapianto COLO205 e MDA-MB-231. [3] Questa sostanza chimica (10 mg/kg una volta al giorno i.p.) combinata con MK-1775 (30 mg/kg due volte al giorno per via orale) porta a una maggiore inibizione della crescita tumorale nei topi portatori di xenotrapianti OVCAR-5. [4]

• Saggio di legame

  Il saggio viene eseguito in una piastra a 96 pozzetti per 20 minuti a 30℃ in 0,1 mL di tampone di saggio contenente 50 mM TRIS pH 7,5, 0,4 M NaCl, 4 mM PEP, 0,15 mM NADH, 28 unità di lattato deidrogenasi/mL, 16 unità di piruvato chinasi/mL, 3 mM DTT, 0,125 mM Syntide-2, 0,15 mM ATP e 25 mM di cloruro di magnesio. I saggi vengono iniziati con 1 nM del dominio chinasi CHK1. L'inibizione dell'attività di CHK1 è determinata misurando le velocità iniziali in presenza di concentrazioni variabili di questo composto. I dati vengono analizzati utilizzando il software Enzyme Kinetic ed Excel e adattati a un modello cinetico per l'inibizione competitiva per ottenere un valore di Ki. La selettività chinasi di questa sostanza chimica viene valutata mediante screening a 1 μM o 10 μM contro un panel di circa 100 proteine chinasi.

• Linee cellulari

  HT29, Colo205, PC-3, MDA-MB-231 and K562 cells

• Concentrazioni

  ~1 μM

• Tempo di incubazione

  96 hours

• Metodo

  The IC50 assay measures the antiproliferative effects of PF-477736 on p53-defective human cancer cell lines. Cells in each line are seeded in complete medium at an exponentially growing density in 96-well assay plate and allowed to attach for 16 hours. Serial dilutions of this compound are then done, and appropriate controls are added to each plate. Cells are incubated with drug for 96 hours. After incubation, MTT working stock diluted in complete medium is added to each well, and cells are incubated for 4 hours. After centrifugation and supernatant removal, DMSO is added to each well and plates are read on SpectraMax plate reader at 540 nm.

• Modelli animali

  Colo205 xenograft mouse model

• Dosaggi

  40 mg/kg

• Somministrazione

  intravenous injection