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CHIR-124 Chk inibitore

N. Cat.S2683

CHIR-124 è un nuovo e potente inibitore di Chk1 con un IC50 di 0,3 nM in un saggio senza cellule. Mostra una selettività 2.000 volte superiore contro Chk2 e un'attività da 500 a 5.000 volte inferiore contro CDK2/4 e Cdc2.
CHIR-124 Chk inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 419.91

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Controllo Qualità

Lotto: Purezza: 99.48%
99.48

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dellattività PMID
human MDA-MB-435 cells Cytotoxic assay Cytotoxicity against human MDA-MB-435 cells, EC50=0.08 μM
human MDA-MB-435 cells Cytotoxic assay Cytotoxicity against human MDA-MB-435 cells in presence of camptothecin
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità

Peso molecolare 419.91 Formula

C23H22ClN5O

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 405168-58-3 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi N/A Smiles C1CN2CCC1C(C2)NC3=C(C(=O)NC4=C3C=C(C=C4)Cl)C5=NC6=CC=CC=C6N5

Solubilità

In vitro
Lotto:

DMSO : Insoluble
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante lesperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non cè una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nellaggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere allaggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno dacqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo dazione

Targets/IC50/Ki
Chk1
(Cell-free assay)
0.3 nM
FLT3
(Cell-free assay)
5.8 nM
PDGFR
(Cell-free assay)
6.6 nM
GSK-3
(Cell-free assay)
23.3 nM
In vitro

CHIR-124 è una piccola molecola a base di chinolone strutturalmente non correlata ad altri inibitori noti di Chk1. Questo composto interagisce sinergicamente con i veleni della topoisomerasi (ad esempio, Camptotecina o SN-38) nel causare l'inibizione della crescita in una varietà di linee cellulari tumorali, inclusi il carcinoma mammario (MDA-MB-231 e MDA-MB-435) e il carcinoma del colon (SW-620 e Colo205), tutte contenenti il gene p53 mutato. Esso abroga i Cell Cycle Checkpoints S e G2-M indotti da SN-38 e potenzia l'apoptosi nelle cellule di cancro al seno MDA-MD-435. L'abrogazione del Cell Cycle Checkpoint G2-M e l'induzione dell'apoptosi da parte di questa sostanza chimica sono aumentate dalla perdita di p53. Questo composto mira potentemente anche ad altre chinasi come PDGFR e Flt3 con IC50 di 6,6 nM e 5,8 nM, rispettivamente.

Saggio chinasico
Chk1 Assay
Per il saggio Chk1, il dominio chinasico è espresso in cellule di insetto Sf9 e un peptide cdc25c biotinilato contenente il sito di fosforilazione consenso Chk1/Chk2 (*) (biotin-[AHX]SGSGS*GLYRSPSMP-ENLNRPR[CONH2]) è usato come substrato. Una serie di diluizioni di CHIR-124 viene miscelata con un tampone di reazione chinasica contenente una concentrazione finale di 30 mM Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 2 mM DTT, 4 mM EDTA, 25 mM β-glicerofosfato, 5 mM MnCl2, 0,01% di albumina sierica bovina, 1,35 nM di dominio chinasico CHK1, 0,5 μM di substrato peptidico e 1 AM di ATP non marcato, più 5 nM di ATP marcato con 33Pγ (attività specifica = 2.000 Ci/mmol). Le reazioni e la rilevazione del trasferimento di fosfato sono eseguite con un metodo radioattivo. Le reazioni sono incubate a temperatura ambiente per 1-4 ore e il peptide fosforilato è catturato su piastre a micropozetti rivestite di streptavidina contenenti tampone di arresto della reazione (25 mM EDTA [acido etilendiamminotetraacetico], 50 mM HEPES, pH 7,5). Il peptide fosforilato viene misurato con il sistema DELFIA TRF utilizzando un anticorpo anti-fosfotirosina PT66 marcato con Europio. La concentrazione di questo composto per l'IC50 viene calcolata utilizzando la regressione non lineare con il software di analisi dei dati XL-Fit.
In vivo

CHIR-124 potenzia gli effetti inibitori della crescita abrogando il Cell Cycle Checkpoint G2-M e aumentando l'apoptosi tumorale in un modello di xenotrapianto ortotopico di cancro al seno.
Riferimenti

Supporto tecnico

Istruzioni per la manipolazione

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

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