ZM 336372 Raf inibitore

ZM 336372 mostra una selettività 10 volte superiore rispetto a B-Raf. Questo composto inibisce debolmente SAPK2a/p38α e SAPK2b/p38β con IC50 di 2 μM, ed è selettivo rispetto ad altre 17 protein chinasi tra cui PKA, PKC, AMPK, p42 MAPK, MKK1, SAPK1/JNK e CDK1, anche a concentrazioni fino a 50 μM. Non previene l'attivazione costitutiva, così come l'attivazione indotta da fattori di crescita o esteri di forbolo di MKKl o p42 MAPK/ERK2. Inoltre, questa sostanza chimica non inverte il fenotipo delle linee cellulari trasformate da Ras o Raf. Il suo trattamento induce un'attivazione >100 di c-Raf e dell'isoforma B-Raf, ma non innesca alcuna attivazione di MKKI o p42 MAPK/ERKP né induce alcun aumento del carico di GTP di Ras, suggerendo l'esistenza di un ciclo di controllo a feedback attraverso il quale le isoforme di Raf sopprimono la propria attivazione, in modo tale che l'inibizione sia sempre controbilanciata dalla riattivazione. L'attivazione di c-Raf indotta da questo composto non è prevenuta dall'inibizione della cascata MAPK, della protein chinasi C o della fosfatidilinositide 3-chinasi. [1] Esso (1 μM) abolisce la sovraregolazione dell'eNOS dopo il trattamento con perossido di idrogeno. [2] Il suo trattamento nelle cellule tumorali carcinoidi si traduce in una fosforilazione progressiva di Raf-1, della chinasi 1/2 attivata da mitogeni e della chinasi 1/2 regolata dal segnale extracellulare, e provoca una significativa riduzione dei livelli di ormoni bioattivi, nonché del fattore di trascrizione, l'omologo umano achaete-scute-1. Inoltre, questo trattamento chimico porta a una marcata soppressione della proliferazione cellulare e all'induzione degli inibitori del ciclo cellulare p21 e p18. [3] Inibisce la proliferazione delle cellule di feocromocitoma e sopprime la produzione di peptide vasoattivo NE. [4] Il suo trattamento in HepG2 induce la soppressione della proliferazione in modo dose-dipendente, la soppressione della secrezione ormonale e la sovraregolazione degli inibitori del ciclo cellulare. [5] Induce anche l'apoptosi nelle linee cellulari di adenocarcinoma pancreatico inibendo la glicogeno sintasi chinasi-3β attraverso la fosforilazione di GSK-3β a Ser 9. [6]

Saggio chinasico in vitro

L'attività chinasica di c-Raf viene saggiata direttamente nei lisati cellulari Sl9. La c-Raf umana viene attivata nelle cellule Sf9 mediante cotrasfezione da vettori di baculovirus contenenti DNA che codifica v-Ras e Lck in assenza di ZM 336372. I lisati cellulari vengono quindi saggiati per l'attività di c-Raf in presenza di concentrazioni crescenti di questo composto.