Name: RAF265 (CHIR-265)
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S2161
Rating: 5 (24 reviews)

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Controllo Qualità

Lotto: Purezza: 99.98%

99.98

Target correlati	ERK p38 MAPK JNK MEK Ras KRas S6 Kinase MAP4K TAK1 Mixed Lineage Kinase
Altro Raf Inibitori	LY3009120 Exarafenib (KIN-2787) GDC-0879 Avutometinib (Ro5126766, CH5126766) PLX-4720 AZ 628 SB590885 TAK-632 GW5074 PLX8394 (Plixorafenib, FORE8394)

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro

Linee cellulari	Tipo di saggio	Concentrazione	Tempo di incubazione	Descrizione dellattività	PMID
SK-MEL-28	Growth inhibition assay			Growth inhibition of SK-MEL-28 cells, IC50=0.14μM.	21576023
MALME-3M	Growth inhibition assay			Growth inhibition of MALME-3M cells, IC50=0.14μM.	21576023
A375M	Growth inhibition assay			Growth inhibition of A375M cells, IC50=0.14μM.	21576023
A375	Function assay			Inhibition of B-RAF V600E mutant in human A375 cells assessed as phosphorylation of ERK, IC50=0.04μM.	26396681
Malme-3M	Function assay			Inhibition of B-RAF V600E mutant in human Malme-3M cells assessed as phosphorylation of ERK, IC50=0.04μM.	26396681
WM-1799	Function assay			Inhibition of B-RAF V600E mutant in human WM-1799 cells assessed as phosphorylation of ERK, IC50=0.04μM.	26396681
MALME-3M	Antiproliferative assay			Antiproliferative activity against human MALME-3M cells harboring B-RAF V600E mutant, IC50=0.04μM.	26396681
A375	Antiproliferative assay			Antiproliferative activity against human A375 cells harboring B-RAF V600E mutant, IC50=0.04μM.	26396681
WM1799	Antiproliferative assay			Antiproliferative activity against human WM1799 cells harboring B-RAF V600E mutant, IC50=0.04μM.	26396681
SK-MEL-28	Function assay			Inhibition of B-RAF V600E mutant in human SK-MEL-28 cells assessed as phosphorylation of ERK, IC50=0.14μM.	26396681
SK-MEL-28	Antiproliferative assay			Antiproliferative activity against human SK-MEL-28 cells harboring B-RAF V600E mutant, IC50=0.16μM.	26396681
A375M	Function assay	100 mg/kg		fCmin in mouse xenografted with human A375M cells at 100 mg/kg, po q2d, fCmin=0.5μM.	26396681
A375M	Function assay	100 mg/kg	48 hrs	Inhibition of B-RAF V600E mutant in mouse xenografted with human A375M cells assessed as reduction of phospho-MEK level in tumor at 100 mg/kg, po q24 after 48 hrs by Western blot analysis	26396681
A375M	Function assay	100 mg/kg	48 hrs	Inhibition of B-RAF V600E mutant in mouse xenografted with human A375M cells assessed as reduction of phospho-MEK level in tumor at 100 mg/kg, po q2d after 48 hrs by Western blot analysis	26396681
A375M	Function assay	30 to 100 mg/kg	4 hrs	Inhibition of B-RAF V600E mutant in mouse xenografted with human A375M cells assessed as reduction of phospho-MEK level in tumor at 30 to 100 mg/kg, po q2d measured after 4 hrs post-third dose by Western blot analysis	26396681
A375M	Antitumor assay	10 to 100 mg/kg	30 days	Antitumor activity against human A375M cells xenografted in mouse assessed as tumor regression at 10 to 100 mg/kg, po q2d measured up to 30 days	26396681
TC32	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for TC32 cells	29435139
DAOY	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for DAOY cells	29435139
SJ-GBM2	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SJ-GBM2 cells	29435139
A673	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for A673 cells	29435139
SK-N-MC	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-MC cells	29435139
BT-37	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for BT-37 cells	29435139
NB-EBc1	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB-EBc1 cells	29435139
U-2 OS	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for U-2 OS cells	29435139
Saos-2	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Saos-2 cells	29435139
SK-N-SH	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-SH cells	29435139
NB1643	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB1643 cells	29435139
LAN-5	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for LAN-5 cells	29435139
BT-12	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for BT-12 cells	29435139
RD	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for RD cells	29435139
NB1643	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for NB1643 cells	29435139
SK-N-MC	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for SK-N-MC cells	29435139
LAN-5	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for LAN-5 cells	29435139
NB-EBc1	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for NB-EBc1 cells	29435139
BT-37	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for BT-37 cells	29435139
TC32	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for TC32 cells	29435139
MG 63 (6-TG R)	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for MG 63 (6-TG R) cells	29435139
VERO-E6	Function assay		48 hrs	Toxicity CC50 against VERO-E6 cells determined at 48 hours by high content imaging (same conditions as 2_LEY without exposure to 0.01 MOI SARS CoV-2 virus), CC50=9.19μM.	ChEMBL
VERO-E6	Function assay		48 hrs	Determination of IC50 values for inhibition of SARS-CoV-2 induced cytotoxicity of VERO-E6 cells after 48 hours exposure to 0.01 MOI SARS CoV-2 virus by high content imaging, IC50=14.64μM.	ChEMBL
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità

Peso molecolare	518.41	Formula	C₂₄H₁₆F₆N₆O	Conservazione (Dalla data di ricezione)	3 anni-20°Cpolvere
N. CAS	927880-90-8	Scarica SDF		Conservazione delle soluzioni stock	1 anno-80°Cin solvente 1 mese-20°Cin solvente
Sinonimi	N/A			Smiles	CN1C2=C(C=C(C=C2)OC3=CC(=NC=C3)C4=NC=C(N4)C(F)(F)F)N=C1NC5=CC=C(C=C5)C(F)(F)F

Solubilità

In vitro
Lotto:

DMSO : 100 mg/mL (192.89 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Ethanol : 33 mg/mL

Water : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa	Concentrazione	Volume	Peso molecolare
=	×	×

Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo Lotto:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	30%PEG400 1 0.5%Tween80 2 5%propylene glycol Validato dai laboratori Selleck. Se necessiti di modifiche a questa formulazione, contatta il nostro team di vendita per test personalizzati.	30.000mg/ml (57.87mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 300 μL of 100 mg/ml clarified PEG400 stock solution to 5 μL of Tween80, mix evenly to clarify it; add 50 μL Propylene glycol to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 645 μL ddH2O to adjust the volume. to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante lesperimento)

Dosaggio: mg/kg Peso medio degli animali: g Volume di dosaggio per animale:μL Numero di animali:

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non cè una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH₂O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nellaggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere allaggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno dacqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo dazione

Targets/IC₅₀/Ki	VEGFR2 (Cell-free assay) 30 nM(EC50) B-Raf (Cell-free assay) 3 nM-60 nM
In vitro	RAF265 (CHIR-265) inibisce C-Raf, il B-Raf di tipo selvatico e il B-Raf mutante (V600E). Questo composto blocca efficacemente la fosforilazione dei substrati a valle di Raf, MEK ed ERK nelle cellule e uccide anche le linee cellulari di melanoma e cancro colorettale che presentano mutazioni di B-Raf indipendentemente dallo stato di mutazione di PTEN. L'inibizione della chinasi Raf da parte di questo agente nelle linee cellulari di melanoma con B-Raf mutato provoca l'arresto del ciclo cellulare e induce l'apoptosi, mimando l'effetto dell'RNAi di Raf in queste cellule. Inibisce anche potentemente la fosforilazione di VEGFR2 e la proliferazione delle hMVEC stimolate dal VEGF. Nelle cellule HT29 e MDAMB231, questa sostanza chimica mostra attività inibitoria con IC20 da 1 a 3 μM e IC50 da 5 a 10 μM, rispettivamente. Mentre porta a una significativa diminuzione della sopravvivenza clonogenica in tutte le linee cellulari testate, il che significa che questo composto induce un effetto dominante sulla sopravvivenza clonogenica. L'aggiunta di questo agente a RAD001 nelle cellule HCT116 potrebbe portare a una fosforilazione moderatamente ridotta di AKT, della proteina S6 e di 4EBP1. Riduce marcatamente il livello proteico di Bcl-2 ed è fortemente inibitorio nelle cellule CM e NCI-H727, pur non avendo alcun effetto sulla suscettibilità al TRAIL delle cellule BON1 e GOT1. La proteina chinasi D3 (PRKD3) che, quando silenziata, potrebbe aumentare l'uccisione cellulare da parte di questo composto nelle cellule di melanoma A2058, il che previene la riattivazione della segnalazione MAPK, induce la scissione di PARP, aumenta l'attività della caspasi, interrompe la progressione del ciclo cellulare e inibisce la formazione di colonie.
Saggio chinasico	Protocollo del Saggio
Saggio chinasico	Raf e Mek vengono combinati a 2 × concentrazioni finali in tampone di saggio (50 mM Tris, pH 7,5, 15 mM MgCl₂. 0,1 mM EDTA e 1 mM DTT) e dispensati 15 μL per pozzetto in piastre di saggio in polipropilene. I livelli di fondo sono determinati in pozzetti contenenti Mek e DMSO senza Raf. Ai pozzetti contenenti Raf/Mek vengono aggiunti 3 μL di 10 × di questo composto diluito in 100% DMSO. La reazione di attività della chinasi raf viene avviata con l'aggiunta di 12 μL per pozzetto di 2,5 × ³³P-ATP diluito in tampone di saggio. Dopo 45-60 minuti, le reazioni vengono interrotte con l'aggiunta di 70 μL di reagente di arresto (30 mM EDTA). Le piastre di filtrazione vengono pre-bagnate per 5 minuti con etanolo al 70%, quindi risciacquate per filtrazione con tampone di lavaggio. Campioni (90 μL) dai pozzetti di reazione vengono quindi trasferiti alle piastre di filtrazione. Le piastre di filtrazione vengono lavate 6 × con tampone di lavaggio utilizzando un apparecchio di filtrazione Millipore. Le piastre vengono asciugate e vengono aggiunti 100 μL per pozzetto di liquido scintillatore. Il CPM viene quindi determinato utilizzando un lettore Wallac Microbeta 1450.
In vivo	RAF265 (CHIR-265) mostra dal 71% al 72% di TVI% (percentuale di inibizione del volume tumorale) in xenotrapianti HCT116 a 12 mg/kg. Mentre la combinazione di questo composto e RAD001 mostra un'attività antitumorale potenziata con un aumento di T10 (tempo per raggiungere un volume tumorale relativo di 10 volte il volume tumorale iniziale) e un ritardo nella crescita del tumore. La combinazione di RAD001 e di questa sostanza chimica potenzia anche significativamente l'attivazione della caspasi-3 in xenotrapianti HCT116 e MDAMB231 ma non in xenotrapianti A549. Questo composto inibisce l'accumulazione di FDG (2-desossi-2-[¹⁸F]fluoro-d-glucosio) e diminuisce i volumi tumorali in xenotrapianti A375M con una dose orale di 100 mg/kg.
Riferimenti	[1] http://www.aacrmeetingabstracts.org/cgi/content/meeting_abstract/2008/1_Annual_Meeting/4876 [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20124452/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21317202/ [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21527556/ [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21390189/

Informazioni sullo studio clinico

(dati da https://clinicaltrials.gov, aggiornato il 2024-05-22)

Numero NCT	Reclutamento	Condizioni	Sponsor/Collaboratori	Data di inizio	Fasi
NCT01352273	Completed	Advanced Solid Tumors	Array Biopharma now a wholly owned subsidiary of Pfizer\|Array BioPharma	June 2011	Phase 1

Supporto tecnico

Istruzioni per la manipolazione

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Per qualsiasi altra domanda, si prega di lasciare un messaggio.

C1=C0/X	C1:	LOG(C1):
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C8=C7/X	C8:	LOG(C8):

RAF265 (CHIR-265) Raf inibitore

Struttura chimica

Peso molecolare: 518.41