RAF265 (CHIR-265)

N. catalogoS2161 Lotto:S216101

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Dati tecnici

Formula

C24H16F6N6O
Peso molecolare 518.41 Numero CAS 927880-90-8
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (192.89 mM)
Ethanol 33 mg/mL (63.65 mM)
Water Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione RAF265 (CHIR-265) è un potente inibitore selettivo di C-Raf/B-Raf/B-Raf V600E con IC50 di 3-60 nM, ed esibisce una potente inibizione della fosforilazione di VEGFR2 con EC50 di 30 nM in saggi acellulari. Questo composto induce l'arresto del ciclo cellulare e l'apoptosi. Fase 2.
Target
VEGFR2
(Cell-free assay)		 B-Raf
(Cell-free assay)
30 nM(EC50) 3 nM-60 nM
In vitro RAF265 (CHIR-265) inibisce C-Raf, il B-Raf di tipo selvatico e il B-Raf mutante (V600E). Questo composto blocca efficacemente la fosforilazione dei substrati a valle di Raf, MEK ed ERK nelle cellule e uccide anche le linee cellulari di melanoma e cancro colorettale che presentano mutazioni di B-Raf indipendentemente dallo stato di mutazione di PTEN. L'inibizione della chinasi Raf da parte di questo agente nelle linee cellulari di melanoma con B-Raf mutato provoca l'arresto del ciclo cellulare e induce l'apoptosi, mimando l'effetto dell'RNAi di Raf in queste cellule. Inibisce anche potentemente la fosforilazione di VEGFR2 e la proliferazione delle hMVEC stimolate dal VEGF. Nelle cellule HT29 e MDAMB231, questa sostanza chimica mostra attività inibitoria con IC20 da 1 a 3 μM e IC50 da 5 a 10 μM, rispettivamente. Mentre porta a una significativa diminuzione della sopravvivenza clonogenica in tutte le linee cellulari testate, il che significa che questo composto induce un effetto dominante sulla sopravvivenza clonogenica. L'aggiunta di questo agente a RAD001 nelle cellule HCT116 potrebbe portare a una fosforilazione moderatamente ridotta di AKT, della proteina S6 e di 4EBP1. Riduce marcatamente il livello proteico di Bcl-2 ed è fortemente inibitorio nelle cellule CM e NCI-H727, pur non avendo alcun effetto sulla suscettibilità al TRAIL delle cellule BON1 e GOT1. La proteina chinasi D3 (PRKD3) che, quando silenziata, potrebbe aumentare l'uccisione cellulare da parte di questo composto nelle cellule di melanoma A2058, il che previene la riattivazione della segnalazione MAPK, induce la scissione di PARP, aumenta l'attività della caspasi, interrompe la progressione del ciclo cellulare e inibisce la formazione di colonie.
In vivo RAF265 (CHIR-265) mostra dal 71% al 72% di TVI% (percentuale di inibizione del volume tumorale) in xenotrapianti HCT116 a 12 mg/kg. Mentre la combinazione di questo composto e RAD001 mostra un'attività antitumorale potenziata con un aumento di T10 (tempo per raggiungere un volume tumorale relativo di 10 volte il volume tumorale iniziale) e un ritardo nella crescita del tumore. La combinazione di RAD001 e di questa sostanza chimica potenzia anche significativamente l'attivazione della caspasi-3 in xenotrapianti HCT116 e MDAMB231 ma non in xenotrapianti A549. Questo composto inibisce l'accumulazione di FDG (2-desossi-2-[18F]fluoro-d-glucosio) e diminuisce i volumi tumorali in xenotrapianti A375M con una dose orale di 100 mg/kg.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Protocollo del Saggio

    Raf e Mek vengono combinati a 2 × concentrazioni finali in tampone di saggio (50 mM Tris, pH 7,5, 15 mM MgCl2. 0,1 mM EDTA e 1 mM DTT) e dispensati 15 μL per pozzetto in piastre di saggio in polipropilene. I livelli di fondo sono determinati in pozzetti contenenti Mek e DMSO senza Raf. Ai pozzetti contenenti Raf/Mek vengono aggiunti 3 μL di 10 × di questo composto diluito in 100% DMSO. La reazione di attività della chinasi raf viene avviata con l'aggiunta di 12 μL per pozzetto di 2,5 × 33P-ATP diluito in tampone di saggio. Dopo 45-60 minuti, le reazioni vengono interrotte con l'aggiunta di 70 μL di reagente di arresto (30 mM EDTA). Le piastre di filtrazione vengono pre-bagnate per 5 minuti con etanolo al 70%, quindi risciacquate per filtrazione con tampone di lavaggio. Campioni (90 μL) dai pozzetti di reazione vengono quindi trasferiti alle piastre di filtrazione. Le piastre di filtrazione vengono lavate 6 × con tampone di lavaggio utilizzando un apparecchio di filtrazione Millipore. Le piastre vengono asciugate e vengono aggiunti 100 μL per pozzetto di liquido scintillatore. Il CPM viene quindi determinato utilizzando un lettore Wallac Microbeta 1450.
Saggio cellulare:[2]
  • Linee cellulari

    Human A549 and H460 lung, HT29 and HCT 116 colon, and MDAMB231 breast cancer cell lines

  • Concentrazioni

    0.1 - 10 μM

  • Tempo di incubazione

    48 hours

  • Metodo

    The MTT assay and Bliss additivism model are used to assess the effect of RAF265 (CHIR-265) on cell viability. In each well of a 96-well plate, 1 × 104 cells are grown in 200 μL of medium. After 24 hours, this compound is added to achieve a final concentration of 0.1 to 10 μM. After 48 hours of treatment, 20 μL of 5 mg/mL MTT solution in PBS is added to each well. After 4 hours, supernatant is removed and formazan crystals are discarded in 200 μL of DMSO. Absorbance is then measured at 595 nm using an absorbance plate reader. Data are expressed as the percentage of viable cells.
Studio sugli animali:[2]
  • Modelli animali

    A549, H460, HCT116, or MDAMB231 cells are injected s.c. into the flank region of 6-wk-old female athymic mice.

  • Dosaggi

    12 mg/kg

  • Somministrazione

    Orally administered daily

Riferimenti

  • http://www.aacrmeetingabstracts.org/cgi/content/meeting_abstract/2008/1_Annual_Meeting/4876
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20124452/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21317202/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21527556/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21390189/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>Immunoblots showing levels of phospho-MEK (p-MEK), total MEK (t-MEK), phospho-ERK1/2 (p-ERK1/2) and total ERK1/2 (t-ERK1/2) in A375 cells transduced with a retrovirus expressing BRAFV600E, BRAFV600E/L505H, BRAFV600E/F516G or BRAFV600E/T529N and treated with increasing doses of RAF265. α-tubulin (TUBA) was monitored as a loading control.</p>

Dati da [ Pigment Cell Melanoma Res , 2014 , 27(1), 124-33 ]

Raf265 inhibited the kinase activity of B-Raf but not of Raf-1 in Pkd2cKO cholangiocytes. Cells were treated for 30 min with different concentrations of Raf265. B-Raf and Raf-1 were immunoprecipated as described in the methods section and a kinase assay in vitro was performed using MEK as a substrate. The kinase activity of Raf was assessed by immunoblot analysis and quantified as optical density of pMEK with respect to untreated cells. In WT cholangiocytes (A) Raf265 inhibited both B-Raf and Raf-1 kinase activity. In Pkd2cKO cholangiocytes (B), Raf265 inhibited only B-Raf while a biphasic effect was found in Raf-1 with a significant increase at doses from 0.001 to 1 uM and a significant inhibition at 10 uM. Blots are representative of four different experiments. (*p<0.05 vs controls; **p<0.001 vs controls).

Dati da [ Hepatology , 2012 , 56(6), 2363-74 ]

LS513 cells were treated with increasing concentrations of selumetinib or selumetinib combined with different concentration of RAF265 for 48 hr. Lysates were subjected to western blot analyses, and membranes were probed with the indicated antibodies. Vinculin was included as a loading control.

Dati da [ , , Cell Rep, 2014, 8(5):1475-83 ]

Wild-type fetal liver-derived cells were differentiated for 2 days in culture. Kinase inhibitors (A-674563 and RAF265; concentrations are listed in Materials and Methods) were added during the final 14 h of culture.

Dati da [ , , Mol Cell Biol, 2016, 37(1) ]

Sellecks RAF265 (CHIR-265) È stato citato da 24 Pubblicazioni

A structure-based modelling approach identifies effective drug combinations for RAS-mutant acute myeloid leukemia [ bioRxiv, 2025, 2025.04.29.651188] PubMed: 40654850
Integrative analysis of drug response and clinical outcome in acute myeloid leukemia [ Cancer Cell, 2022, S1535-6108(22)00312-9] PubMed: 35868306
Comprehensive drug response profiling and pan-omic analysis identified therapeutic candidates and prognostic biomarkers for Asian cholangiocarcinoma [ iScience, 2022, 25(10):105182] PubMed: 36248745
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575] PubMed: 35326726
B-Raf inhibitor vemurafenib counteracts sulfur mustard-induced epidermal impairment through MAPK/ERK signaling [ Drug Chem Toxicol, 2022, 1-10] PubMed: 34986718
RAF1 amplification drives a subset of bladder tumors and confers sensitivity to MAPK-directed therapeutics [ J Clin Invest, 2021, e147849] PubMed: 34554931
SHOC2 phosphatase-dependent RAF dimerization mediates resistance to MEK inhibition in RAS-mutant cancers. [ Nat Commun, 2019, 10(1):2532] PubMed: 31182717
RAF kinases are stabilized and required for dendritic cell differentiation and function. [ Cell Death Differ, 2019, 10.1038/s41418-019-0416-4] PubMed: 31541179
Genetic Heterogeneity of BRAF Fusion Kinases in Melanoma Affects Drug Responses. [ Cell Rep, 2019, 29(3):573-588] PubMed: 31618628
Mitochondrial metabolic reprograming via BRAF inhibition ameliorates senescence. [ Exp Gerontol, 2019, 126:110691] PubMed: 31421186

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