Home Protein Tyrosine Kinase c-Met inhibitor PF-04217903

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PF-04217903 c-Met inhibitor

N. Cat.: S1094

PF-04217903 is a selective ATP-competitive c-Met inhibitor with IC50 of 4.8 nM in A549 cell line, susceptible to oncogenic mutations (no activity to Y1230C mutant). Phase 1.
PF-04217903 c-Met inhibitor Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 372.38

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.99%
99.99

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
human A549 cells Function assay 1 h Antagonist activity at c-MET receptor in human A549 cells assessed as inhibition of autophosphorylation after 1 hr by ELISA, IC50=4 nM
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 372.38 Formula

C19H16N8O

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 956905-27-4 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi N/A Smiles C1=CC2=C(C=CC(=C2)CN3C4=NC(=CN=C4N=N3)C5=CN(N=C5)CCO)N=C1

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 74 mg/mL (198.72 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
c-Met
(A549 cells)
4.8 nM
In vitro
Essendo più selettivo della staurosporina o del PF-02341066, il PF-04217903 mostra una selettività >1000 volte superiore per c-Met rispetto a un pannello di 208 chinasi, sebbene sia più suscettibile alle mutazioni oncogeniche di c-Met che attenuano la potenza rispetto al PF-02341066. Oltre al WT c-Met, questo composto mostra una potenza simile nell'inibire l'attività di c-Met-H1094R, c-Met-R988C e c-Met-T1010I con IC50 rispettivamente di 3,1 nM, 6,4 nM e 6,7 nM, ma non ha attività inibitoria contro c-Met-Y1230C con un IC50 >10 μM. Questa sostanza chimica in combinazione con sunitinib inibisce significativamente le cellule endoteliali, ma non le cellule tumorali B16F1, Tib6, EL4 e LLC Inibisce significativamente la crescita clonogenica di LXFA 526L e LXFA 1647L con valori di IC50 rispettivamente di 16 nM e 13 nM, producendo un effetto additivo quando combinato con cetuximab. Questo composto inibisce potentemente i processi guidati da c-Met come la crescita cellulare, la motilità, l'invasione e la morfologia di una varietà di cellule tumorali. Il suo trattamento (2 μM) ha aumentato la morte cellulare delle cellule GTL-16, che comporta la sottoregolazione della 4E-BP1 fosforilata, delle proteine associate a ERK/MAPK e della via PI3K/AKT.
Saggio chinasico
ELISA per la fosforilazione di c-Met cellulare
Le cellule A549 con c-Met umana WT endogena vengono seminate in piastre da 96 pozzetti in terreno di crescita e coltivate durante la notte. Il secondo giorno del saggio, il terreno di crescita viene sostituito con terreno privo di siero (con 0,04% di BSA). Diluizioni seriali di questo composto vengono aggiunte a ciascun pozzetto e le cellule vengono incubate a 37 °C per 1 ora. Quindi, vengono aggiunti 40 ng/mL di HGF alle cellule per 20 minuti. Le cellule vengono lavate una volta con HBSS integrato con 1 mM di Na3VO4 e i lisati proteici vengono generati dalle cellule utilizzando un tampone di lisi. La fosforilazione di c-Met viene valutata mediante un metodo ELISA che utilizza anticorpi di cattura specifici per c-Met e un anticorpo di rilevamento specifico per residui di tirosina fosforilati. Le piastre rivestite di anticorpi vengono incubate in presenza dei lisati proteici a 4 °C durante la notte e lavate sette volte con Tween 20 all'1% in PBS. L'HRP-PY20 (anti-fosfotirosina coniugato con perossidasi di rafano) viene diluito 1:500 in tampone di bloccaggio e aggiunto a ciascuna piastra per 30 minuti. Le piastre vengono quindi lavate di nuovo e viene aggiunto il substrato perossidasi TMB per avviare la reazione colorimetrica dipendente dall'HRP; la reazione viene interrotta mediante l'aggiunta di 0,09 N di H2SO4. I punti finali ELISA sono l'assorbanza misurata a 450 nm utilizzando uno spettrofotometro. Il valore IC50 viene calcolato mediante adattamento della curva concentrazione-risposta utilizzando un metodo analitico a quattro parametri basato su Microsoft Excel
In vivo
Sebbene incapace di inibire la crescita tumorale nei modelli tumorali B16F1 e Tib6 sensibili al sunitinib, la combinazione di PF-04217903 e sunitinib inibisce significativamente la crescita tumorale nei modelli tumorali EL4 e LLC resistenti al sunitinib rispetto al sunitinib o a questo composto da solo, bloccando significativamente l'espansione vascolare, il che indica un ruolo funzionale dell'asse HGF/c-Met nei tumori resistenti al sunitinib.
Riferimenti
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21936566/

Informazioni sullo studio clinico (Clinical Trial Information)

(dati da https://clinicaltrials.gov, aggiornato il 2024-05-22)

Numero NCT Reclutamento Condizioni Sponsor/Collaboratori Data di inizio Fasi
NCT00706355 Terminated
Neoplasms
Pfizer
 August 2008 Phase 1