PF-04217903

N. catalogoS1094 Lotto:S109407

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Dati tecnici

Formula

C19H16N8O
Peso molecolare 372.38 Numero CAS 956905-27-4
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 74 mg/mL (198.72 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
2%DMSO 30%PEG300 2%Tween80 66%ddH2O

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 2.000mg/ml (5.37mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 20 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 300 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 20 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 660 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione PF-04217903 è un inibitore selettivo di c-Met competitivo con ATP con IC50 di 4,8 nM nella linea cellulare A549, suscettibile a mutazioni oncogeniche (nessuna attività sul mutante Y1230C). Fase 1.
Target
c-Met
(A549 cells)
4.8 nM
In vitro Essendo più selettivo della staurosporina o del PF-02341066, il PF-04217903 mostra una selettività >1000 volte maggiore per c-Met rispetto a un panel di 208 chinasi, sebbene sia più suscettibile alle mutazioni oncogeniche di c-Met che attenuano la potenza rispetto al PF-02341066. Oltre al c-Met WT, questo composto mostra una potenza simile per inibire l'attività di c-Met-H1094R, c-Met-R988C e c-Met-T1010I con IC50 di 3,1 nM, 6,4 nM e 6,7 nM, rispettivamente, ma non ha attività inibitoria contro c-Met-Y1230C con IC50 di >10 μM. Questa sostanza chimica in combinazione con sunitinib inibisce significativamente le cellule endoteliali, ma non le cellule tumorali B16F1, Tib6, EL4 e LLC Inibisce significativamente la crescita clonogenica di LXFA 526L e LXFA 1647L con valori di IC50 di 16 nM e 13 nM, rispettivamente, producendo un effetto additivo se in combinazione con cetuximab. Questo composto inibisce potentemente i processi mediati da c-Met come la crescita cellulare, la motilità, l'invasione e la morfologia di una varietà di cellule tumorali. Il suo trattamento (2 μM) ha aumentato la morte cellulare delle cellule GTL-16, il che comporta la regolazione negativa di 4E-BP1 fosforilato, delle proteine associate a ERK/MAPK e della via PI3K/AKT.
In vivo Sebbene incapace di inibire la crescita tumorale nei modelli tumorali B16F1 e Tib6 sensibili al sunitinib, la combinazione di PF-04217903 e sunitinib inibisce significativamente la crescita tumorale nei modelli tumorali EL4 e LLC resistenti al sunitinib rispetto al sunitinib o a questo composto da solo, bloccando significativamente l'espansione vascolare, indicando un ruolo funzionale per l'asse HGF/c-Met nei tumori resistenti al sunitinib.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • ELISA di fosforilazione di c-Met cellulare

    Le cellule A549 con c-Met WT umano endogeno vengono seminate in piastre da 96 pozzetti in mezzo di crescita e cultivate durante la notte. Il secondo giorno del saggio, il mezzo di crescita viene sostituito con mezzo privo di siero (con 0,04% di BSA). Diluizioni seriali di questo composto vengono aggiunte a ciascun pozzetto e le cellule vengono incubate a 37 °C per 1 ora. Quindi vengono aggiunti 40 ng/mL di HGF alle cellule per 20 minuti. Le cellule vengono lavate una volta con HBSS supplementato con 1 mM di Na3VO4, e i lisati proteici vengono generati dalle cellule utilizzando il tampone di lisi. La fosforilazione di c-Met viene valutata mediante un metodo ELISA che utilizza anticorpi di cattura specifici per c-Met e un anticorpo di rilevamento specifico per i residui di tirosina fosforilata. Le piastre rivestite di anticorpi vengono incubate in presenza di lisati proteici a 4 °C durante la notte e lavate sette volte con Tween 20 all'1% in PBS. L'HRP-PY20 (anti-fosfotirosina coniugato con perossidasi di rafano) viene diluito 1:500 in tampone di blocco e aggiunto a ciascuna piastra per 30 minuti. Le piastre vengono quindi lavate di nuovo e il substrato di perossidasi TMB viene aggiunto per avviare la reazione colorimetrica dipendente dall'HRP e la reazione viene interrotta con l'aggiunta di H2SO4 0,09 N. I punti finali dell'ELISA sono l'assorbanza misurata a 450 nm utilizzando uno spettrofotometro. Il valore di IC50 viene calcolato mediante adattamento della curva dose-risposta utilizzando un metodo analitico a quattro parametri basato su Microsoft Excel.
Saggio cellulare:[2]
  • Linee cellulari

    B16F1, Tib6, EL4, and LLC, HUVECs and C166 cells

  • Concentrazioni

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~2 μM

  • Tempo di incubazione

    4 days

  • Metodo

    Cells are treated with different concentrations of PF-04217903 for 4 days. Cell proliferation is assessed by counting content of each well using a Coulter counter machine.
Studio sugli animali:[2]
  • Modelli animali

    Immunodeficient nude mice (nu/nu) subcutaneously implanted with tumor cell lines B16F1, EL4, LLC, or Tib6

  • Dosaggi

    45 mg/kg

  • Somministrazione

    Orally

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19459657/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20952508/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21273060/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21936566/

Convalida del prodotto da parte del cliente

Clonogenicity of LXFA 526L and LXFA 1647L with titration of the MET inhibitor PF-04217903 and combination of PF-04217903 at 0.1 uM with 0.66 uM cetuximab.

Dati da [ Eur J Cancer , 2011 , 47(8), 1231-43 ]

<p>Western blot analysis of c-Met, MAPK and Akt. 0-100nM PF04217903 was added.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

(A) p-MET, p-eIF4E, and p-ERK1/2 levels in S462 cells 24 hours after treatment with 1 μM PF04217903 and 750 nM PD901. (B) Change in cell number after treatment with 1 μM PF04217903 (PF903) and/or 750 nM PD901. Graph represents the average log2 of fold change in cell number 72 hours after treatment relative to time 0 (mean ± SD, n = 3).

Dati da [ , , J Clin Invest, 2016, 126(6):2181-90 ]

MET signaling inhibition attenuated the invasion and metastasis-promoting effects induced by VEGF inhibition in hepa1-6 orthotopic models. Inhibitory effects of VEGF antibody, PF-04217903 alone, and their combination on HCC growth and intrahepatic metastasis in the hepa1-6 orthotopic models. Tumor volumes and numbers of tumor foci in the orthotopic implantation models were measured and quantified.

Dati da [ , , J Exp Clin Cancer Res, 2018, 37(1):93 ]

Sellecks PF-04217903 È stato citato da 24 Pubblicazioni

Divergent Polypharmacology-Driven Cellular Activity of Structurally Similar Multi-Kinase Inhibitors through Cumulative Effects on Individual Targets [ Cell Chem Biol, 2019, 10.1016/j.chembiol.2019.06.003] PubMed: 31257184
Liver X Receptor Agonism Sensitizes a Subset of Hepatocellular Carcinoma to Sorafenib by Dual-Inhibiting MET and EGFR. [ Neoplasia, 2019, 22(1):1-9] PubMed: 31751859
Off-target based drug repurposing opportunities for tivantinib in acute myeloid leukemia [ Sci Rep, 2019, 9(1):606] PubMed: 30679640
DRUGPATH - a novel bioinformatic approach identifies DNA-damage pathway as a regulator of size maintenance in human ESCs and iPSCs [ Sci Rep, 2019, 9(1):1897] PubMed: 30760778
Hgf/Met activation mediates resistance to BRAF inhibition in murine anaplastic thyroid cancers. [ J Clin Invest, 2018, 128(9):4086-4097] PubMed: 29990309
The dual blockade of MET and VEGFR2 signaling demonstrates pronounced inhibition on tumor growth and metastasis of hepatocellular carcinoma [Zhang Y, et al. J Exp Clin Cancer Res, 2018, 37(1):93] PubMed: 29712569
MET-targeting antibody (emibetuzumab) and kinase inhibitor (merestinib) as single agent or in combination in a cancer model bearing MET exon 14 skipping. [ Invest New Drugs, 2018, 36(4):536-544] PubMed: 29188469
Reactive Neutrophil Responses Dependent on the Receptor Tyrosine Kinase c-MET Limit Cancer Immunotherapy. [ Immunity, 2017, 47(4):789-802] PubMed: 29045907
Cabozantinib Eradicates Advanced Murine Prostate Cancer by Activating Antitumor Innate Immunity. [ Cancer Discov, 2017, 7(7):750-765] PubMed: 28274958
Cotargeting MNK and MEK kinases induces the regression ofNF1-mutant cancers [ J Clin Invest., 2016, 126(6):2181-2190] PubMed: None

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