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AG-14361 PARP Inibitore

N. Cat.: S2178

AG14361 è un potente inibitore di PARP1 con un Ki di <5 nM in un saggio senza cellule. È almeno 1000 volte più potente dei benzammidi.
AG-14361 PARP Inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 320.39

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.89%
99.89

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
LoVo cells Function assay Concentration that gives 50% growth inhibition in LoVo cells, activity expressed as GI50, GI50=11.2 μM
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 320.39 Formula

C19H20N4O

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 328543-09-5 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi N/A Smiles CN(C)CC1=CC=C(C=C1)C2=NC3=CC=CC4=C3N2CCNC4=O

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 51 mg/mL (159.18 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Ethanol : 21 mg/mL

Water : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Caratteristiche
The 1st high-potency PARP-1 inhibitor with the specificity & in vivo activity to enhance chemotherapy and radiation therapy of human cancers.
Targets/IC50/Ki
PARP1
(Cell-free assay)
<5 nM(Ki)
In vitro

AG14361 is at least 1000-fold more potent than the benzamides. The IC50 for AG14361 is 29 nM in permeabilized SW620 cells and 14 nM in intact SW620 cells. Crystallographic analysis of AG14361 bound to the catalytic domain of chicken PARP-1 shows that the tricyclic ring system of AG14361 is located in a pocket composed of amino acid residues Trp861, His862, Gly863, Tyr896, Phe897, Ala898, Lys903, Ser904, Tyr907, and Glu988. AG14361 forms important hydrogen bonds with Ser904 and Gly863 and a water-mediated hydrogen bond with Glu988. AG14361-induced growth inhibition is not attributed to PARP-1-related effects because maximal PARP-1 inhibition is observed at much lower concentrations (≤1 μM) than the GI50. AG14361 at 0.4 μM does not affect cancer cell gene expression or growth, but it increases the antiproliferative activity, and inhibits recovery from potentially lethal γ-radiation damage in LoVo cells by 73%. In addition, 0.4 μM AG14361 does not substantially alter gene expression as shown by microarray analysis. A 17-hour exposure of A549 cells to 0.4 μM AG14361 does not change the expression of the 6800 genes. Thus, although 0.4 μM AG14361 inhibits cellular PARP-1 activity by more than 85%, it essentially does not change gene expression and cell proliferation, indicating that the cellular effects of this low concentration of AG14361 are specific for PARP-1 inhibition. Higher, growth-inhibitory concentrations of AG14361 affects gene expression, but these effects are not likely to be related to PARP-1 inhibition because cell proliferation is affected equally in PARP-/- and PARP-1+/+ cells. AG14361 is rapidly absorbed into the bloodstream and distributed to the tumor and liver with lower concentrations detected in the brain. Tissue-to-plasma concentration ratio indicates that AG14361 is retained in tumor tissue over time in both xenograft models, with tumor concentrations (≥15 μM for 2 hours) in excess of that required to inhibit PARP-1 activity in vitro. AG14361 enhances activity in all MMR-proficient cells (1.5–3.3-fold) but is more effective in MMR-deficient cells (3.7–5.2-fold potentiation), overcoming resistance. In contrast, benzylguanine only increases the efficacy in MMR-proficient cells but is ineffective in MMR-deficient cells. AG14361 enhances the growth-inhibitory and cytotoxic effects of topoisomerase I poisons. AG14361 increases the persistence of camptothecin-induced DNA single-strand breaks.

Saggio chinasico
Saggi di attività della PARP-1
L'attività della PARP-1 umana ricombinante a lunghezza intera viene misurata in una miscela di reazione contenente 20 nM PARP-1, 500 μM NAD+ più [32P]NAD+ (0,1–0,3 μCi per miscela di reazione) e DNA di timo di vitello attivato (10 μg/mL) a 25oC; la reazione viene terminata dopo 4 minuti aggiungendo acido tricloroacetico al 10% (p/v) ghiacciato. Il prodotto di reazione [32P]ADP-ribosio incorporato nel materiale insolubile in acido viene depositato su filtri in fibra di vetro Whatman GF/C con un apparecchio di microfiltrazione Bio-Dot e quantificato con un PhosphorImager. Viene misurata l'inibizione dell'attività della PARP-1 da parte di AG14361 a 0–600 nM e il Ki per AG14361 viene calcolato mediante analisi di regressione non lineare.
In vivo

AG14361 treatment before irradiation statistically significantly increases the sensitivity to radiation therapy of mice bearing LoVo xenografts. AG14361 statistically significantly increases blood flow in xenografts and thus potentially increases drug delivery to tumor xenografts. In vivo, nontoxic doses of AG14361 increases the delay of LoVo xenograft growth induced by x-irradiation by 2- to 3-fold. Coadministration of AG14361 statistically significantly increases activity against LoVo xenografts, with the tumor growth delay being increased from 3 days to 9 days by AG14361 at 5 mg/kg and to 10 days by AG14361 at 15 mg/kg. The combination of AG14361 causes complete regression of SW620 xenograft tumors. PARP-1 activity, detected by pharmacodynamic assay, in SW620 xenografts is inhibited by more than 75% for at least 4 hours after intraperitoneal administration of AG14361 (10 mg/kg), consistent with the concentration of AG14361 persisting in the tumor.

Riferimenti