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UNC1999 Histone Methyltransferase inibitore

Name: UNC1999
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S7165
Rating: 5 (32 reviews)

N. Cat.S7165

UNC1999 è un inibitore potente, biodisponibile per via orale e selettivo di EZH2 e EZH1 con IC50 di 2 nM e 45 nM in saggi senza cellule, rispettivamente, mostrando una selettività >1000 volte superiore rispetto a un'ampia gamma di bersagli epigenetici e non epigenetici. Questo composto è un potente induttore di autophagy. Sopprime specificamente H3K27me3/2 e induce una serie di effetti anti-leucemici tra cui anti-proliferazione, differenziazione e apoptosis.

UNC1999 Histone Methyltransferase inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 569.74

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Controllo Qualità

Lotto: Purezza: 99.86%

99.86

Target correlati	HDAC JAK BET PKC PARP HIF PRMT EZH2 AMPK Histone Acetyltransferase
Altro Histone Methyltransferase Inibitori	Pinometostat (EPZ5676) 3-Deazaneplanocin A (DZNep) Hydrochloride BIX-01294 trihydrochloride EPZ015666 (GSK3235025) EPZ004777 MM-102 (HMTase Inhibitor IX) Chaetocin SGC 0946 EPZ005687 UNC0638

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro

Linee cellulari	Tipo di saggio	Tempo di incubazione	Descrizione dellattività	PMID
human MCF10A cells	Function assay	72 h	Inhibition of EZH2 in human MCF10A cells assessed as reduction of H3K27me3 level after 72 hrs by Western blot analysis, IC50=0.124 μM	25406853
human MCF10A cells	Cytotoxic assay		Cytotoxicity against human MCF10A cells assessed as cell viability by Alamar Blue assay, EC50=19.2 μM	25406853
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità

Peso molecolare	569.74	Formula	C₃₃H₄₃N₇O₂	Conservazione (Dalla data di ricezione)	3 anni-20°Cpolvere
N. CAS	1431612-23-5	Scarica SDF		Conservazione delle soluzioni stock	1 anno-80°Cin solvente 1 mese-20°Cin solvente
Sinonimi	N/A			Smiles	CCCC1=C(C(=O)NC(=C1)C)CNC(=O)C2=C3C=NN(C3=CC(=C2)C4=CN=C(C=C4)N5CCN(CC5)C(C)C)C(C)C

Solubilità

In vitro
Lotto:

DMSO : 100 mg/mL (175.51 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Ethanol : 100 mg/mL

Water : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa	Concentrazione	Volume	Peso molecolare
=	×	×

Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo Lotto:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Validato dai laboratori Selleck. Se necessiti di modifiche a questa formulazione, contatta il nostro team di vendita per test personalizzati.	5.000mg/ml (8.78mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Validato dai laboratori Selleck. Se necessiti di modifiche a questa formulazione, contatta il nostro team di vendita per test personalizzati.	1.250mg/ml (2.19mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 25 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante lesperimento)

Dosaggio: mg/kg Peso medio degli animali: g Volume di dosaggio per animale:μL Numero di animali:

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non cè una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH₂O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nellaggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere allaggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno dacqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo dazione

Caratteristiche	The first orally bioavailable inhibitor against wild-type and mutant EZH2 as well as EZH1.
Targets/IC₅₀/Ki	EZH2 (Cell-free assay) 2 nM EZH1 (Cell-free assay) 45 nM
In vitro	UNC1999 è altamente potente per i mutanti EZH2 Y641N e EZH2 Y641F in vitro. Questo composto provoca riduzioni dose-dipendenti di H3K27me3 nelle cellule MCF10A con IC50 di 124 nM, pur mostrando bassa tossicità cellulare. Mostra una potente inibizione dose-dipendente della proliferazione cellulare con EC50 di 633 nM in una linea cellulare di DLBCL che ospita il mutante EZH2Y641N. Inoltre, UNC1999 biotinilato arricchisce EZH2 dai lisati cellulari di HEK293T, e quindi può essere utilizzato in studi di chemioproteomica.
Saggio chinasico	Saggio di prossimità a scintillazione
Saggio chinasico	I saggi di attività della metiltransferasi vengono eseguiti monitorando l'incorporazione del gruppo metilico marcato con trizio da S-adenosilmetionina (3H-SAM) a substrati peptidici biotinilati utilizzando il Saggio di Prossimità a Scintillazione (SPA) per il complesso trimerico PRC2-EZH2 (EZH2:EED:SUZ12), il complesso pentamerico PRC2-EZH1 (EZH1:EED:SUZ12:RBBP4:AEBP2), SETD7, G9a, GLP, SETDB1, SETD8, SUV420H1, SUV420H2, SUV39H2, il complesso tetramerico MLL1 (MLL:WDR5:RbBP5:ASH2L), PRMT1, PRMT3, il complesso PRMT5-MEP50 e SMYD2. Il tampone di reazione per SMYD2 e SMYD3 è 50 mM Tris pH 9.0, 5 mM DTT, 0.01% TritonX-100; per G9a, GLP e SUV39H2 è 25 mM fosfato di potassio pH 8.0, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl₂ e 0.01% Triton X-100; e per altre HMT 20 mM Tris pH 8.0, 5 mM DTT, 0.01% TritonX-100. Per arrestare le reazioni enzimatiche, vengono aggiunti 10 μL di guanidina cloridrato 7.5 M, seguiti da 180 μL di tampone, miscelati e trasferiti in una FlashPlate a 384 pozzetti. Dopo la miscelazione, le miscele di reazione vengono incubate e i conteggi CPM vengono misurati utilizzando un lettore di piastre Topcount. I conteggi CPM in assenza di questo composto per ogni set di dati sono definiti come attività al 100%. In assenza dell'enzima, i conteggi CPM in ogni set di dati sono definiti come sfondo (0%). I valori di IC50 vengono determinati utilizzando concentrazioni di composto che vanno da 100 nM a 100 μM. I valori di IC50 vengono determinati utilizzando il software SigmaPlot. I saggi EZH2-Y641F vengono eseguiti utilizzando 30 nM di enzima in 20 mM Tris pH 8, 5 mM DTT, 0.01% Triton X-100, 5 μM SAM e 1 μM di peptide H3 (1-24) (lo stesso che per il complesso PRC2-EZH2 di tipo selvatico). Per DNMT1, il saggio viene eseguito utilizzando dsDNA emimetilato come substrato. Il substrato di dsDNA viene preparato mediante annealing di due filamenti complementari (filamento avanti biotinilato: BGAGCCCGTAAGCCCGTTCAGGTCG e filamento inverso: CGACCTGAACGGGCTTACGGGCTC), sintetizzati da Eurofins MWG Operon. Il tampone di reazione è 20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 5mM DTT, 0.01% Triton X-100. I saggi di attività della metiltransferasi per DOT1L vengono eseguiti utilizzando piastre filtranti. Le miscele di reazione in 20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 5 mM DTT, 2 mM MgCl₂ e 0.01% Triton X-100 vengono incubate a temperatura ambiente per 1h, vengono aggiunti 100 μL di TCA al 10%, miscelati e trasferiti in una piastra filtrante. Le piastre vengono centrifugate a 2000 rpm per 2 min seguite da 2 ulteriori lavaggi con TCA al 10% e un lavaggio con etanolo (180 μL) seguito da centrifugazione. Le piastre vengono essiccate e vengono aggiunti 100 μL di MicroO e centrifugate. Vengono aggiunti 70 μL di MicroO e i CPM vengono misurati utilizzando un lettore di piastre Topcount.
In vivo	Il trattamento con UNC1999 (150 e 50 mg/kg, i.p.) si traduce in concentrazioni plasmatiche di questo composto superiori alla sua IC50 cellulare per oltre 24 ore in vivo. Inoltre, è anche biodisponibile per via orale nei topi, il che rende gli studi sugli animali cronici più pratici e convenienti.
Riferimenti	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23614352/ [2] http://www.thesgc.org/chemical-probes/UNC1999

Applicazioni

Metodi	Biomarcatori	PMID
Western blot	H3K27Me3 / Cleaved PARP / LC3B H3K27me2 / H3K27me1 / H3K27ac / H3K4me3 / H3K9me2 / H3K36me2	27449082
Immunofluorescence	EZH2 / H3K27me3 NF-κB	23614352
Growth inhibition assay	Cell viability	27449082

Supporto tecnico

Istruzioni per la manipolazione

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Per qualsiasi altra domanda, si prega di lasciare un messaggio.

C1=C0/X	C1:	LOG(C1):
C2=C1/X	C2:	LOG(C2):
C3=C2/X	C3:	LOG(C3):
C4=C3/X	C4:	LOG(C4):
C5=C4/X	C5:	LOG(C5):
C6=C5/X	C6:	LOG(C6):
C7=C6/X	C7:	LOG(C7):
C8=C7/X	C8:	LOG(C8):