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Flavopiridol (Alvocidib, HMR-1275) CDK inibitore

Name: Flavopiridol (Alvocidib, HMR-1275)
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S1230
Rating: 5 (146 reviews)

N. Cat.S1230

Flavopiridol (Alvocidib) compete con l'ATP per inibire le CDK, tra cui CDK1, CDK2, CDK4, CDK6 e CDK9 con valori di IC50 nell'intervallo 20-100 nM. È più selettivo per CDK1, 2, 4, 6, 9 rispetto a CDK7. Flavopiridol è inizialmente trovato inibire EGFR e PKA. Flavopiridol induce autophagy e stress del RE. Flavopiridol blocca la replicazione di HIV-1. Fase 1/2.

Flavopiridol (Alvocidib, HMR-1275) CDK inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 401.84

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Controllo Qualità

Lotto: Purezza: 99.92%

99.92

Target correlati	HSP PD-1/PD-L1 ROCK Wee1 DNA/RNA Synthesis Microtubule Associated Ras KRas Aurora Kinase Casein Kinase
Altro CDK Inibitori	AS2863619 Ro-3306 SEL120 (SEL120-34A) hydrochloride INX-315 Tagtociclib (PF-07104091) PF-07220060 (CDK4/6-IN-6) AZD4573 ON123300 Enitociclib (BAY 1251152) Samuraciclib (ICEC0942) hydrochloride

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro

Linee cellulari	Tipo di saggio	Concentrazione	Tempo di incubazione	Descrizione dellattività	PMID
MCF-7 tumor cell	Proliferation assay			Inhibition of MCF-7 tumor cell proliferation	10843211
PC3 cell	Function assay			Inhibition of PC3 cell clonogenic assay, IC50=10 μM	11063609
HCT116 cell	Function assay			Inhibition of HCT116 cell clonogenic assay, IC50=13 μM	11063609
A2780 cell	Function assay			Inhibition of A2780 cell clonogenic assay， IC50=15 μM	11063609
Mia PaCa-2 cell	Function assay			Inhibition of Mia PaCa-2 cell clonogenic assay, IC50=36 μM	11063609
LNCaP human prostate carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of LNCaP human prostate carcinoma cell proliferation	12190313
HCT116/VP35 human colon carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of HCT116/VP35 human colon carcinoma cell proliferation, IC50=17 nM	12190313
HCT116 human colon carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of HCT116 human colon carcinoma cell proliferation, IC50=18 nM	12190313
HCT116/VM46 human colon carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of HCT116/VM46 human colon carcinoma cell proliferation, IC50=21 nM	12190313
A2780/DDP-R human ovarian carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of A2780/DDP-R human ovarian carcinoma cell proliferation, IC50=38 nM	12190313
ABAE human fibroblast cell	Proliferation assay			Inhibition of ABAE human fibroblast cell proliferation, IC50=45 nM	12190313
HL60 human leukemia cell	Proliferation assay			Inhibition of HL60 human leukemia cell proliferation, IC50=46 nM	12190313
Hs 27 human fibroblast cell	Proliferation assay			Inhibition of Hs 27 human fibroblast cell proliferation, IC50=51 nM	12190313
CCRF-CEM human leukemia cell	Proliferation assay			Inhibition of CCRF-CEM human leukemia cell proliferation, IC50=52 nM	12190313
OVCAR-3 human ovarian carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of OVCAR-3 human ovarian carcinoma cell proliferation, IC50=54 nM	12190313
A2780/DDP-S human ovarian carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of A2780/DDP-S human ovarian carcinoma cell proliferation, IC50=56 nM	12190313
A2780/TAX-S human ovarian carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of A2780/TAX-S human ovarian carcinoma cell proliferation, IC50=65 nM	12190313
LS174T human colon carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of LS174T human colon carcinoma cell proliferation, IC50=65 nM	12190313
MCF-7 human breast carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of MCF-7 human breast carcinoma cell proliferation, IC50=66 nM	12190313
PC3 human prostate carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of PC3 human prostate carcinoma cell proliferation, IC50=66 nM	12190313
MLF mouse lung fibroblast cell	Proliferation assay			Inhibition of MLF mouse lung fibroblast cell proliferation, IC50=72 nM	12190313
LX-1 human lung carcinoma	Proliferation assay			Inhibition of LX-1 human lung carcinoma proliferation, IC50=75 nM	12190313
A431 human squamous cell	Proliferation assay			Inhibition of A431 human squamous cell carcinoma cell proliferation, IC50=75 nM	12190313
SKBR-3 human breast carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of SKBR-3 human breast carcinoma cell proliferation, IC50=77 nM	12190313
A2780/TAX-R human ovarian carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of A2780/TAX-R human ovarian carcinoma cell proliferation, IC50=78 nM	12190313
M109 mouse lung carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of M109 mouse lung carcinoma cell proliferation, IC50=80 nM	12190313
CACO-2 human colon carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of CACO-2 human colon carcinoma cell proliferation, IC50=86 nM	12190313
A549 human lung carcinoma cell	Proliferation assay			Inhibition of A549 human lung carcinoma cell proliferation, IC50=96 nM	12190313
MIP human colon carcinoma cell	Function assay			Inhibition of MIP human colon carcinoma cell line, IC50=0.12 μM	12190313
K562 human leukemia cell	Proliferation assay			Inhibition of K562 human leukemia cell proliferation, IC50=0.13 μM	12190313
human A2780 cell line	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative effect against human A2780 cell line was determined in a whole cell 72 hr cytotoxicity assay, IC50=71 nM	15027863
human ovarian (A2780) cancer cell	Cytotoxic assay			Cytotoxic effect on human ovarian (A2780) cancer cell line, IC50=71 nM	15125971
ID8 cells	Proliferation assay			Antiproliferative activity against ID8 cells, IC50=7 nM	17123821
MCF7 cells	Proliferation assay			Antiproliferative activity against MCF7 cells, IC50=26 nM	17123821
Sf9 cells	Function assay			Inhibition of recombinant cyclin A/CDK2 expressed in Sf9 cells, IC50=12 nM	17904366
human A2780 cells	Function assay			Inhibition of cdk-mediated NPM phosphorylation at thr199 in human A2780 cells	18469809
human A2780 cells	Function assay		24 h	Inhibition of cdk-mediated Rb phosphorylation at thr821 in human A2780 cells after 24 hrs	18469809
human NCI60 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human NCI60 cells after 72 hrs by sulforhodamine B assay, GI50=74.7 nM	21080703
human NCI60 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human NCI60 cells assessed as lethal effect after 72 hrs by sulforhodamine B assay, LC50=0.904 μM	21080703
human A2780 cells	Cytotoxic assay		24 h	Cytotoxicity against human A2780 cells after 24 hrs by MTT assay, GI50=23 nM	23301767
human MRC5 cells	Cytotoxic assay		72 h	Cytotoxicity against human MRC5 cells after 72 hrs by MTT assay, GI50=28 nM	23301767
human A2780 cells	Cytotoxic assay		72 h	Cytotoxicity against human A2780 cells after 72 hrs by MTT assay, GI50=29 nM	23301767
human A2780 cells	Cytotoxic assay		48 h	Cytotoxicity against human A2780 cells after 48 hrs by MTT assay, GI50=31 nM	23301767
human MRC5 cells	Cytotoxic assay		48 h	Cytotoxicity against human MRC5 cells after 48 hrs by MTT assay, GI50=39 nM	23301767
human MRC5 cells	Cytotoxic assay		24 h	Cytotoxicity against human MRC5 cells after 24 hrs by MTT assay, GI50=49 nM	23301767
human HMEC1 cells	Cytotoxic assay		24 h	Cytotoxicity against human HMEC1 cells after 24 hrs by MTT assay, GI50=61 nM	23301767
human HMEC1 cells	Cytotoxic assay		48 h	Cytotoxicity against human HMEC1 cells after 48 hrs by MTT assay, GI50=62 nM	23301767
human HMEC1 cells	Cytotoxic assay		72 h	Cytotoxicity against human HMEC1 cells after 72 hrs by MTT assay, GI50=66 nM	23301767
A2780	Function assay	330 nM	24 hr	Percentage A2780 cells in sb-G1 after 24 hr r at 330 nM (IC50), Cell cycle = 0.001 μM.	12190313
A2780	Apoptosis assay	330 nM	24 hr	Apoptotic A2780 cells after 24 hr r at 330 nM (IC50), Cell cycle = 0.001 μM.	12190313
A2780	Function assay	2980 nM	24 hr	Percentage A2780 cells in sub-G1 after 24 hr r at 2980 nM (IC90), Cell cycle = 0.002 μM.	12190313
A2780	Apoptosis assay	2980 nM	24 hr	Apoptotic A2780 cells after 24 hr r at 2980 nM (IC90), Cell cycle = 0.009 μM.	12190313
A2780	Function assay	2980 nM	24 hr	Percentage A2780 cells in S-phase after 24 hr r at 2980 nM (IC90), Cell cycle = 0.012 μM.	12190313
A2780	Function assay	330 nM	24 hr	Percentage A2780 cells in S-phase after 24 hr r at 330 nM (IC50), Cell cycle = 0.016 μM.	12190313
A2780	Function assay	330 nM	24 hr	Percentage A2780 cells in G2/M after 24 hr r at 330 nM (IC50), Cell cycle = 0.023 μM.	12190313
A2780	Function assay	2980 nM	24 hr	Percentage A2780 cells in G2/M after 24 hr r at 2980 nM (IC90), Cell cycle = 0.025 μM.	12190313
A2780	Function assay	330 nM	24 hr	Percentage A2780 cells in G1 after 24 hr r at 330 nM (IC50), Cell cycle = 0.06 μM.	12190313
A2780	Function assay	2980 nM	24 hr	Percentage A2780 cells in G1 after 24 hr r at 2980 nM (IC90), Cell cycle = 0.061 μM.	12190313
A2780	Function assay		24 hrs	Inhibition of cdk-mediated Rb phosphorylation at ser807/811 in human A2780 cells after 24 hrs	18469809
A2780	Function assay		24 hrs	Inhibition of cdk9-mediated RNA pol2 CTD phosphorylation at ser2 in human A2780 cells after 24 hrs	18469809
A2780	Function assay		24 hrs	Inhibition of cdk7-mediated RNA pol2 CTD phosphorylation at ser5 in human A2780 cells after 24 hrs	18469809
A2780	Apoptosis assay		24 hrs	Induction of apoptosis in human A2780 cells assessed as appearance of Mcl1 protein level after 24 hrs	18469809
DR-U2OS-GFP	Function assay	0.1 uM	56 hrs	Reduction of homologous recombination in human DR-U2OS-GFP cells expressing I-SceI nuclease assessed as reduction of RAD51 level at 0.1 uM after 56 hrs by immunoblotting	21417417
A2780	Function assay		24 hrs	Inhibition of CDK9 in human A2780 cells assessed as reduction of RNAPII CTD phosphorylation at Ser2 at GI50 concentration after 24 hrs by Western blotting analysis	23301767
A2780	Cell cycle assay		24 hrs	Cell cycle arrest in human A2780 cells assessed as accumulation at G2/M phase at less than GI50 after 24 hrs by flow cytometric analysis	23301767
A2780	Function assay		24 hrs	Inhibition of CDK9 in human A2780 cells assessed as downregulation of MCL1 at GI50 to 5XGI50 concentration after 24 hrs by Western blotting analysis	23301767
A2780	Apoptosis assay		24 hrs	Induction of apoptosis in human A2780 cells assessed as induction of PARP cleavage at GI50 to 5XGI50 concentration after 24 hrs by Western blotting analysis	23301767
A2780	Function assay		24 hrs	Inhibition of CDK9 in human A2780 cells assessed as downregulation of HDM2 at GI50 to 5XGI50 concentration after 24 hrs by Western blotting analysis	23301767
MT4	Antiproliferative assay			Antiviral activity against Human immunodeficiency virus 1 NL 4-3 infected in MT4 cells measured on day 4 post infection by p24 assay, EC50 = 0.015 μM.	25914804
MT4	Cytotoxicity assay			Cytotoxicity against human MT4 cells, IC50 = 0.067 μM.	25914804
Sf9	Function assay		15 mins	Inhibition of CDK2/cyclin E1 (unknown origin) expressed in Sf9 insect cells using UlightCFFKNIVTPRTPPPSQGK-amide substrate after 15 mins by autoradiography, IC50 = 0.13 μM.	25914804
A549	Antiproliferative assay		3 days	Antiproliferative activity against human A549 cells after 3 days by SRB method, GI50 = 0.14 μM.	25914804
DU145	Antiproliferative assay		3 days	Antiproliferative activity against human DU145 cells after 3 days by SRB method, GI50 = 0.15 μM.	25914804
KB	Antiproliferative assay		3 days	Antiproliferative activity against human KB cells after 3 days by SRB method, GI50 = 0.16 μM.	25914804
KBVIN	Antiproliferative assay		3 days	Antiproliferative activity against human KBVIN cells after 3 days by SRB method, GI50 = 0.18 μM.	25914804
HCT116	Antiproliferative assay		72 hrs	Antiproliferative activity against human HCT116 cells after 72 hrs by Celltiter-Glo reagent based assay in presence of 10% fetal bovine serum, EC50 = 0.034 μM.	26985305
HCT116	Antiproliferative assay		72 hrs	Antiproliferative activity against human HCT116 cells after 72 hrs by Celltiter-Glo reagent based assay in presence of 0.625% fetal bovine serum, EC50 = 0.059 μM.	26985305
Sf9	Function assay		10 mins	Inhibition of human His6-tagged CDK9/cyclin T1 expressed in baculovirus infected sf9 cells using GST-CTD as substrate after 10 mins in presence of [gamma-32P]ATP by SDS-PAGE analysis, IC50 = 0.0025 μM.	27171036
Sf21	Function assay			Inhibition of recombinant human full length C-terminal His6-tagged CDK9/cyclin T1 expressed in baculovirus infected Sf21 insect cells using PDKtide as substrate, IC50 = 0.011 μM.	27171036
HeLa	Cytotoxicity assay		72 hrs	Cytotoxicity against human HeLa cells assessed as decrease in cell viability after 72 hrs by MTT assay, CC50 = 0.12 μM.	27171036
sf21	Function assay			Inhibition of full length human N-terminal His6-tagged CDK6/N-terminal GST-tagged cyclin D3 expressed in sf21 cells using histone H1 substrate, IC50 = 0.395 μM.	27171036
Sf21	Function assay			Inhibition of recombinant human full length C-terminal His6-tagged CDK7/cyclin H/N-terminal GST-tagged MAT1 expressed in baculovirus infected Sf21 insect cells using cdk7 substrate peptide, IC50 = 0.514 μM.	27171036
HepG2	Antiproliferative assay		72 hrs	Antiproliferative activity against human HepG2 cells after 72 hrs by CelTiter-Glo assay, EC50 = 0.1464 μM.	29407975
KOPN8	Antiproliferative assay		72 hrs	Antiproliferative activity against human KOPN8 cells after 72 hrs by CelTiter-Glo assay, EC50 = 0.1926 μM.	29407975
SEM	Antiproliferative assay		72 hrs	Antiproliferative activity against human SEM cells after 72 hrs by CelTiter-Glo assay, EC50 = 0.2043 μM.	29407975
UOCB1	Antiproliferative assay		72 hrs	Antiproliferative activity against human UOCB1 cells after 72 hrs by CelTiter-Glo assay, EC50 = 0.2084 μM.	29407975
KOPN8	Apoptosis assay	0.5 uM	3 to 24 hrs	Induction of apoptosis in human KOPN8 cells assessed as upregulation of cleaved PARP level at 0.5 uM after 3 to 24 hrs by Western blot analysis	29407975
KOPN8	Apoptosis assay	0.5 uM	1 hr	Induction of apoptosis in human KOPN8 cells assessed as upregulation of cleaved PARP level at 0.5 uM pre-treated with NAC for 1 hr and measured after 3 to 24 hrs by Western blot analysis	29407975
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità

Peso molecolare	401.84	Formula	C₂₁H₂₀ClNO₅	Conservazione (Dalla data di ricezione)	3 anni-20°Cpolvere
N. CAS	146426-40-6	Scarica SDF		Conservazione delle soluzioni stock	1 anno-80°Cin solvente 1 mese-20°Cin solvente
Sinonimi	NSC 649890, HMR-1275, L86-8275			Smiles	CN1CCC(C(C1)O)C2=C(C=C(C3=C2OC(=CC3=O)C4=CC=CC=C4Cl)O)O

Solubilità

In vitro
Lotto:

DMSO : 80 mg/mL (199.08 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa	Concentrazione	Volume	Peso molecolare
=	×	×

Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo Lotto:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 30%PEG300 2 65%ddH2O Validato dai laboratori Selleck. Se necessiti di modifiche a questa formulazione, contatta il nostro team di vendita per test personalizzati.	2.500mg/ml (6.22mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 50 mg/ml clarified DMSO stock solution to 300 μL of PEG 300, mix evenly to clarify it; then continue to add 650 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante lesperimento)

Dosaggio: mg/kg Peso medio degli animali: g Volume di dosaggio per animale:μL Numero di animali:

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non cè una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH₂O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nellaggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere allaggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno dacqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo dazione

Caratteristiche	First CDK inhibitor to be used in human clinical trials.
Targets/IC₅₀/Ki	CDK9 (Cell-free assay) 20 nM CDK1 (Cell-free assay) 30 nM CDK4 (Cell-free assay) 20-40 nM CDK2 (Cell-free assay) 40 nM CDK6 (Cell-free assay) 60 nM CDK7 (Cell-free assay) 875 nM
In vitro	Flavopiridol (Alvocidib) mostra minore attività contro chinasi non correlate come MAP, PAK, PKC ed EGFR con un IC50 di >14 μM. Inibisce significativamente la crescita delle colonie di cellule HCT116, A2780, PC3 e Mia PaCa-2 con IC50 di 13 nM, 15 nM, 10 nM e 36 nM, rispettivamente. Questo composto inibisce potentemente anche l'attività della glicogeno sintasi chinasi-3 (GSK-3) con un IC50 di 280 nM. Rispetto ad altre CDK, inibisce l'attività di CDK7 meno potentemente con un IC50 di 875 nM. A 0.5 μM, inibisce sia pSer807/811 Rb che pThr199 NPM, mentre si osservano lievi cambiamenti a pThr821 Rb. Diminuisce anche il livello complessivo di RNA polimerasi II, così come la fosforilazione di RNA polimerasi II sulle ripetizioni CTD a Ser2 Ser5. Come inibitore di CDK ad ampio spettro, può inibire la progressione del Cell Cycle sia in G1 che in G2. A 0.3 μM, induce l'arresto in G1 nelle cellule MCF-7 o MDA-MB-468 mediante l'inibizione dell'attività chinasica di CDK4 o CDK2. Esibisce una potente citotossicità contro un'ampia varietà di linee cellulari tumorali con valori di IC50 che vanno da 16 nM per LNCAP a 130 nM per K562.
Saggio chinasico	Saggio chinasi CDK
Saggio chinasico	Per il saggio chinasi CDK1/ciclina B1, le reazioni chinasiche consistono in 100 ng di complesso GST-CDK1/ciclina B1 (umano) espresso da baculovirus, 1 μg di istone HI, 0,2 μCi di [γ-³³P]ATP, 25 μM di ATP in 50 μL di tampone chinasico (50 mM Tris, pH 8.0, 10 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 0.5 mM DTT). Per il saggio chinasi CDK2/ciclina E, le reazioni chinasiche consistono in 5 ng di complesso GST-CDK2/ciclina E (umano) espresso da baculovirus, 0,5 μg di proteina di fusione GST-RB (aminoacidi 776-928 della proteina del retinoblastoma), 0,2 μCi di [γ-³³P]ATP, 25 μM di ATP in 50 μL di tampone chinasico (50 mM Hepes, pH 8.0, 10 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 2 mM DTT). Per il saggio chinasi CDK4/ciclina D1, le reazioni chinasiche consistono in 150 ng di GST-CDK4/ciclina D1 (umano) espresso da baculovirus, 280 ng di Stag-ciclina D1, 0,5 μg di proteina di fusione GST-RB (aminoacidi 776-928 della proteina del retinoblastoma), 0,2 μCi di [γ-³³P]ATP, 25 μM di ATP in 50 μL di tampone chinasico (50 mM Hepes, pH 8.0, 10 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 2 mM DTT). Le reazioni vengono incubate per 45 minuti per CDK1 e CDK2, o 1 ora per CDK4 a 30 °C e interrotte con l'aggiunta di acido tricloroacetico (TCA) freddo a una concentrazione finale del 15%. I precipitati di TCA vengono raccolti su piastre unifilter GF/C utilizzando un raccoglitore universale Filtermate e i filtri vengono quantificati utilizzando un contatore a scintillazione liquida a 96 pozzetti TopCount. Flavopiridol (Alvocidib) viene disciolto a 10 mM in dimetilformamide (DMF) e valutato a sei concentrazioni, ciascuna in triplicato. La concentrazione finale di DMF nel saggio = 2%. I valori di IC50 sono derivati mediante analisi di regressione non lineare e hanno un coefficiente di varianza = 16%. Per saggiare la sua attività su CDK6, viene stabilito un saggio di legame su filtro. Nel miscela di reazione vengono combinati i seguenti: 2 μL di CDK6 (0,7 mg/μL), 5 μL di istone H1 (6 mg/mL), 14 μL di tampone chinasico (60 mM β-glicerofosfato, 30 mM p-nitrofenil fosfato, 25 mM MOPS (pH 7.0), 5 mM EGTA, 15 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 0,1 mM Na-vanadato), 3 μL di concentrazioni crescenti di questo composto diluite in 50% DMSO e 6 μL di ³³P-ATP (1 mCi/mL) in ATP non radioattivo a una concentrazione di 90 μM (concentrazione finale: 15 μM). Il saggio viene avviato con l'aggiunta di ³³P-ATP. La reazione viene incubata per 20 minuti a 30°C. Un'aliquota di 25 μL del surnatante viene quindi spotta su carta di fosfocellulosa Whatman P81. I filtri vengono lavati 5 volte con una soluzione di acido fosforico all'1%. I filtri umidi vengono contati in presenza di 1 mL di fluido scintillatore. L'attività di Cdk9 viene misurata utilizzando 50 nM di Cdk9/ciclina T ricombinante in 50 mM HEPES pH 7.5, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄, 150 μM di peptide CDT di RNA polimerasi e 80 μM di ATP. Il saggio Cdk7 viene eseguito nello stesso tampone utilizzando 37 nM di chinasi purificata in presenza di 200 μM di ATP e 10 μM di proteina legante la mielina come substrato. La potenza di esso verso CDK9 e CDK7 è determinata utilizzando un saggio basato su uno scambiatore anionico forte (resina Dowex 1-X8, forma formiato) o un saggio di scintillazione a prossimità. I valori di IC50 sono calcolati dalle curve dose-risposta.
In vivo	La somministrazione di S1230 a 7,5 mg/kg per 7 giorni mostra una leggera attività antitumorale contro la leucemia murina P388, risultando in un valore %T/C di 110, ed è attiva contro il carcinoma ovarico umano A2780 impiantato sottocute in topi nudi, producendo una riduzione di 1,5 log di cellule (LCK). Il trattamento con S1230 a 1-2,5 mg/kg per 10 giorni sopprime significativamente l'artrite indotta da collagene nei topi in modo dose-dipendente, inibendo l'iperplasia sinoviale e la distruzione articolare, mentre le concentrazioni sieriche di anticorpi anti-collagene di tipo II (CII) e le risposte proliferative al CII sono mantenute. Negli xenotrapianti di Hct116 con p21 intatta in topi nudi, la somministrazione di CPT-11 (100 mg/kg) seguita da S1230 (3 mg/kg) 7 e 16 ore dopo inibisce significativamente la regressione tumorale dell'86% e dell'82%, rispettivamente, mostrando un'inibizione >2 volte rispetto al solo CPT-11 del 40%. La combinazione produce un tasso di risposta completa (CR) di circa il 30% in contrasto con il solo CPT-11 dove non si trova alcuna CR.
Riferimenti	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11063609/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15689157/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18469809/ [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/8674031/ [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12190313/ [6] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18209094/ [7] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11751522/ [8] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18469809/ [9] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11311660/

Applicazioni

Metodi	Biomarcatori	Immagini	PMID
Western blot	Cleaved caspase-8 / Cleaved caspase-9 / Cleaved caspase-3 p-RNAPII / p-eIF4E / Mnk1 p-ERK / ERK / p-p38 / p-4EBP1 / 4EBP1 / p-S6 CDK2 / CDK4 / Cyclin A / p21 / p27 / Rb		31193061
Growth inhibition assay	Cell viability		31193061

Informazioni sullo studio clinico

(dati da https://clinicaltrials.gov, aggiornato il 2024-05-22)

Numero NCT	Reclutamento	Condizioni	Sponsor/Collaboratori	Data di inizio	Fasi
NCT03441555	Completed	Acute Myeloid Leukemia (AML)	AbbVie\|Sumitomo Pharma America Inc.	May 30 2018	Phase 1
NCT03298984	Completed	Acute Myeloid Leukemia	Sumitomo Pharma America Inc.	September 25 2017	Phase 1

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