AEE788 (NVP-AEE788) EGFR inibitore

AEE788 (NVP-AEE788) inibisce anche KDR, c-abl, c-Src e Flt-1 con IC50 di 50-80 nM. Non è sensibile a ErbB-4, PDGFR-β, Flt-3, Flt-4, RET e c-Kit e non ha azione inibitoria su Ins-R, IGF-1R, PKC-α e PKA. Questo composto inibisce potentemente la fosforilazione di EGFR nelle cellule A431 con IC50 di 11 nM. Inibisce anche la fosforilazione di KDR nelle cellule CHO e di erbB2 nelle cellule BT-474, senza alcun effetto sulla fosforilazione indotta da PDGF nelle cellule A31. Inibisce la proliferazione delle cellule NCI-H596, MK, BT-474 e SK-BR-3 con IC50 di 78, 56, 49 e 381 nM, rispettivamente. Inoltre, ha la proprietà aggiuntiva di inibire la proliferazione cellulare guidata dal mutante EGFR, inclusi 32D/EGFR e 32D/EGFRvIII. Inoltre, inibisce la proliferazione delle HUVEC sia indotta da EGF che da VEGF con IC50 di 43 e 155 nM, rispettivamente. [1] Inibisce la fosforilazione di EGFR, VEGFR2, Akt e MAPK nelle linee cellulari di SCC cutaneo umano (cellule Colo16, HaCaT, SRB1 e SRB12), il che porta all'inibizione della crescita e all'induzione dell'apoptosi. [2] Inibisce la fosforilazione di EGFR e Akt nelle cellule HT29 a 0,2-1,0 μM. [3] Inibisce la proliferazione cellulare e previene l'attivazione di HER1, HER2 e HER3 indotta da EGF e neuregulina nelle linee cellulari di medulloblastoma. Mostra attività soppressive della crescita nelle cellule di medulloblastoma chemio-sensibili e chemio-resistenti. [4]

Saggi di Protein Kinase

I saggi in vitro di Protein Tyrosine Kinase per AEE788 (NVP-AEE788) vengono eseguiti in piastre a 96 pozzetti (30 μL) a temperatura ambiente per 15–45 min utilizzando i domini chinasi ricombinanti fusi alla glutatione S-transferasi (4-100 ng, a seconda dell'attività specifica). Il [γ³³P]ATP è utilizzato come donatore di fosfato e il peptide poliGluTyr-(4:1) come accettore. Con l'eccezione della Protein Kinase C-α, la chinasi ciclina-dipendente 1/cycB e la Protein Kinase A sono rispettivamente solfato di protamina (200 μg/mL), istone H1 (100 μg/mL) e l'eptapeptide Leu-Arg-Arg-Ala-Ser-Leu-Gly (noto come Kemptide Bachem) e sono utilizzati come substrati peptidici. I saggi sono ottimizzati per ogni chinasi utilizzando le seguenti concentrazioni di ATP: 1,0 μM (c-Kit, c-Met, c-Fms, c-Raf-1 e RET), 2,0 μM (EGFR, erbB2, ErbB3 ed ErbB4), 5,0 μM (c-abl), 8,0 μM (Flt-1, Flt-3, Flt-4, Flk, KDR, FGFR-1 e Tek), 10,0 μM (PDGFR-β, Protein Kinase C-α e chinasi ciclina-dipendente 1) e 20,0 μM (c-Src e Protein Kinase A). La reazione viene terminata con l'aggiunta di 20 μL di EDTA 125 mM. Trenta μL (c-abl, c-Src, recettore del fattore di crescita 1 insulino-simile, RET-Men2A e RET-Men2B) o 40 μL (tutte le altre chinasi) della miscela di reazione vengono trasferiti su una membrana di Immobilon-polivinilidene difluoruro, pre-immersa in H3PO4 allo 0,5% e montata su un collettore a vuoto. Viene quindi applicato il vuoto e ogni pozzetto viene risciacquato con 200 μL di H₃PO₄ allo 0,5%. Le membrane vengono rimosse e lavate quattro volte con H₃PO₄ all'1,0% e una volta con etanolo. Le membrane essiccate vengono contate dopo essere state montate in un telaio Packard TopCount a 96 pozzetti e con l'aggiunta di 10 μL/pozzetto di Microscint. I valori di IC50 (±SE) sono calcolati mediante analisi di regressione lineare della percentuale di inibizione e sono medie di almeno tre determinazioni.

AEE788 (NVP-AEE788) produce un'inibizione dose-dipendente della crescita tumorale in modelli di xenotrapianto NCI-H596 o DU145, con solo lievi modifiche del peso corporeo. Induce la regressione tumorale del 57% a 50 mg/kg nel modello NeuT/erbB2 GeMag e inibisce potentemente la fosforilazione di EGFR indotta da EGF nei tumori A431 e la fosforilazione di erbB2 nei tumori GeMag. Questo composto ha inibito in modo dose-dipendente l'angiogenesi indotta da VEGF e non inibisce l'angiogenesi indotta da bFGF. [1] Sopprime la crescita del volume tumorale del 54% negli xenotrapianti Colo16 a 50 mg/kg, il che è dovuto all'inibizione della fosforilazione di EGFR, VEGFR, Akt e MAPK. [2] A 50 mg/kg, inibisce anche la crescita dei tumori nel cieco e nel peritoneo (>50%) e riduce l'incidenza delle metastasi linfonodali al 70% nelle cellule HT29 impiantate nel cieco di topi nudi, senza perdita di peso corporeo e prove macroscopiche di neovascolarizzazione. Abbassa significativamente i livelli di espressione di pEGFR e pVEGFR nei tumori cecali HT29 e non altera quelli di EGF, VEGF, EGFR o VEGFR. Combinato con CPT-11, si traduce in tumori significativamente più piccoli e inibizione completa delle metastasi linfonodali. [3] Questo composto inibisce la crescita degli xenotrapianti Daoy, DaoyPt e DaoyHER2 rispettivamente del 51%, 45% e 72%. [4] Potrebbe promuovere la generazione di specie reattive dell'ossigeno mediate da LBH589 nelle cellule tumorali K562, che a sua volta aumenta l'apoptosi. [5]