AEE788 (NVP-AEE788)

N. catalogoS1486 Lotto:S148601

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Dati tecnici

Formula

C27H32N6
Peso molecolare 440.58 Numero CAS 497839-62-0
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 88 mg/mL (199.73 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione AEE788 (NVP-AEE788) è un potente inibitore di EGFR e HER2/ErbB2 con IC50 di 2 nM e 6 nM, rispettivamente. È meno potente contro VEGFR2/KDR, c-Abl, c-Src e Flt-1 e non inibisce Ins-R, IGF-1R, PKCα o CDK1. Questo composto ha raggiunto gli studi clinici di Fase 1/2.
Target
EGFR
(Cell-free assay)		 HER2/ErbB2
(Cell-free assay)		 c-Abl
(Cell-free assay)		 FLT1
(Cell-free assay)		 c-Fms
(Cell-free assay)		 Visualizza altro
2 nM 6 nM 52 nM 59 nM 60 nM
In vitro AEE788 (NVP-AEE788) inibisce anche KDR, c-abl, c-Src e Flt-1 con IC50 di 50-80 nM. Non è sensibile a ErbB-4, PDGFR-β, Flt-3, Flt-4, RET e c-Kit e non ha azione inibitoria su Ins-R, IGF-1R, PKC-α e PKA. Questo composto inibisce potentemente la fosforilazione di EGFR nelle cellule A431 con IC50 di 11 nM. Inibisce anche la fosforilazione di KDR nelle cellule CHO e di erbB2 nelle cellule BT-474, senza alcun effetto sulla fosforilazione indotta da PDGF nelle cellule A31. Inibisce la proliferazione delle cellule NCI-H596, MK, BT-474 e SK-BR-3 con IC50 di 78, 56, 49 e 381 nM, rispettivamente. Inoltre, ha la proprietà aggiuntiva di inibire la proliferazione cellulare guidata dal mutante EGFR, inclusi 32D/EGFR e 32D/EGFRvIII. Inoltre, inibisce la proliferazione delle HUVEC sia indotta da EGF che da VEGF con IC50 di 43 e 155 nM, rispettivamente. Inibisce la fosforilazione di EGFR, VEGFR2, Akt e MAPK nelle linee cellulari di SCC cutaneo umano (cellule Colo16, HaCaT, SRB1 e SRB12), il che porta all'inibizione della crescita e all'induzione dell'apoptosi. Inibisce la fosforilazione di EGFR e Akt nelle cellule HT29 a 0,2-1,0 μM. Inibisce la proliferazione cellulare e previene l'attivazione di HER1, HER2 e HER3 indotta da EGF e neuregulina nelle linee cellulari di medulloblastoma. Mostra attività soppressive della crescita nelle cellule di medulloblastoma chemio-sensibili e chemio-resistenti.
In vivo AEE788 (NVP-AEE788) produce un'inibizione dose-dipendente della crescita tumorale in modelli di xenotrapianto NCI-H596 o DU145, con solo lievi modifiche del peso corporeo. Induce la regressione tumorale del 57% a 50 mg/kg nel modello NeuT/erbB2 GeMag e inibisce potentemente la fosforilazione di EGFR indotta da EGF nei tumori A431 e la fosforilazione di erbB2 nei tumori GeMag. Questo composto ha inibito in modo dose-dipendente l'angiogenesi indotta da VEGF e non inibisce l'angiogenesi indotta da bFGF. Sopprime la crescita del volume tumorale del 54% negli xenotrapianti Colo16 a 50 mg/kg, il che è dovuto all'inibizione della fosforilazione di EGFR, VEGFR, Akt e MAPK. A 50 mg/kg, inibisce anche la crescita dei tumori nel cieco e nel peritoneo (>50%) e riduce l'incidenza delle metastasi linfonodali al 70% nelle cellule HT29 impiantate nel cieco di topi nudi, senza perdita di peso corporeo e prove macroscopiche di neovascolarizzazione. Abbassa significativamente i livelli di espressione di pEGFR e pVEGFR nei tumori cecali HT29 e non altera quelli di EGF, VEGF, EGFR o VEGFR. Combinato con CPT-11, si traduce in tumori significativamente più piccoli e inibizione completa delle metastasi linfonodali. Questo composto inibisce la crescita degli xenotrapianti Daoy, DaoyPt e DaoyHER2 rispettivamente del 51%, 45% e 72%. Potrebbe promuovere la generazione di specie reattive dell'ossigeno mediate da LBH589 nelle cellule tumorali K562, che a sua volta aumenta l'apoptosi.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Saggi di Protein Kinase

    I saggi in vitro di Protein Tyrosine Kinase per AEE788 (NVP-AEE788) vengono eseguiti in piastre a 96 pozzetti (30 μL) a temperatura ambiente per 15–45 min utilizzando i domini chinasi ricombinanti fusi alla glutatione S-transferasi (4-100 ng, a seconda dell'attività specifica). Il [γ33P]ATP è utilizzato come donatore di fosfato e il peptide poliGluTyr-(4:1) come accettore. Con l'eccezione della Protein Kinase C-α, la chinasi ciclina-dipendente 1/cycB e la Protein Kinase A sono rispettivamente solfato di protamina (200 μg/mL), istone H1 (100 μg/mL) e l'eptapeptide Leu-Arg-Arg-Ala-Ser-Leu-Gly (noto come Kemptide Bachem) e sono utilizzati come substrati peptidici. I saggi sono ottimizzati per ogni chinasi utilizzando le seguenti concentrazioni di ATP: 1,0 μM (c-Kit, c-Met, c-Fms, c-Raf-1 e RET), 2,0 μM (EGFR, erbB2, ErbB3 ed ErbB4), 5,0 μM (c-abl), 8,0 μM (Flt-1, Flt-3, Flt-4, Flk, KDR, FGFR-1 e Tek), 10,0 μM (PDGFR-β, Protein Kinase C-α e chinasi ciclina-dipendente 1) e 20,0 μM (c-Src e Protein Kinase A). La reazione viene terminata con l'aggiunta di 20 μL di EDTA 125 mM. Trenta μL (c-abl, c-Src, recettore del fattore di crescita 1 insulino-simile, RET-Men2A e RET-Men2B) o 40 μL (tutte le altre chinasi) della miscela di reazione vengono trasferiti su una membrana di Immobilon-polivinilidene difluoruro, pre-immersa in H3PO4 allo 0,5% e montata su un collettore a vuoto. Viene quindi applicato il vuoto e ogni pozzetto viene risciacquato con 200 μL di H3PO4 allo 0,5%. Le membrane vengono rimosse e lavate quattro volte con H3PO4 all'1,0% e una volta con etanolo. Le membrane essiccate vengono contate dopo essere state montate in un telaio Packard TopCount a 96 pozzetti e con l'aggiunta di 10 μL/pozzetto di Microscint. I valori di IC50 (±SE) sono calcolati mediante analisi di regressione lineare della percentuale di inibizione e sono medie di almeno tre determinazioni.
Saggio cellulare:[1]
  • Linee cellulari

    T24, BT-474, SK-BR-3, and NCI-H596 cells

  • Concentrazioni

    ~10 μM

  • Tempo di incubazione

    4 or 6 days

  • Metodo

    Methylene Blue Cell Proliferation Assay. Cells are seeded at 1.5 × 103 cells/well into 96-well microtiter plates and incubated overnight at 37 °C, 5% v/v CO2 and 80% relative humidity. On day 1, dilutions of AEE788 (NVP-AEE788) are added, with the highest concentration being 10 μM. After incubation of the cell plates for an additional 4 (T24) or 6 (BT-474, SK-BR-3, and NCI-H596) days, cells are fixed with 3.3% v/v glutaraldehyde, washed with water, and stained with 0.05% w/v methylene blue. After washing, the dye is eluted with 3% HCl and the absorbance measured at 665 nm with a SpectraMax 340 spectrophotometer. IC50 values are determined by mathematical curve-fitting and are defined as the drug concentration leading to 50% inhibition of net cell mass increase compared with untreated control cultures.
Studio sugli animali:[1]
  • Modelli animali

    NCI-H596, DU145, A431, B16 and oncogenic NeuT-transfected HC11 cells in female BALB/c nu/nu (nude) mice

  • Dosaggi

    50 mg/kg

  • Somministrazione

    Dosed orally

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15256466/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15756022/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15867367/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20885895/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/17317822/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>EGFR-SGLT1 interaction is irresponsive to modulators of EGFR’s tyrosine kinase. A: Immunoprecipitation coupled Western blot analysis ofinteractionsbetween EGFR-HA and SGLT1-FlaginHEK293 cells treatedwith EGF or AEE788. EGFR, total EGFR; pEGFR, phosphorylated EGFR; IP, immunoprecipitation; IB, immunoblot. Input, expression levels of indicated exogenous proteinsin HEK293 whole celllysates used for the IP.</p>

, , The Prostate, 2013, 73:1453-1461.

Representative images of mitochondria of PC3 cells treated with DMSO, EGF (20 ng/ml) AEE788 (a small molecular EGFR inhibitor at 6 μM) or AEE788+EGF for 24 h. Mitochondria were stained with Mitotracker Red and images were taken with a confocal microscope.

Dati da [ , , Cell Cycle, 2014, 13(15):2415-30 ]

Sellecks AEE788 (NVP-AEE788) È stato citato da 13 Pubblicazioni

A community challenge for a pancancer drug mechanism of action inference from perturbational profile data [ Cell Rep Med, 2022, 3(1):100492] PubMed: 35106508
Comprehensive pharmacogenomic characterization of gastric cancer. [ Genome Med, 2020, 18;12(1):17] PubMed: 32070411
Targeting the non-canonical roles of PCNA modifies and increases the response to targeted anti-cancer therapy [ Oncotarget, 2019, 10(68):7185-7197] PubMed: 31921382
Rationale for Using Irreversible Epidermal Growth Factor Receptor Inhibitors in Combination with Phosphatidylinositol 3-Kinase Inhibitors for Advanced Head and Neck Squamous Cell Carcinoma. [ Mol Pharmacol, 2019, 95(5):528-536] PubMed: 30858165
Targeted reduction of the EGFR protein, but not inhibition of its kinase activity, induces mitophagy and death of cancer cells through activation of mTORC2 and Akt. [ Oncogenesis, 2018, 7(1):5] PubMed: 29358623
Synergistic induction of apoptosis by salinomycin and gefitinib through lysosomal and mitochondrial dependent pathway overcomes gefitinib resistance in colorectal cancer. [ Oncotarget, 2017, 8(14):22414-22432] PubMed: 26461472
A high-content EMT screen identifies multiple receptor tyrosine kinase inhibitors with activity on TGFβ receptor [ Oncotarget, 2016, 7(18-:25983-6002] PubMed: 27036020
[ Oncotarget, 2015, ] PubMed: 25965827
[ Oncotarget, 2015, ] PubMed: 26378037
Phosphorylation of Mutationally Introduced Tyrosine in the Activation Loop of HER3 Confers Gain-of-Function Activity [Hu Z, et al. PLoS One, 2015, 10(4):e0123623] PubMed: 25853726

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