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3-Methyladenine (3-MA) Inibitore di Autophagy/PI3K

N. Cat.S2767

La 3-Methyladenine (3-MA) è un inibitore selettivo di PI3K per Vps34 e PI3Kγ con IC50 di 25 μM e 60 μM nelle cellule HeLa. Blocca costantemente la PI3K di classe I, mentre la soppressione della PI3K di classe III è transitoria, e inibisce anche la formazione di autophagosome. Le soluzioni sono instabili e dovrebbero essere preparate al momento.
3-Methyladenine (3-MA) PI3K inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 149.15

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Controllo Qualità

Lotto: Purezza: 99.97%
99.97

Prodotti spesso usati con 3-Methyladenine (3-MA)

Necrostatin-1 (Nec-1)

It and Necrostatin-1 inhibit cell death of bone marrow macrophages (BMDM) induced by LPS/zVAD and PolyI: C/zVAD.

Z-VAD-FMK

This compound and Z-VAD-FMK combination confirm vital role of programmed cell death in pristimerin-mediated anti-cancer actions.

Ferrostatin-1 (Fer-1)

This compound and Ferrostatin-1 use abolishes acrylamide (ACR)-induced cell death in chondrocytes.

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dellattività PMID
K562 Function Assay 10mM 1h decreases the expression of LC3-II and the formation of autophagosomes 21864037
Jurkat Function Assay 10mM 1h decreases the expression of LC3-II and the formation of autophagosomes 21864037
HeLa  Cytotoxicity Assay 2mM 24h inhibites the cytotoxicity of silibinin to HeLa cells. 21875385
PC12/TetOn Function Assay 0.1/1mM 18h leads to α-syn(WT) accumulation, toxicity, and oligomer formation  21906659
RMPI8226  Function Assay 5mM 1h suppresses the level of autophagy under nutrient depletion 21915620
MCF-7 Function Assay 10mM 48h blocks autophagy induced by bortezomib 21931937
HBx  Apoptosis Assay 10mM 48h DMSO increases cell death 22020078
Marc-145 Function Assay 5mM 12/24/36h reduces the PRRSV titers and the protein expression 22119900
U937 Function Assay 2mM 12h decreases the autophagy ratio  22155150
BGC-823 Function Assay 5mM 2h inhibits the rate of autophagic cells 22322152
A549 Function Assay 0.1mM 24h suppresses SU11274-induced cell death 22466960
pDCs Function Assay 10mM 0.5h  reduces the induction of IFN-α by ssRNA40 22396599
HeLa  Apoptosis Assay 5mM 24h induces caspase-dependent cell death 22545128
U251  Apoptosis Assay 5mM 24h increases S1-induced cell death 22579788
MCF-7  Apoptosis Assay 0.1mM 6h enhances sirtinol-induced apoptosis 22751989
PC-3  Apoptosis Assay 2mM 2h increases ORI-induced cell death 22745580
HCT116 Apoptosis Assay 5mM 24h DMSO enhances apigenin-induced cell death 24626522
U2OS Growth Inhibition Assay 10mM 24h intensifies the growth inhibition induced by Dox 24639013
A2780cp Apoptosis Assay 2.5mM 1h ddH2O enhances cisplatin-induced cell death 24817946
HepG2 Function Assay 5mM 4h increases cellular levels of HL  24713587
Microglia  Apoptosis Assay 5mM 24h decreases hypoxia-induced cell death 24818601
MDA-MB 231 Apoptosis Assay 5mM 0.5h modulates Tocomin® induced apoptosis 24830781
PANC-1  Apoptosis Assay 1mM 48h DMSO enhances bortezomib-induced cell viability loss 24842158
MDA-MB-231 Function Assay 2mM 48h promotes TM-induced cell death 24970676
MDA-MB-231 Function Assay 2mM 24h inhibits autophagy induced by TM  24970676
MCF-7  Function Assay 2mM 48h promotes TM-induced cell death 24970676
MCF-7  Function Assay 2mM 24h inhibits autophagy induced by TM  24970676
HepG2 Apoptosis Assay 3mM 5h reduces cell apoptosis induced by QDs 22836595
HeLa Apoptosis Assay 10mM 2h decreases cell viability co-treatment with PEI 23000135
SK-HEP-1 Apoptosis Assay 10mM 1h protects against autophagy and induces apoptosis in bufalin-treated cells 22858649
MDA-MB231 Function Assay 5mM 1h increases resveratrol-mediated caspase activation and cell death 23088850
PaCa44 Apoptosis Assay 2.5mM 1h reduces genipin-mediated apoptosis 23124112
T-47D Function Assay 10mM 2h inhibits autophagy process and increases rapamycin induced apoptosis 23300026
GTL-16  Apoptosis Assay 5mM 24h reduces cell viability as compared to cells treated with MET inhibitors 23313490
U251MG  Function Assay 3mM 1h suppresses LC3-II protein expression 23338618
T24 Function Assay 10mM 1h reduces the cleavage of LC3 after baicalin treatment 23354080
HUVECs Function Assay 3mM 24h blocks the protective effect of resveratrol by inhibiting autophagy 23358928
MCF-7  Function Assay 5mM 24h inhibits starvation-induced autophagy 23395679
Hela  Function Assay 5mM 24h inhibits starvation-induced autophagy 23395679
OR6 Function Assay 10mM 72h suppresses HCV replication and formation of autophagosomes 23395875
HT-29  Function Assay 1mM 48/96h inhibits AMPK induces autophagic cell death 23508272
SH-SY5Y Cytotoxicity Assay 5mM 24h increases PCN toxicity 23525265
Saos-2  Apoptosis Assay 1mM 96h increases cell death induced by PCX 23563171
1321N1 Cytotoxicity Assay 5mM 24h protects cell against PCN-induced toxicity 23525265
A2780 Apoptosis Assay 5mM 24h converts FTY720 with CDDP into an additive effect towards killing ovarian cancer cells 23592281
OV2008 Apoptosis Assay 5mM 24h converts FTY720 with CDDP into an additive effect towards killing ovarian cancer cells 23592281
PC12  Function Assay 10mM 24h water  inhibits chymotrypsin-like proteasomal activity. 23603979
SH-SY5Y Apoptosis Assay 5mM 1h abolishes celastrol neuroprotective effect 23619395
SH-SY5Y Function Assay 1mM 24h inhibits the autophagy induced by TOCP 23743148
HepG2 Function Assay 10mM 24h inhibits siTIGAR- and HBSS-induced autophagy 23817040
HeLa Function Assay 10mM 2h suppresses LC3 II expressison 23864738
HONE-1  Function Assay 5mM 1h represses 6r-mediated ROS production 23892358
MCF7 Function Assay 5mM 24h increases CuO induced cell death 23962629
HO8910 Apoptosis Assay 10mM 12h enhances B19-induced apoptosi 23983610
SMMC-7721 Apoptosis Assay 5mM 24h attenuates TNF-α protection against serum starvation-mediated apoptosis 24066693
Hep3B Apoptosis Assay 5mM 24h attenuates TNF-α protection against serum starvation-mediated apoptosis 24066693
H460 Function Assay 10mM 4h increases cisplatin-induced cell death 24173208
A549 Function Assay 10mM 4h inhibits autophagy induced by irradiation 24142735
H1299  Function Assay 10mM 4h increases cisplatin-induced cell death 24173208
WiDr Function Assay 10mM 1h inhibits PCBL-induced LC3 II expression 24190489
LoVo  Apoptosis Assay 5mM 48h enhances DCA-induced apoptosis. 24201812
HepG2 E47 Function Assay 2.5mM 48h increases the toxicity of AA, BSO, and CCl4 24273738
RKO Function Assay 2mM 1h DMSO enhances cell death by geldanamycin 24291777
Hep3B Apoptosis Assay 2mM 12h DMSO inhibits AZD8055-induced cell death 24297300
ACHN-5968 Apoptosis Assay 5mM 3h enhances paclitaxel-mediated apoptosis  24305604
Huh7 Apoptosis Assay 2mM 12h DMSO inhibits AZD8055-induced cell death 24297300
UOK257 Apoptosis Assay 5mM 3h enhances paclitaxel-mediated apoptosis  24305604
ECSCs  Apoptosis Assay 10mM 4h decreases rapamycin-treated apoptosis 24319109
MCF-7  Function Assay 10mM 24h inhibits the autophagy induced by chemotherapy drugs 24315578
SGC-7901  Apoptosis Assay 2mM 1h increases CA-4 induced apoptosis 24321340
SMMC-7721 Apoptosis Assay 2mM 1h increases CA-4 induced apoptosis 24321340
T24 Apoptosis Assay 5mM 1.5h potentiates celecoxib-induced apoptosis 24349176
NTUB1 Apoptosis Assay 5mM 1.5h potentiates celecoxib-induced apoptosis 24349176
MG-63 Apoptosis Assay 10mM 12h enhances DP-induced apoptosis 24358301
MG-63 Apoptosis Assay 0.5/1mM 32h enhances salinomycin-induced cell apoptosis 24358342
MG-63 Function Assay 0.5/1mM 48h induces salinomycin-induced cell viability loss 24358342
U2OS  Function Assay 0.5/1mM 48h induces salinomycin-induced cell viability loss 24358342
HGC-27 Function Assay 10mM 1h inhibits the cell viability loss by RAD001 or MK-2206 24416349
HCT116  Apoptosis Assay 5mM 24h enhances the apoptosis induced by apigenin 24626522
A549 Apoptosis Assay 10mM 48h accelerates the reduction of cell viability induced by PTX 24626722
Saos-2 Apoptosis Assay 10mM 24h intensifies the growth inhibition of the U2OS cells induced by Dox 24639013
U2OS Apoptosis Assay 10mM 24h intensifies the growth inhibition of the U2OS cells induced by Dox 24639013
HepG2 Function Assay 5mM 4h increases HL release 24713587
A549 Apoptosis Assay 5mM 48h decreases the percentage of cell death and expression levels of caspase-3, Beclin-1 and LC3-II 24706303
A2780cp Apoptosis Assay 2.5mM 1h ddH2O enhances cisplatin-induced cell death 24817946
Microglia  Apoptosis Assay 5mM 24h decreases hypoxia-induced cell death 24818601
HT-29  Apoptosis Assay 1mM 48h DMSO enhances bortezomib-induced cell viability loss 24842158
MDR Apoptosis Assay 10mM 6h strengthens the power of anticancer drugs 25019701
H157 Function Assay 5mM 2h suppresses SPC induced accumulation of LC3-II 25285628
A549  Function Assay 5mM 2h suppresses SPC induced accumulation of LC3-II 25285628
A2780cp  Growth Inhibition Assay 1mM 1h increases cisplatin-induced cell death 25322694
NBL-W-S  Apoptosis Assay 1mM 6h increases cell apoptosis induced by GANT-61 25323222
NBL-W-S  Growth Inhibition Assay 1mM 6h enhances GANT-61 toxicity 25323222
A549  Apoptosis Assay 5mM 2h DMSO inhibits BDMC-induced apoptotic cell death 25716561
95D Apoptosis Assay 5mM 2h DMSO inhibits BDMC-induced apoptotic cell death 25716561
A549  Growth Inhibition Assay 3mM 2h DMSO reduces growth inhibitory effect of BDMC 25716561
95D Growth Inhibition Assay 3mM 2h DMSO reduces growth inhibitory effect of BDMC 25716561
Nara-H Growth Inhibition Assay 5mM 48h enhances temsirolimusmediated suppression of Nara-H cell proliferation 21805033
HUVECs Function Assay 10mM 0.5h decreases the AGE-BSAinduced autophagy leve 21468592
HepG2 Apoptosis Assay 2mM 1h enhances radiation-induced cell death 21453691
U-2 OS qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for U-2 OS cells 29435139
A673 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for A673 cells 29435139
DAOY qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for DAOY cells 29435139
Saos-2 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Saos-2 cells 29435139
BT-37 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for BT-37 cells 29435139
RD qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for RD cells 29435139
SK-N-SH qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-SH cells 29435139
BT-12 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for BT-12 cells 29435139
MG 63 (6-TG R) qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for MG 63 (6-TG R) cells 29435139
NB1643 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB1643 cells 29435139
OHS-50 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for OHS-50 cells 29435139
Rh41 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Rh41 cells 29435139
Rh30 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Rh30 cells 29435139
SJ-GBM2 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SJ-GBM2 cells 29435139
SK-N-MC qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-MC cells 29435139
NB-EBc1 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB-EBc1 cells 29435139
LAN-5 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for LAN-5 cells 29435139
Rh18 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Rh18 cells 29435139
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità

Peso molecolare 149.15 Formula

C6H7N5

Conservazione (Dalla data di ricezione) 3 years -20°C powder
N. CAS 5142-23-4 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock Le soluzioni sono instabili. Preparare al momento o acquistare formati piccoli e preconfezionati. Riconfezionare al ricevimento.
Sinonimi NSC 66389 Smiles CN1C=NC(=N)C2=C1N=CN2

Solubilità

In vitro
Lotto:

DMSO : 10 mg/mL (67.04 mM) Riscaldato con bagno dacqua a 50°C; Sonicato;
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Ethanol : 10 mg/mL

Water : 4 mg/mL

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante lesperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non cè una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nellaggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere allaggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno dacqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo dazione

Targets/IC50/Ki
Autophagy
Vps34
(HeLa cells)
25 μM
PI3Kγ
(HeLa cells)
60 μM
In vitro

La leggera preferenza per la prevenzione di Vps34 da parte della 3-Methyladenine (3-MA) deriva probabilmente da un anello idrofobico specifico di Vps34, che circonda il gruppo 3-metile di questo composto. È stato riportato che causa la morte delle cellule tumorali sia in condizioni normali che di fame, e potrebbe anche sopprimere la migrazione e l'invasione cellulare indipendentemente dalla sua capacità di inibire l'Autophagy, implicando che possiede funzioni diverse dalla soppressione dell'Autophagy. Questo composto induce la morte cellulare caspasi-dipendente che è indipendente dall'inibizione dell'Autophagy. Il trattamento con 5 mM di esso riduce la percentuale di cellule HeLa private di glucosio che mostrano punti GFP-LC3 al 23%. I livelli di LC3-I aumentano e i livelli di LC3-II diminuiscono tra 12 e 48 ore nelle cellule trattate con 3-MA. La conversione di LC3-I in LC3-II è soppressa dal composto. Il trattamento delle cellule HeLa con esso a 2,5 mM o 5 mM per un giorno non influisce sulla vitalità cellulare, mentre il trattamento con 10 mM per un giorno provoca una diminuzione del 25,0% della vitalità cellulare. Il trattamento delle cellule con 2,5, 5 o 10 mM per due giorni provoca una diminuzione della vitalità dell'11,5%, 38,0% e 79,4%, rispettivamente. Diminuisce la vitalità cellulare in modo tempo- e dose-dipendente e accorcia significativamente la durata dell'arresto prometasico indotto dal nocodazolo. La soppressione dell'Autophagy da parte della 3-MA inibisce la morte cellulare indotta da SU11274. Il trattamento prolungato con esso (fino a 9 ore) induce una significativa conversione di LC3 I a II nei MEF di tipo selvaggio. Il trattamento prolungato con 3-MA, ma non con wortmannina, aumenta marcatamente la punteggiatura/aggregazione di GFP-LC3. La sua conversione di LC3 indotta e la liberazione di GFP libera sono ATG7-dipendenti. Il trattamento con esso porta a un evidente aumento del livello della proteina p62. Il composto aumenta il livello di p62 anche nei MEF Atg5−/− così come nelle cellule con delezione di ATG5 mediata da DOX. Inibisce la PI3K di classe I e di classe III con schemi temporali diversi. La sua conversione di LC3 I a LC3 II indotta è drasticamente compromessa nelle cellule Tsc2−/− rispetto alle cellule di tipo selvaggio. Questo composto interrompe la funzione anti-autofagica del complesso mTOR 1.

Saggio chinasico
Saggio di degradazione proteica
Le cellule HeLa vengono radiomarcate per 24 ore con 0,05 mCi/mL di l-[U- 14C]valina. Al termine del periodo di marcatura, le cellule vengono risciacquate tre volte con PBS. Le cellule vengono incubate per i tempi designati in terreno completo o EBSS con o senza la presenza di 10 mM di 3-Methyladenine (3-MA).
In vivo

La 3-Methyladenine (3-MA) blocca l'Autophagy attraverso il suo effetto sulla fosfatidilinositolo 3-chinasi (PI3K) di classe III. Il trattamento con questo composto non altera il grado di emorragia rispetto al gruppo con emorragia subaracnoidea (SAH). Il suo pretrattamento aggrava significativamente i sintomi neurologici se confrontato con il gruppo SAH + veicolo. L'Autophagy è diminuita quando viene applicata. Al contrario, la caspasi-3 clivata è marcatamente sovraregolata nel gruppo SAH + 3-MA. In linea con la sovraregolazione dell'espressione della caspasi-3 clivata, il numero di cellule TUNEL-positive nella corteccia destra è significativamente aumentato nel gruppo SAH + 3-MA rispetto al gruppo SAH + veicolo.

Riferimenti
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20123989/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22521819/

Applicazioni

Metodi Biomarcatori Immagini PMID
Western blot α-SMA / TGF-β / LC-3BI / LC-3B II / Beclin-1 / NF-κB p65 caspase-3 / caspase-9 / PARP VEGF APP / BACE1 / ADAM17 / Presenilin 1 / Presenilin 2 / Nicastrin / APH-1 / Pen-2 / LC3-1 / LC3-2
S2767-WB1
29296191
Immunofluorescence LC3 / Hif-α / COX2
S2767-IF1
29039446
Growth inhibition assay Cell viability
S2767-viability
26934124

Supporto tecnico

Istruzioni per la manipolazione

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

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Domande Frequenti

Domanda 1:
I'm also wondering whether it can be dissolved in water, or maybe something like culture medium, normal saline solution to form 10mM solution.

Risposta:
As the reference (http://www.plosone.org/article/info%3Adoi%2F10.1371%2Fjournal. pone.0035665), it was found to inhibit autophagy at concentrations ranging from 1 to 10 mM and was directly dissolved into the culture medium at the indicated concentrations. And we tested the solubility of S2767, and found its solubility in DMEM is 31 mg/mL at about 40°C.