Name: PHA-767491 HCl
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S2742
Rating: 5 (45 reviews)

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Controllo Qualità

Lotto: Purezza: 99.96%

99.96

Target correlati	HSP PD-1/PD-L1 ROCK Wee1 DNA/RNA Synthesis Microtubule Associated Ras KRas Aurora Kinase Casein Kinase
Altro CDK Inibitori	AS2863619 Ro-3306 SEL120 (SEL120-34A) hydrochloride INX-315 Tagtociclib (PF-07104091) PF-07220060 (CDK4/6-IN-6) AZD4573 ON123300 Enitociclib (BAY 1251152) Samuraciclib (ICEC0942) hydrochloride

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro

Linee cellulari	Tipo di saggio	Concentrazione	Tempo di incubazione	Descrizione dellattività
human SF268 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human SF268 cells after 72 hrs, IC50=0.86 μM
human HCT116 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HCT116 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=0.97 μM
human HCT16 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HCT16 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1 μM
human SW403 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human SW403 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1 μM
human A2780 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human A2780 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.07 μM
human SW48 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human SW48 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.2 μM
human MCF7 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human MCF7 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.3 μM
human U2OS cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human U2OS cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.49 μM
human COLO205 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human COLO205 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.5 μM
human OVCAR8 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human OVCAR8 cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=1.56 μM
human L363 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human L363 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.6 μM
human NHDF cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human NHDF cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.6 μM
human NCI-H929 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human NCI-H929 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=1.8 μM
human SF539 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human SF539 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=2.34 μM
human SW480 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human SW480 cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=2.67 μM
human NCI60 cells	Proliferation assay			Antiproliferative activity against human NCI60 cells, IC50=3.1 μM
human Jurkat cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human Jurkat cells after 72 hrs by proliferative assay, IC50=3.2 μM
human HCT15 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HCT15 cells expressing p53 gene after 72 hrs by proliferative assay, IC50=3.81 μM
human OPM2 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human OPM2 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=4.5 μM
human HT-29 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against human HT-29 cells after 72 hrs by luciferase based assay, IC50=5 μM
human K562 cells	Proliferation assay		72 h	Antiproliferative activity against p53 deficient human K562 cells after 72 hrs, IC50=5.87 μM
U937 cells	Function assay			Inhibition of TNFalpha production in U937 cells, IC50=19 μM
human HeLa cells	Function assay	5 μM	24 h	Induction of apoptosis in human HeLa cells assessed as appearance of PARP at 5 uM after 24 hrs
NHDF	Function assay	5 μM	16 h	Induction of cell cycle arrest in thymidine deficient NHDF assessed as DNA synthesis in S-phase at 5 uM after 16hrs FACS analysis in presence of serum
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità

Peso molecolare	249.7	Formula	C₁₂H₁₁N₃O.HCl	Conservazione (Dalla data di ricezione)	3 anni-20°Cpolvere
N. CAS	942425-68-5	Scarica SDF		Conservazione delle soluzioni stock	1 anno-80°Cin solvente 1 mese-20°Cin solvente
Sinonimi	CAY10572, NMS 1116354			Smiles	C1CNC(=O)C2=C1NC(=C2)C3=CC=NC=C3.Cl

Solubilità

In vitro
Lotto:

DMSO : 24 mg/mL (96.11 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa	Concentrazione	Volume	Peso molecolare
=	×	×

Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo Lotto:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 30%PEG300 2 2%Tween80 3 63%ddH2O Validato dai laboratori Selleck. Se necessiti di modifiche a questa formulazione, contatta il nostro team di vendita per test personalizzati.	1.000mg/ml (4.00mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 20 mg/ml clarified DMSO stock solution to 300 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 20 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 630 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante lesperimento)

Dosaggio: mg/kg Peso medio degli animali: g Volume di dosaggio per animale:μL Numero di animali:

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non cè una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH₂O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nellaggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere allaggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno dacqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo dazione

Caratteristiche	The first inhibitor that directly affects the mechanisms controlling initiation as opposed to elongation in DNA replication.
Targets/IC₅₀/Ki	Cdc7 (Cell-free assay) 10 nM CDK9 (Cell-free assay) 34 nM GSK-3β (Cell-free assay) 220 nM CDK2 (Cell-free assay) 240 nM CDK1 (Cell-free assay) 250 nM CDK5 (Cell-free assay) 460 nM MK2 (Cell-free assay) 470 nM PLK1 (Cell-free assay) 980 nM
In vitro	PHA-767491 mostra una selettività di circa 20 volte per Cdk1, Cdk2 e GSK3-β, una selettività di 50 volte per MK2 e Cdk5 e una selettività di 100 volte per PLK1 e CHK2. PHA-767491 inibisce la proliferazione cellulare in una varietà di linee cellulari umane con IC50 da 0,86 μM per SF-268 a 5,87 μM per K562, e induce significativamente l'apoptosi in modo p53-indipendente in quasi tutte le linee cellulari, in contrasto con il 5-FU che funziona solo in alcune linee cellulari. A differenza degli attuali inibitori della sintesi del DNA, il trattamento con PHA-767491 a 5 μM blocca l'inizio della replicazione del DNA ma non la progressione della forcella di replicazione, a causa della specifica inibizione della chinasi Cdc7 e della fosforilazione di Mcm2 nel sito Ser40 dipendente da Cdc7. I livelli di Mcl-1 sovraregolati nelle cellule OCI-LY1 e SU-DHL-4 resistenti ad ABT-737 possono essere significativamente diminuiti dal trattamento con PHA-767491 a 3 μM, probabilmente a causa dell'inibizione di Cdk9, portando al ripristino della sensibilità ad ABT-737. L'effetto pro-apoptosi diretto dipendente dai mitocondri di PHA-767491 si osserva anche quando applicato a 1 μM nelle cellule di leucemia linfatica cronica (CLL) quiescenti attraverso un meccanismo simile con EC50 di 0,34-0,97 μM. Nelle cellule CLL proliferanti stimolate da CD154 e interleuchina-4, il trattamento con PHA-767491 a 5 μM abolisce la sintesi del DNA inibendo Cdc7 piuttosto che innescando la morte cellulare.
Saggio chinasico	Saggi chinasici in vitro
Saggio chinasico	L'inibizione di Cdc7 e CDK9 da parte di PHA-767491 (IC50) è determinata utilizzando il saggio basato sullo scambiatore anionico forte (resina Dowex 1-X8, forma formato). Per ogni enzima, vengono inizialmente determinati i valori assoluti di K_m per l'ATP e il substrato specifico, e ogni saggio viene quindi eseguito a concentrazioni ottimizzate di ATP/³³P-γ-ATP mix (2K_m) e substrato (5K_m). Il saggio della chinasi Cdc7 viene eseguito in un tampone contenente 50 mM Hepes pH 7,9, 15 mM MgCl₂, 2 mM β-glicerofosfato, 0,2 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄, 2K_m ATP/³³P-γ-ATP mix, 5K_m Mcm2 (aa 10-294), 37 nM di Cdc7/Dbf4 ricombinante e concentrazione crescente di PHA-767491 in un volume finale di 30 μL, e incubato per 1 ora a 25 °C. Il saggio della chinasi CDK9 viene eseguito utilizzando 50 nM di Cdk9/ciclina T ricombinante in 50 mM HEPES pH 7,5, 10 mM MgCl₂, 1 mM DTT, 3 μM Na₃VO₄, 2K_m ATP/³³P-γ-ATP mix, 5K_m peptide CDT della RNA polimerasi e concentrazione crescente di PHA-767491 in un volume finale di 30 μL, e incubato per 1 ora a 25 °C. Dopo l'incubazione, viene aggiunta una quantità di 150 μL di resina/formiato (pH 3,0) per interrompere la reazione e catturare l'³³P-γ-ATP non reagito, separandolo dal substrato fosforilato in soluzione. Dopo 1 ora di riposo, un volume di 50 μL di surnatante viene trasferito in piastre Optiplate a 96 pozzetti. Dopo l'aggiunta di 150 μL di Microscint 40, la radioattività viene contata nel TopCount.
In vivo	L'amministrazione di PHA-767491 due volte al giorno per 5 giorni inibisce significativamente la crescita di xenotrapianti HL60 in modo dose-dipendente con un TGI del 50% e del 92% a dosi di 20 mg/kg e 30 mg/kg, rispettivamente, il cui effetto è marcato anche nei modelli di xenotrapianto A2780, Mx-1 e HCT-116, nonché nei carcinomi mammari, e correla con l'inibizione di Cdc7 e la successiva diminuzione della fosforilazione di Mcm2 nel sito Ser40 dipendente da Cdc7
Riferimenti	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18469809/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20197552/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21768328/

Applicazioni

Metodi	Biomarcatori	Immagini	PMID
Western blot	p-MCM2 / CDC7 RNA Pol II / p-RNA Pol II / Caspase-3 / PARP / Mcl-1 / XIAP / Bcl-xL / Bcl-2 / NOXA		24902048

Supporto tecnico

Istruzioni per la manipolazione

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Per qualsiasi altra domanda, si prega di lasciare un messaggio.

C1=C0/X	C1:	LOG(C1):
C2=C1/X	C2:	LOG(C2):
C3=C2/X	C3:	LOG(C3):
C4=C3/X	C4:	LOG(C4):
C5=C4/X	C5:	LOG(C5):
C6=C5/X	C6:	LOG(C6):
C7=C6/X	C7:	LOG(C7):
C8=C7/X	C8:	LOG(C8):

PHA-767491 HCl CDK inibitore

Struttura chimica

Peso molecolare: 249.7