Home Protein Tyrosine Kinase EGFR inhibitor Dacomitinib (PF-299804)

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Dacomitinib (PF-299804) HER Inhibitor

N. Cat.: S2727

Dacomitinib is a potent, irreversible pan-ErbB inhibitor, mostly to EGFR with IC50 of 6 nM in a cell-free assay. Dacomitinib inhibits ERBB2 and ERBB4 with IC50 of 45.7 nM and 73.7 nM, respectively. Dacomitinib is effective against NSCLCs with EGFR or ERBB2 mutations as well as those harboring the EGFR T790M mutation. Dacomitinib inhibits cell growth and induces apoptosis. Phase 2.
Dacomitinib (PF-299804) EGFR inhibitor Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 469.94

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.84%
99.84

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
PC9 cells Function assay 2 h Inhibition of EGFR exon 19 deletion activating mutant phosphorylation in human PC9 cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.63 nM 23930994
human LoVo cells Function assay 2 h Inhibition of wild type EGFR phosphorylation in human LoVo cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.011 μM 23930994
human NCI-H1975 cells Function assay 2 h Inhibition of EGFR L858R/T970M double mutant phosphorylation in human NCI-H1975 cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.042 μM 23930994
human NCI-H1975 cells Proliferation assay Antiproliferative activity against human NCI-H1975 cells assessed as growth inhibition, GI50=0.1233 μM 26310890
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB1 (unknown origin) (Met-668 to Ala-1211 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.006 μM. 27491023
NIH/3T3 Function assay 2 hrs Irreversible inhibition of full length human ERBB1 autophosphorylation transfected in EGF-stimulated mouse NIH/3T3 cells incubated for 2 hrs followed by stimulation with EGF for 10 mins, IC50 = 0.006 μM. 27491023
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB2 (unknown origin) (Ile-675 to Val-1256 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.046 μM. 27491023
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB4 (unknown origin) (Gly-259 to Gly-690 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.074 μM. 27491023
Sf9 Function assay 30 mins Irreversible inhibition of human recombinant GST-tagged JAK3 expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in polyglutamic acid-tyrosine phosphorylation after 30 mins by ELISA, IC50 = 3.57 μM. 27491023
NIH/3T3 Function assay 30 mg/kg 2 days In vivo inhibition of full length human ERBB1 autophosphorylation transfected in NIH/3T3 cells implanted in mouse at 30 mg/kg, po qd for 2 days measured 24 hrs post last dose by Western blot analysis 27491023
insect cells Function assay Inhibition of GST-tagged human EGFR catalytic domain expressed in insect cells, IC50 = 0.006 μM. 28754471
NCI-H1819 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human NCI-H1819 cells expressing wild type HER2 incubated for 72 hrs by MTS assay, IC50 = 0.029 μM. 28754471
insect cells Function assay Inhibition of GST-tagged human HER2 catalytic domain expressed in insect cells, IC50 = 0.0457 μM. 28754471
NCI-H1975 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human NCI-H1975 cells expressing EGFR T790M/L858R mutant incubated for 72 hrs by MTS assay, IC50 = 0.44 μM. 28754471
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 469.94 Formula

C24H25ClFN5O2

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 1110813-31-4 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi PF299804,PF299 Smiles COC1=C(C=C2C(=C1)N=CN=C2NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)NC(=O)C=CCN4CCCCC4

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 49 mg/mL (104.26 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Ethanol : 15 mg/mL

Water : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
EGFR
(Cell-free assay)
6.0 nM
ErbB2
(Cell-free assay)
45.7 nM
ErbB4
(Cell-free assay)
73.7 nM
In vitro

PF299804 è un inibitore specifico della famiglia di chinasi ERBB. Questo composto inibisce la segnalazione di EGFR e induce l'apoptosi nella linea cellulare H3255 GR contenente EGFR T790M. È efficace nelle linee cellulari sensibili e NSCLC. Questa sostanza chimica inibisce la crescita delle cellule H3255 e HCC827 modificate per esprimere EGFR T790M. Inibisce la fosforilazione di EGFR in presenza della mutazione T790M. Si ritiene che questo agente inibisca irreversibilmente l'attività della tirosina chinasi ERBB attraverso il legame al sito ATP e la modifica covalente dei residui di cisteina nucleofili nei domini catalitici dei membri della famiglia ERBB. Mostra significativi effetti inibitori della crescita nelle cellule di cancro gastrico amplificate per HER2 (SNU216, N87) e presenta valori di concentrazione inibitoria al 50% più bassi rispetto ad altri inibitori della tirosina chinasi EGFR, inclusi BIBW-2992 e CI-1033. Questo inibitore induce l'apoptosi e l'arresto in fase G1 e inibisce la fosforilazione dei recettori della famiglia HER e delle vie di segnalazione a valle, tra cui STAT3, AKT e le chinasi regolate dai segnali extracellulari (ERK) nelle cellule di cancro gastrico amplificate per HER2. Blocca inoltre la formazione di eterodimeri EGFR/HER2, HER2/HER3 e HER3/HER4, nonché l'associazione di HER3 con p85α nelle cellule SNU216. Una ricerca recente utilizza quarantasette linee di cancro al seno umano e linee epiteliali mammarie immortalizzate per valutare gli effetti inibitori di questo composto; i risultati indicano che inibisce preferenzialmente la crescita delle linee cellulari di cancro al seno amplificate per HER-2 rispetto alle linee non amplificate (RR = 3,39, p < 0,0001). Questa sostanza chimica riduce la fosforilazione di HER2, EGFR, HER4, AKT ed ERK nella maggior parte delle linee sensibili. Esercita il suo effetto antiproliferativo attraverso un arresto combinato in fase G0/G1 e un'induzione dell'apoptosi.

Saggio chinasico
Saggio della chinasi ERBB basato su ELISA
Le proteine di fusione citoplasmatiche ERBB1, ERBB 2 e ERBB4 sono prodotte clonando la sequenza ERBB1 (Met-668 ad Ala-1211), la sequenza ERBB2 (Ile-675 a Val-1256) e la sequenza ERBB4 (Gly-259 a Gly-690) nel vettore baculovirale pFastBac tramite PCR. Le proteine vengono espresse in cellule di insetto Sf9 infettate da baculovirus come proteine di fusione GST. Le proteine sono purificate mediante cromatografia di affinità utilizzando sfere di glutatione-sefarosio. L'inibizione dell'attività della tirosina chinasi ERBB è valutata utilizzando un test del recettore tirosina chinasi basato su ELISA. Le reazioni chinasiche (50 mM HEPES, pH 7,4, 125 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 100 μM di ortovanadato di sodio, 2 mM di ditiotreitolo, 20 μM di ATP, questo composto o veicolo di controllo, e 1-5 nM di GST-erbB per 50 μL di miscela di reazione) sono eseguite in piastre da 96 pozzetti rivestite con 0,25 mg/mL di poli-Glu-Tyr. Le reazioni vengono incubate per 6 minuti a temperatura ambiente sotto agitazione. Le reazioni chinasiche vengono interrotte rimuovendo la miscela di reazione e i pozzetti vengono quindi lavati con tampone di lavaggio (0,1% Tween 20 in PBS). I residui di tirosina fosforilati vengono rilevati aggiungendo 0,2 μg/mL di anticorpo antifosfotirosina (Oncogene Ab-4; 50 μL/pozzetto) accoppiato alla perossidasi di rafano (HRP) diluito in PBS contenente 3% di BSA e 0,05% di Tween 20 per 25 minuti sotto agitazione a temperatura ambiente. L'anticorpo viene rimosso e le piastre vengono lavate nel tampone di lavaggio. Il substrato HRP (SureBlue3,3,5,5-tetrametilbenzidina o TMB) viene aggiunto (50 μL per pozzetto) e incubato per 10-20 minuti sotto agitazione a temperatura ambiente. La reazione TMB viene interrotta con l'aggiunta di 50 μL di soluzione di arresto (0,09 N H2SO4). Il segnale viene quantificato misurando l'assorbanza a 450 nm. I valori di IC50 per questo composto sono determinati utilizzando il metodo dell'effetto mediano.
In vivo

Il PF299804 somministrato per via orale inibisce efficacemente la crescita di xenotrapianti HCC827 Del/T790M. Una bassa somministrazione orale di questo composto (15mg/kg) causa una significativa attività antitumorale, incluse marcate regressioni tumorali in una varietà di modelli di xenotrapianto di tumore umano che esprimono e/o sovraesprimono membri della famiglia ERBB o contengono la doppia mutazione (L858R/T790M) in ERBB1 (EGFR).

Riferimenti
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22761403/

Applicazioni (Applications)

Metodi Biomarcatori Immagini PMID
Western blot pEGFR / EGFR / pERK / ERK / pAKT / AKT / p-mTOR / mTOR / pSTAT3 / STAT3
S2727-WB1
24853121
Immunofluorescence LC3
S2727-IF1
28366635
Growth inhibition assay Cell viability
S2727-viability1
28363995

Informazioni sullo studio clinico (Clinical Trial Information)

(dati da https://clinicaltrials.gov, aggiornato il 2024-05-22)

Numero NCT Reclutamento Condizioni Sponsor/Collaboratori Data di inizio Fasi
NCT06075615 Not yet recruiting
Carcinoma Non-Small-Cell Lung
Pfizer
 September 1 2024 --
NCT06321510 Not yet recruiting
Lung Cancer
Pfizer
 April 1 2024 --
NCT04609319 Active not recruiting
Lung Cancer
Pfizer
 January 23 2021 --
NCT03865446 Completed
Severe Hepatic Impairment
Pfizer
 April 5 2019 Phase 1
NCT02382796 Completed
NSCLC
Pfizer
 July 10 2015 Phase 2
NCT02268747 Unknown status
Skin Squamous Cell Cancer
Fondazione IRCCS Istituto Nazionale dei Tumori Milano
 November 2014 Phase 2

Domande Frequenti (Frequently Asked Questions)

Domanda 1:
I would like to know whether the in vivo formulation you recommend for it is suitable for oral administration?

Risposta:
S2727 in 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80 at 10mg/ml is a homogeneous suspension, and it was fine for oral gavage. When preparing the solution, please dissolve it in DMSO clearly first. If it dissolves not readily, please sonicate and warm it at about 45-50℃ for a while to help dissolving. Then add PEG 300 and Tween 80. After they mixed well, dilute with water. Then it will become a homogeneous suspension.