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GSK1070916 Aurora Kinase Inibitore

N. Cat.: S2740

GSK1070916 è un inibitore reversibile e ATP-competitivo di Aurora B/C con IC50 di 3,5 nM/6,5 nM. Mostra una selettività >100 volte superiore rispetto al complesso Aurora A-TPX2 strettamente correlato. Fase 1.
GSK1070916 Aurora Kinase Inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 507.63

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.79%
99.79

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
A549 cells Proliferation assay 6-7 d Antiproliferative activity against human A549 cells after 6 to 7 days by celltiter-glo luminescence assay in absence of 70% human serum albumin, EC50=0.007 μM
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 507.63 Formula

C30H33N7O

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 942918-07-2 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi N/A Smiles CCN1C=C(C(=N1)C2=CC=C(C=C2)NC(=O)N(C)C)C3=C4C=C(NC4=NC=C3)C5=CC=CC(=C5)CN(C)C

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 102 mg/mL (200.93 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Ethanol : 102 mg/mL

Water : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
Aurora B-INCENP
(Cell-free assay)
3.5 nM
Aurora C-INCENP
(Cell-free assay)
6.5 nM
FLT1
(Cell-free assay)
42 nM
Tie-2
(Cell-free assay)
59 nM
SIK
(Cell-free assay)
70 nM
FLT4
(Cell-free assay)
74 nM
FGFR1
(Cell-free assay)
76 nM
In vitro
GSK1070916 selectively inhibits Aurora B and Aurora C with Ki of 0.38 nM and 1.5 nM over Aurora A with Ki of 490 nM. Inhibition of Aurora B and Aurora C by this compound is time-dependent, with an enzyme-inhibitor dissociation half-life of >480 min and 270 min respectively. In addition, it is also a competitive inhibitor with respect to ATP. Human tumor cells treated with this inhibitor shows dose-dependent inhibition of phosphorylation on serine 10 of Histone H3, a substrate specific for Aurora B. Moreover, it inhibits the proliferation of tumor cells with EC50 values of <10 nM in over 100 cell lines spanning a broad range of tumor types, with a median EC50 of 8 nM. Although this compound has potent activity against proliferating cells, a dramatic shift in potency is observed in primary, nondividing, normal human vein endothelial cells. Furthermore, cells treated with this agent do not arrest in mitosis but instead fails to divide and become polyploid, ultimately leading to apoptosis. In another study, it is also reported high chromosome number associated with resistance to the inhibition of Aurora B and C suggests cells with a mechanism to bypass the high ploidy checkpoint are resistant to this chemical.
Saggio chinasico
Saggio di Kinasi
La capacità di GSK1070916 di inibire gli enzimi Aurora viene misurata utilizzando saggi di chinasi in vivo. I saggi misurano la capacità di Aurora A, Aurora B e Aurora C di fosforilare un substrato peptidico sintetico. Biotin-Ahx-RARRRLSFFFFAKKK-NH2 viene utilizzato per il saggio Aurora A–TPX2 LEADseekerTM e 5FAM-PKAtide viene utilizzato per il saggio IMAPTM per tutte e tre le chinasi Aurora. Per tenere conto dell'inibizione tempo-dipendente degli enzimi Aurora, Aurora A–TPX2, Aurora B–INCENP e Aurora C–INCENP vengono incubati con questo composto a varie concentrazioni per 30 min prima che le reazioni vengano avviate con l'aggiunta di substrati. Per il saggio Aurora A LEADseekerTM, le condizioni finali del saggio sono 0,5 nM Aurora A–TPX2, 1 μM di substrato peptidico, 6 mM di MgCl2, 1,5 μM di ATP, 0,003 μCi/μL di [γ-33P] ATP in 50 mM di Hepes, pH 7,2, 0,15 mg/mL di BSA, 0,01% di Tween-20, 5 mM di DTT e 25 mM di KCl. Le reazioni vengono incubate a temperatura ambiente (25 °C) per 120 min e terminate con l'aggiunta di microsfere LEADseekerTM in PBS contenente EDTA (concentrazione finale 2 mg/mL di microsfere e 25 mM di EDTA). Le piastre vengono quindi sigillate e le microsfere vengono lasciate decantare durante la notte. La formazione del prodotto viene quantificata utilizzando un Viewlux Imager. Per i saggi IMAPTM, Aurora A–TPX2 (concentrazione finale 1 nM), Aurora B–INCENP (concentrazione finale 2 nM) o Aurora C–INCENP (concentrazione finale 2,5 nM) viene aggiunto alle piastre contenenti il composto in 5 μL di tampone (25 mM Hepes, pH 7,2, per Aurora A, 25 mM Hepes, pH 7,5, per Aurora B e 20 mM Hepes, pH 7,2, per Aurora C) contenente 0,15 mg/mL di BSA, 0,01% di Tween 20 e 25 mM di NaCl. Questa miscela viene incubata a temperatura ambiente per 30 min. Per avviare la reazione, vengono aggiunti 5 μL di una soluzione di substrato contenente lo stesso tampone Hepes utilizzato per la pre-incubazione, 25 mM di NaCl, MgCl2 (2, 4 e 4 mM per Aurora A, B e C rispettivamente), DTT (4, 4 e 2 mM per Aurora A, B e C rispettivamente), ATP (4, 4 e 10 μM per Aurora A, B e C rispettivamente), 200 nM di 5FAM-PKAtide, 0,01% di Tween 20 e 0,15 mg/mL di BSA. Le reazioni vengono incubate a temperatura ambiente per 120 min per Aurora A e B e 60 min per Aurora C. Queste reazioni vengono quindi terminate con l'aggiunta di 10 μL di 1:500 (1:600 per Aurora C) di Progressive Binding Reagent in 95% Progressive Binding Buffer A e 5% Progressive Binding Buffer B. Le piastre vengono incubate a temperatura ambiente per circa 90–120 min (tempo consentito per il raggiungimento dell'equilibrio). Le piastre vengono lette in un lettore di piastre Molecular Devices Analyst in modalità di polarizzazione della fluorescenza.
In vivo
GSK1070916 (25, 50, or 100 mg/kg) shows dose-dependent inhibition of phosphorylation of an Aurora B–specific substrate in mice and consistent with its broad cellular activity, this compound has antitumor effects in 10 human tumor xenograft models including breast, colon, lung, and two leukemia models.
Riferimenti