TAK-285 EGFR inibitore

Tra le 34 chinasi testate, TAK-285 inibisce significativamente solo HER4 con IC50 di 260 nM, inibisce leggermente MEK1, MEK5, c-Met, Aurora B, Lck, CSK e Lyn B con IC50 rispettivamente di 1,1 μM, 5,7 μM, 4,2 μM, 1,7 μM, 2,4 μM, 4,7 μM e 5,2 μM, e non mostra attività contro altre chinasi con IC50 >10 μM. Questo composto mostra una significativa attività inibitoria della crescita contro le cellule BT-474 (linea cellulare di cancro al seno umano con sovraespressione di HER2) con GI50 di 17 nM. [1] Rispetto a SYR127063, un potente inibitore di HER2, mostra una potenza in vitro simile contro HER2 ed EGFR. Rispetto ai domini citoplasmatici completi delle proteine wild-type, le mutazioni e i confini accorciati utilizzati per la determinazione della struttura di HER2-KD ed EGFR-KD non modificano significativamente l'attività inibitoria (IC50) di questa sostanza chimica. Si lega alla conformazione inattiva di EGFR e mostra una modalità di legame simile a lapatinib nel sito attivo. [2]

Saggio delle chinasi HER2 ed EGFR

Il dominio citoplasmatico (aminoacidi 676-1255) di HER2 umano e il dominio citoplasmatico (aminoacidi 669-1210) di EGFR umano sono espressi come proteina marcata con peptide N-terminale (DYKDDDD) utilizzando un sistema di espressione baculovirale. Le chinasi HER2 ed EGFR espresse sono purificate mediante gel di affinità anti-FLAG M2. I saggi delle chinasi EGFR e HER2 sono eseguiti utilizzando [γ-³²P]ATP radiomarcato in piastre a 96 pozzetti. Le reazioni chinasiche sono eseguite in 50 mM Tris-HCl (pH 7,5), 5 mM MnCl₂, 0,01% Tween 20 e 2 mM DTT contenenti 0,9 μCi di [γ-³²P]ATP per reazione, 50 μM ATP, 5 μg/mL di poli(Glu)-Tyr (4:1) e ogni dominio citoplasmatico purificato (0,25 μg/mL di EGFR o HER2) in un volume totale di 50 μL. Per misurare il valore di IC50 per l'inibizione enzimatica, concentrazioni crescenti di questo composto vengono incubate con l'enzima per 5 minuti prima della reazione a temperatura ambiente. Le reazioni chinasiche sono avviate aggiungendo ATP. Dopo 10 minuti a temperatura ambiente, le reazioni vengono interrotte aggiungendo il 10% (concentrazione finale) di acido tricloroacetico. Le proteine fosforilate con γ-³²P vengono filtrate in una piastra di raccolta con un raccoglitore di cellule e lavate per eliminare il [γ-³²P]ATP con acido fosforico al 3%. Le piastre vengono asciugate seguite dall'aggiunta di 25 μL di MicroScint0. La radioattività viene contata da un contatore a scintillazione TopCount. I valori di IC50 sono calcolati mediante analisi di regressione non lineare delle percentuali di inibizione.

La biodisponibilità orale di TAK-285 è del 97,7% nei ratti e del 72,2% nei topi a una dose di 50 mg/kg. La somministrazione orale di questo composto a 100 mg/kg due volte al giorno per 14 giorni mostra una significativa efficacia antitumorale nel modello murino di xenotrapianto tumorale BT-474 (con sovraespressione di HER2) con un rapporto tumore/controllo (T/C) del 29%, senza influenzare il peso corporeo. Similmente al modello BT-474, questo composto mostra un'inibizione della crescita tumorale dose-dipendente di xenotrapianti 4-1ST (tumore gastrico umano con sovraespressione di HER2) nei topi, con T/C del 44% e 11% a dosi di 50 mg/kg e 100 mg/kg, due volte al giorno, rispettivamente, senza una significativa perdita di peso corporeo nei topi. Inoltre, questo trattamento chimico induce un'inibizione della crescita dose-dipendente dei tumori 4-1ST nei ratti con T/C del 38% e 14% a dosi di 6,25 mg/kg e 12,5 mg/kg, e, particolarmente degno di nota, una regressione tumorale con T/C del -12% e -16% a dosi di 25 mg/kg e 50 mg/kg, rispettivamente. [1] Dopo la somministrazione orale di questo composto, una quantità significativa di questo composto è presente nel cervello dei ratti in forma non legata farmacologicamente attiva (circa il 20% del suo livello plasmatico libero), indicando che questo composto ha un potenziale nella terapia delle malignità/metastasi del SNC. [3]