AG-18 EGFR Inibitore

AG 18 inibisce EGFR e IR con K_i di 11 μM e 12 mM. AG 18 inibisce l'autofosforilazione di EGFR indotta da EGF con IC50 di 15 μM nelle cellule A431. [1] AG 18 (10 μM) inibisce la proliferazione delle cellule GH3 indotta da EGF. AG 18 (10 μM) provoca una significativa inibizione della proliferazione cellulare indotta da 10 nM e 1 μM di grelina. AG 18 (10 μM) blocca l'aumento della fosforilazione di ERK 1/2 stimolato dalla grelina nelle cellule GH3. [2]AG 18 inibisce il rilascio di [3H]taurina sensibile al volume nelle colture primarie di astrociti in modo dose-dipendente. AG 18 attiva il rilascio di D-[3H]aspartato dipendente dal volume indotto dal gonfiore dalle colture astrocitarie primarie. [3] AG 18 (300 μM) inibisce la stimolazione dell'espressione di ICAM-1 indotta da TPA in modo dose-dipendente nelle cellule epiteliali A549. AG 18 (300 μM) inibisce anche il legame DNA-proteina di NF-kappaB stimolato da TPA e l'attività del promotore di ICAM-1 nelle cellule epiteliali A549. AG 18 (300 μM) inibisce il legame DNA-proteina di NF-kappaB indotto da TNF-alfa e l'attività del promotore di ICAM-1 in modo dose-dipendente nelle cellule epiteliali A549. L'attività di IKK è stimolata sia da TNF-alfa che da TPA, e questi effetti sono inibiti da AG 18 (100 μM) nelle cellule epiteliali A549. [4] AG 18 (10 μM) diminuisce la potenza della 5-HT di 4 volte e riduce la contrazione massima alla 5-HT nell'arteria carotide. AG 18 (10 μM) sposta la contrazione indotta da KCl di 2 volte e provoca la massima inibizione significativa. [5]

Autofosforilazione del recettore dell'EGF

Il recettore EGF purificato con WGA da cellule A431 (0,5 μg/saggio) viene attivato con EGF (800 nM) per 20 min a 4 ℃. La reazione viene avviata con l'aggiunta di Mg(Ac)₂ (60 mM), tampone Tris-Mes, pH 7,6 (50 mM) e [³²P]ATP (20 pM, 5 μCi/saggio). La reazione viene condotta a 4 ℃ o 15 ℃ e terminata con l'aggiunta di tampone per campioni di sodio dodecil solfato (SDS) (10% glicerolo, 50 mM Tris, pH 6,8, 5% β-mercaptoetanolo e 3% SDS). I campioni vengono caricati su un gel di poliacrilammide al 8% di SDS (SDS-PAGE) (preparato da 30% acrilammide e 0,8% bis-(acrilammide) e contenente 0,375 M Tris, pH 8,8, 0,1% SDS, 0,05% TEMED e 0,46% persolfato di ammonio). Il gel viene essiccato e l'autoradiografia viene eseguita con film a raggi X Agfa Curix RP2. Le bande radioattive pertinenti vengono tagliate e contate in modalità Cerenkov. La fase rapida di autofosforilazione è continuata per altri 10 minuti. L'estensione della fosforilazione completata nei primi 10 s a 15 ℃ comprende 1/3 del segnale totale di autofosforilazione e probabilmente riflette la fosforilazione del primo sito sul recettore. L'intervallo di 10 s viene quindi scelto per l'uso in esperimenti successivi di autofosforilazione.