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ZSTK474 PI3K inibitore

N. Cat.S1072

ZSTK474 inibisce le isoforme di classe I della PI3K con una IC50 di 37 nM in un saggio senza cellule, principalmente PI3Kδ. Fase 1/2.
ZSTK474 PI3K inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 417.41

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Controllo Qualità

Lotto: Purezza: 99.98%
99.98

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dellattività PMID
Sf21 insect cells Function assay 1 h Inhibition of bovine recombinant PI3K p110delta expressed in Sf21 insect cells using phosphatidylinositol as substrate after 1 hr by phosphoimaging, IC50=0.7 nM
human HCT116 cells Function assay 15 mins Inhibition of PIK3CA H1047R mutant-mediated cell signaling in human HCT116 cells expressing PTEN assessed as inhibition of insulin-induced pAkt/PKB phosphorylation at Thr308 treated for 15 mins before insulin challenge measured after 5 mins by immunoblotting, IC50=78 nM
human LNCAP cells Proliferation assay 3 days Antiproliferative activity against human LNCAP cells after 3 days by MTS assay, IC50=0.21 μM
human NZB5 cells Proliferation assay 5 days Antiproliferative activity against human NZB5 cells expressing wild type p110alpha assessed as incorporation of [3H]thymidine after 5 days, IC50=0.22 μM
human NZOV9 cells Proliferation assay 5 days Antiproliferative activity against human NZOV9 cells expressing p110alpha kinase Y1021C mutant assessed as incorporation of [3H]thymidine after 5 days, IC50=0.29 μM
human MDA-MB-468 cells Cytotoxic assay 48 h Cytotoxicity against PTEN-deficient human MDA-MB-468 cells assessed as inhibition of cell growth after 48 hrs by Cell Titer 96 assay
human A549 cells Function assay 10 μM 1 h Inhibition of PI3K in human A549 cells assessed as reduction in pAkt level at 10 uM after 1 hr by Western blotting analysis
human DMS114 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human DMS114 cells
human MKN74 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human MKN74 cells
human SNB78 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human SNB78 cells
human St-4 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human St-4 cells
human DU145 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human DU145 cells
human LOXIMVI cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human LOXIMVI cells
human PC3 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human PC3 cells
human LOXIMVI cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human LOXIMVI cells
human OVCAR3 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human OVCAR3 cells
human SKOV3 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human SKOV3 cells
human KM12 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human KM12 cells
human HT-29 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human HT-29 cells
human HCT15 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human HCT15 cells
human NCI-H226 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human NCI-H226 cells
human NCI-H522 cells  Growth inhibition assay Growth inhibition of human NCI-H522 cells 
human A549 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human A549 cells
human HCC2998 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human HCC2998 cells
human SNB75 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human SNB75 cells
human OVCAR4 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human OVCAR4 cells
human OVCAR5 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human OVCAR5 cells
human OVCAR8 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human OVCAR8 cells
human SKOV3 cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human SKOV3 cells
human ACHN cells Growth inhibition assay Growth inhibition of human ACHN cells
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità

Peso molecolare 417.41 Formula

C19H21F2N7O2

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 475110-96-4 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi N/A Smiles C1COCCN1C2=NC(=NC(=N2)N3C4=CC=CC=C4N=C3C(F)F)N5CCOCC5

Solubilità

In vitro
Lotto:

DMSO : 15 mg/mL (35.93 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante lesperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non cè una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nellaggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere allaggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno dacqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo dazione

Caratteristiche
First orally administered PI3K inhibitor used in vivo.
Targets/IC50/Ki
PI3Kδ
(Cell-free assay)
4.6 nM
PI3Kα
(Cell-free assay)
16 nM
PI3K
(Cell-free assay)
37 nM
PI3Kβ
(Cell-free assay)
44 nM
PI3Kγ
(Cell-free assay)
49 nM
In vitro

ZSTK474 a 1 μM riduce potentemente l'attività di PI3K al 4,7% del livello di controllo, mentre LY2194002 riduce l'attività solo al 44,6% del controllo. Questo composto inibisce le attività delle p110β, -γ e -δ ricombinanti con IC50 di 17 nM, 53 nM e 6 nM, rispettivamente. Mostra una potente attività antiproliferativa contro un pannello di 39 linee cellulari di cancro umano con una GI50 media di 0,32 μM, più efficacemente rispetto a LY294002 o wortmannin con una GI50 media di 7,4 μM o 10 μM, rispettivamente. Questo trattamento chimico a 1 μM blocca il ruffling della membrana e la generazione di PIP3 indotta dal fattore di crescita derivato dalle piastrine in fibroblasti embrionali murini (MEF). A 10 μM induce l'apoptosi nelle cellule OVCAR3 e induce un arresto completo della fase G1 ma non l'apoptosi nelle cellule A549. Questo trattamento con il composto a 0,5 μM diminuisce significativamente il livello di Akt e GSK-3β fosforilati, così come l'espressione della proteina ciclina D1. Inibisce anche la fosforilazione di altri componenti di segnalazione a valle coinvolti nella regolazione della proliferazione cellulare, inclusi FKHRL1, FKHR, TSC-2, mTOR e p70S6K in modo dose-dipendente. Questa sostanza chimica non inibisce mTOR a 0,1 μM, e anche a una concentrazione di 100 μM, inibisce l'attività di mTOR meno del 40%. Blocca la migrazione cellulare indotta da VEGF e la formazione di tubi nelle cellule endoteliali della vena ombelicale umana (HUVEC), e inibisce l'espressione di HIF-1α e la secrezione di VEGF nelle cellule RXF-631L, esibendo una potente attività antiangiogenica in vitro. Questo trattamento con il composto inibisce la produzione di IFNγ e IL-17 nelle cellule T attivate dalla concanavalina A e inibisce la proliferazione e la produzione di PGE(2) da parte delle cellule sinoviali simili a fibroblasti (FLS).

Saggio chinasico
Inibizione dell'attività di PI3K
Le cellule A549 vengono lisate in un tampone contenente 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 5 mM EDTA e 1% Igepal CA-630, i lisati vengono centrifugati a 20.000 g e 4 °C per 10 minuti e i surnatanti vengono utilizzati come lisato cellulare (proteina = 2-4 mg/mL). Per immunoprecipitare la PI3K, 200 μL di lisato cellulare vengono incubati con anticorpo policlonale anti-p85 e proteina G-agarosio (5 μL). Le PI3Kα, PI3Kβ e PI3Kδ possono essere immunoprecipitate dall'anticorpo policlonale anti-p85. Le sfere di agarosio contenenti gli immunoprecipitati vengono lavate due volte con il tampone A (20 mM Tris-HCl a pH 7,5, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA e 1% Igepal CA-630), una volta con il tampone B (500 mM LiCl e 100 mM Tris-HCl a pH 7,5), una volta con acqua distillata e una volta con il tampone C (100 mM NaCl e 20 mM Tris-HCl a pH 7,5). Gli immunoprecipitati vengono sospesi in 20 μL di tampone C contenente fosfatidilinositolo a 200 μg/mL. La miscela viene preincubata con concentrazioni crescenti di questo composto a 25 °C per 5 minuti. Vengono aggiunti [γ-32P]ATP (2 μCi per miscela di saggio; concentrazione finale, 20 μM) e MgCl2 (concentrazione finale, 20 mM) per avviare la reazione. La miscela di reazione viene incubata a 25 °C per 20 minuti. I prodotti fosforilati del fosfatidilinositolo vengono separati mediante cromatografia su strato sottile e visualizzati mediante autoradiografia. La regione del fosfatidilinositolo-3-fosfato viene raschiata dalla piastra e la radioattività viene misurata anche con spettroscopia a scintillazione liquida. Il livello di inibizione di questa sostanza chimica viene determinato come la percentuale di conteggi di 32P per minuto ottenuti senza questo composto.
In vivo
La somministrazione orale di ZSTK474 inibisce la crescita dei tumori di melanoma B16F10 di topo impiantati sottocute in modo dose-dipendente, producendo una regressione tumorale del 28,5%, 7,1% o 4,9% al giorno 14 a 100, 200 o 400 mg/kg, rispettivamente, il che è superiore a quello dei quattro principali farmaci antitumorali alle loro rispettive dosi massime tollerabili con una regressione tumorale del 96%, 35,7%, 24% o 68,3%, rispettivamente. Questo trattamento con il composto a 400 mg/kg inibisce completamente la crescita di xenotrapianti A549, PC-3 e WiDr nei topi e induce la regressione dei tumori xenotrapiantati A549. Inibisce significativamente la crescita tumorale nel modello di xenotrapianto RXF-631L, correlato a un numero significativamente ridotto di microvasi nei topi trattati. La somministrazione orale di questa sostanza chimica migliora la progressione dell'artrite indotta da adiuvante (AIA) nei ratti.
Riferimenti
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19372588/
  • [5] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22039466/
  • [6] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22349137/

Applicazioni

Metodi Biomarcatori Immagini PMID
Western blot p-PDK1 / p-GSK3β / p-AKT / AKT P-gp / MRP1 p-Rb / p27 / Cyclin D1 HIF-1α / HIF-1β
S1072-WB1
28388564
Growth inhibition assay Cell viability
S1072-viability1
28388564

Supporto tecnico

Istruzioni per la manipolazione

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

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