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Gedatolisib (PKI-587) PI3K Inibitore

N. Cat.: S2628

Gedatolisib (PKI-587) è un inibitore duale altamente potente di PI3Kα, PI3Kγ e mTOR con IC50 di 0,4 nM, 5,4 nM e 1,6 nM in saggi acellulari, rispettivamente. Questo composto è attualmente in Fase 2.
Gedatolisib (PKI-587) PI3K Inibitore Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 615.73

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: Purezza: 99.09%
99.09

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
MDA-MB-361 cells Cytotoxicity assay Cytotoxicity against human MDA-MB-361 cells, IC50=0.004 μM
PC3MM2 cells Cytotoxicity assay Cytotoxicity against human PC3MM2 cells, IC50=0.0131 μM
MDA-MB-361 cells Function assay Inhibition of Akt T308 phosphorylation in human MDA-MB-361 cells by Western blotting, IC50=0.008 μM
MDA-MB-361 cells Function assay Inhibition of Akt S473 phosphorylation in human MDA-MB-361 cells by Western blotting, IC50=0.01 μM
MDA-MB-361 cells Function assay Inhibition of eNOS phosphorylation in human MDA-MB-361 cells by Western blotting
MDA-MB-361 cells Function assay Inhibition of PARS40 phosphorylation in human MDA-MB-361 cells by Western blotting
MDA-MB-361 cells Function assay Inhibition of GSK3 kinase phosphorylation in human MDA-MB-361 cells by Western blotting
MDA-MB-361 cells Function assay Inhibition of mTOR TORC1 kinase activity in human MDA-MB-361 cells assessed as suppression of p70S6K phosphorylation at < 30 nM
MDA-MB-361 cells Function assay Inhibition of mTOR TORC1 kinase activity in human MDA-MB-361 cells assessed as suppression of 4EBP1 phosphorylation at < 30 nM
MDA-MB-361 cells Function assay Inhibition of Akt T308 phosphorylation in human MDA-MB-361 cells xenografted mouse model upto 36 hrs
MDA-MB-361 cells Function assay Inhibition of Akt S473 phosphorylation in human MDA-MB-361 cells xenografted mouse model upto 36 hrs
MDA-MB-361 cells Function assay Induction of PARP cleavage in human MDA-MB-361 cells xenografted mouse model upto 18 hrs
MDA-MB-361 cells Function assay Antitumor activity against human MDA-MB-361 cells xenografted mouse model assessed as reduction in tumor volume at 20 mg/kg, iv on day 1, 5, 9
SF9 insect cells Function assay 2 h Inhibition of human PI3Kalpha expressed in SF9 insect cells after 2 hrs by fluorescence polarization assay, IC50=0.0004 μM
SF9 insect cells Function assay 2 h Inhibition of human PI3Kgamma expressed in SF9 insect cells after 2 hrs by fluorescence polarization assay, IC50=0.011μM
MDA-MB-361 cells Growth inhibition assay 72 h Growth inhibition of human MDA-MB-361 cells after 72 hrs, IC50=0.003 μM
human PC3 cells Growth inhibition assay 72 h Growth inhibition of human PC3 cells after 72 hrs, IC50=0.011 μM
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 615.73 Formula

C32H41N9O4

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 1197160-78-3 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi PF-05212384 Smiles CN(C)C1CCN(CC1)C(=O)C2=CC=C(C=C2)NC(=O)NC3=CC=C(C=C3)C4=NC(=NC(=N4)N5CCOCC5)N6CCOCC6

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 3 mg/mL (4.87 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Ethanol : 1 mg/mL

Water : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
PI3Kα
(Cell-free assay)
0.4 nM
mTOR
(Cell-free assay)
1.6 nM
PI3Kγ
(Cell-free assay)
5.4 nM
In vitro
Gedatolisib (PKI-587) shows potent inhibitory activity against PI3K-α, PI3K-γ and mTOR with IC50 of 0.4 nM, 5.4 nM and 1.6 nM, respectively. Furthermore, it also exhibits its potency against the most frequently occurring mutant forms of PI3Kα, notably the H1047R and E545K with IC50 of 0.6 nM and 0.6 nM, respectively. Correlated with suppression of phosphorylation of PI3K/mTOR signaling pathway proteins, this compound causes tumor cell growth inhibition in MDA-361 and PC3-MM2 cell lines with IC50 of 4 nM and 13.1 nM, respectively.
Saggio chinasico
Saggio della chinasi PI3K e mTOR
I saggi enzimatici vengono eseguiti in formato a polarizzazione di fluorescenza (FP), adattato dal protocollo del kit di saggio PI3K FP Echelon K-1100. Le PI3K di classe I umane e i mutanti PI3K-α (E545K e H1047R) vengono prodotti in Sf9 o acquistati da Upstate Biotech. GST-GRP1 (murina) viene prodotto in Escherichia coli e isolato mediante GST-Sepharose. I tamponi di saggio sono il tampone di reazione [20 mM HEPES (pH 7,1), 2 mM MgCl2, 0,05% CHAPS e 0,01% β-mercaptoetanolo] e il tampone di arresto/rilevamento [100 mM HEPES (pH 7,5), 4 mM EDTA, 0,05% CHAPS]. La reazione FP viene eseguita per 30 minuti a temperatura ambiente in 20 μL di tampone di reazione contenente 20 μM di fosfatidilinositolo 4,5-bisfosfato (PIP2), 25 μM di ATP e <4% di DMSO. La reazione FP viene interrotta con 20 μL di tampone di arresto/rilevamento (10 nM di sonda e 40 nM di GST-GRP) e, dopo 2 ore, i dati vengono raccolti utilizzando un lettore di piastre Envision. I saggi di routine con FLAG-TOR purificato (FL e 3.5) vengono eseguiti in piastre a 96 pozzetti come segue: gli enzimi vengono prima diluiti in tampone di saggio della chinasi (10 mM Hepes (pH 7,4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glicerofosfato, 10 mM MnCl2, 0,5 mM DTT, 0,25 μM microcistina LR e 100 μg/mL BSA). A ciascun pozzetto, 12 μL dell'enzima diluito vengono miscelati brevemente con 0,5 μL di inibitore di prova o veicolo di controllo dimetilsolfossido (DMSO), dove l'inibitore di prova è Gedatolisib (PKI-587). La reazione della chinasi viene avviata aggiungendo 12,5 μL di tampone di saggio della chinasi contenente ATP e His6-S6K per ottenere un volume di reazione finale di 25 μL contenente 800 ng/mL di FLAG-TOR, 100 μM di ATP e 1,25 μM di His6-S6K. La piastra di reazione viene incubata per 2 ore (lineare a 1–6 ore) a temperatura ambiente con delicata agitazione e quindi terminata aggiungendo 25 μL di tampone di arresto (20 mM Hepes (pH 7,4), 20 mM EDTA e 20 mM EGTA).
In vivo
Gedatolisib (PKI-587) treatment at 25 mg/kg iv in nude mice leads to low plasma clearance (7 (mL/min)/kg), high volume of distribution (7.2 L/kg), and long half-life (14.4 hours). In the MDA-361 xenograft model, it produces potent antitumor efficacy with the minimum efficacious dose (MED) of 3 mg/kg against MDA-361 tumors and maximum tolerated single dose (MTD) of 30 mg/kg. While in the H1975 (non-small-cell lung carcinoma, mutant EGFR [L858R, T790M]) xenograft model, this compound at 25 mg/kg for 7 weeks results in 90% survival of the group treated.
Riferimenti

Applicazioni (Applications)

Metodi Biomarcatori Immagini PMID
Growth inhibition assay Cell viability
S2628-viability1
29978469
Western blot p-AKT / p-mTOR / p-p70S6K / p-S6K / p-4E-BP1 / AKT / mTOR / p70S6K / S6K / 4EBP1 TSC1 / TSC2 / Raptor
S2628-WB1
29978469

Informazioni sullo studio clinico (Clinical Trial Information)

(dati da https://clinicaltrials.gov, aggiornato il 2024-05-22)

Numero NCT Reclutamento Condizioni Sponsor/Collaboratori Data di inizio Fasi
NCT02438761 Terminated
Therapy-related Acute Myeloid Leukemia and Myelodysplastic Syndrome|Acute Myeloid Leukemia in Relapse|de Novo Acute Myeloid Leukemia at Diagnostic
Institut Curie|Fondation ARC|National Cancer Institute France
 August 31 2015 Phase 2
NCT02069158 Completed
Breast Cancer|NSCLC|Ovary Cancer|Endometrial Cancer|Small Cell Lung Cancer (SCLC)|Head and Neck (HNSCC)
Cristiana Sessa|Oncology Institute of Southern Switzerland
 April 2014 Phase 1
NCT01420081 Terminated
Endometrial Neoplasms
Pfizer
 January 19 2012 Phase 2