Apoptosis Activator 2 Caspase attivatore

Apoptosis Activator 2 (20 μM) a concentrazione ridotta di citocromo c aumenta la frazione di Apaf-1 nell'apoptosoma di 1,5 volte, raggiungendo il 33%. Questo composto aumenta l'entità dell'attivazione della caspase-3 a un livello ridotto di citocromo c e l'attivazione della caspase-3 di 4 volte. Induce fortemente l'attivazione della caspase-3, la scissione di PARP e la frammentazione del DNA, uccidendo infine le cellule con un IC50 di 4 μM. Questo attivatore induce Apoptosis di PBL, HUVEC, Jurkat, Molt-4, CCRF-CEM, BT-549, MDA-MB-468 e NCI-H23 con un IC50 di 50 μM, 43 μM, 4 μM, 6 μM, 9 μM, 20 μM, 44 μM e 35 μM. Esercita un effetto citostatico sulla maggior parte delle linee cellulari tumorali testate, inibendo la crescita cellulare del 50-100% a 10 μM in 40 delle 48 linee cellulari testate. [1] Questa sostanza chimica induce la morte cellulare innescando la formazione di apoptosomi. Il livello di espressione di En1 non ha un'influenza significativa sui tassi di sopravvivenza delle colture di mesencefalo ventrale per questo composto (-8,1 ± 6,0%). Il tasso di sopravvivenza non è significativamente alterato se gli altri tre reagenti sono impiegati (-10,7 ± 4,7%) per questo attivatore. [2] Questo composto (10 μM) induce Apoptosis nelle cellule AGS come valutato tramite scala di DNA apoptotico e test di Tunel. Esso (10 μM) aumenta l'induzione di Apoptosis da parte di liposomi coniugati anti-TROP2. [3] Cicloesamide (10 μg/mL) o zVAD (50 μM) protegge significativamente contro la tossicità di questa sostanza chimica nelle colture neuronali. Questo attivatore (3 μM) provoca numerosi neuroni con nuclei picnotici suggestivi di morte cellulare che coinvolge Apoptosis. DHT (10 nM) o E2 (10 nM) protegge significativamente contro la tossicità di questo composto nelle colture neuronali. [4]

Saggio di Apoptosis senza cellule

Gli estratti citoplasmatici di cellule HeLa vengono preparati secondo report precedentemente pubblicati. Apoptosis Activator 2 in DMSO viene distribuito in piastre per microtitolazione a 96 pozzetti a una concentrazione finale di 1 mM (la concentrazione finale di DMSO è dell'1% v/v). A ciascun pozzetto vengono aggiunti 250 μg di proteine totali da estratti citoplasmatici in tampone HEB (50 mM Hepes, pH 7,4/50 mM KCl/5 mM EGTA/2 mM MgCl), con 2 mM DTT, 2 μM citocromo c e 0,5 μM di substrato DEVD-AFC (Asp-Glu-Val-Asp-7-amino-4-trifluorometilcumarina) per un totale di 150 μL. Le piastre vengono incubate a 37 ℃ e la fluorescenza viene letta con un lettore di piastre LJL Biosystems a intervalli di 10 minuti.