IC-87114 PI3K inibitore

IC-87114 inibisce selettivamente PI3Kδ e non è sensibile a PI3Kα, β e γ. Nei neutrofili umani, IC87114 (5 µM) inibisce potentemente la biosintesi di fosfatidilinositolo trifosfato (PIP3) e la chemiotassi stimolate da N-formil-metionil-leucil-fenilalanina (fMLP). IC87114 (5 µM) inibisce anche la morfologia polarizzata e lo spreading dei neutrofili. [1] Nelle cellule blastiche di leucemia mieloide acuta (LMA) umana, come le cellule mononucleate del midollo osseo (BMMC), IC87114 (10 µM) inibisce sia la fosforilazione costitutiva che quella stimolata da Flt-3 di Akt e la proliferazione cellulare. [2] È stato anche riscontrato che IC87114 (5 µM–30 µM) inibisce le risposte delle BMMC stimolate da SCF o IL-3, che non sono osservate nelle cellule mutanti PI3Kδ (p110δ^D910A). [3] Nelle cellule T CD4⁺ CD62L⁺ (naive) e CD62L⁻ (effettore/memoria) di topo stimolate da anti-CD3, IC87114 inibisce la proliferazione e la produzione di interferone-gamma (IFN-γ). I valori di IC50 di IC87114 sono: (1) 1,2 µM e 40 nM, rispettivamente per la proliferazione delle cellule CD62L⁺ e CD62L⁻; (2) 120 nM e 1 nM, rispettivamente per la produzione di IFN-γ delle cellule CD62L⁺ e CD62L⁻. Effetti simili di IC87114 sono osservati anche nelle cellule T umane. [4] Uno studio recente rivela che nelle cellule cromaffini, IC87114 aumenta l'aumento transitorio di PtdIns(4,5)P2, il che si traduce in una potenziamento dell'esocitosi. [5]

Saggio chinasico PI3K

Vengono preparati liposomi fosfolipidici contenenti fosfatidilinositolo-(4,5)-bisfosfato (PIP2). Brevemente, PIP2 bovino e fosfatidilserina (rapporto molare 1:2) vengono essiccati sotto vuoto e risospesi a 1 mM di PIP2 in 20 mM HEPES-KOH, pH 7,4, 50 mM NaCl e 5 mM EDTA. La sospensione lipidica viene sottoposta a una breve sonicazione, seguita da 5 cicli di congelamento-scongelamento e quindi 20 cicli di estrusione per produrre i liposomi. Il saggio è condotto in volumi di reazione di 60 µL in tampone 20 mM HEPES, pH 7,4, contenente 1 nM PI3K, 1 µM PIP2, 200 µM ATP, 1 µCi [γ-³²P]ATP, 5 mM MgCl₂, più 50 µg/mL di IgG di cavallo come proteina carrier. La reazione viene incubata per 10 min a temperatura ambiente, bloccata in 140 di 1 M K₂PO₄, 30 mM EDTA, pH 8,0, catturata su una piastra filtrante in difluoruro di polivinilidene a 96 pozzetti e lavata cinque volte con 1 M K₂PO₄. Il filtro viene lasciato asciugare completamente e la radioattività legata viene quantificata. Le diluizioni di IC-87114 vengono saggiate a una concentrazione finale dell'1% (p/p) di DMSO.

Nei topi, IC-87114 (15 mg/kg–60 mg/kg) inibisce la risposta allergica nella pelle della schiena e nell'orecchio. [3]Nei topi indotti con anti-CD3 o ConA, IC-87114 (30 mg/kg) riduce le risposte di ipersensibilità e diminuisce i livelli plasmatici di citochine, come IL-2, IL-4, IL-17, IFN-γ e fattore di necrosi tumorale-α (TNF-α). [4]