Home PI3K/Akt/mTOR mTOR inhibitor WYE-125132 (WYE-132)

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WYE-125132 (WYE-132) mTOR inhibitor

N. Cat.: S2661

WYE-125132 (WYE-132) is a highly potent, ATP-competitive mTOR inhibitor with IC50 of 0.19 nM; it is highly selective for mTOR versus PI3Ks or PI3K-related kinases hSMG1 and ATR.
WYE-125132 (WYE-132) mTOR inhibitor Chemical Structure

Struttura chimica

Peso molecolare: 519.6

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Controllo Qualità (Quality Control)

Lotto: S266101 DMSO]104 mg/mL]false]Water]Insoluble]false]Ethanol]Insoluble]false Purezza: 100.00%
100.00

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Linee cellulari Tipo di saggio Concentrazione Tempo di incubazione Formulazione Descrizione dell'attività PMID
LNCAP cells Cytotoxicity assay Cytotoxicity against human LNCAP cells, IC50=0.002 μM
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità (Chemical Information, Storage & Stability)

Peso molecolare 519.6 Formula

C27H33N7O4

 Conservazione (Dalla data di ricezione)
N. CAS 1144068-46-1 Scarica SDF Conservazione delle soluzioni stock

Sinonimi N/A Smiles CNC(=O)NC1=CC=C(C=C1)C2=NC3=C(C=NN3C4CCC5(CC4)OCCO5)C(=N2)N6CC7CCC(C6)O7

Solubilità (Solubility)

In vitro
Lotto:

DMSO : 104 mg/mL (200.15 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa Concentrazione Volume Peso molecolare
Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo
Lotto:

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante l'esperimento)

mg/kg g μL

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non c'è una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH2O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nell'aggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere all'aggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno d'acqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo d'azione (Mechanism of Action)

Caratteristiche
A highly potent, ATP-competitive, and specific mTOR kinase inhibitor.
Targets/IC50/Ki
mTOR
(Cell-free assay)
0.19 nM
In vitro
WYE-125132 (WYE-132) inibisce potentemente e in modo ATP-competitivo la chinasi mTOR ricombinante con un'IC50 di 0,19 nM e mostra anche un'elevata selettività rispetto a varie PI3K e un pannello di 230 chinasi proteiche. In vitro, mostra una significativa attività antiproliferativa contro un pannello di linee cellulari tumorali con IC50 che vanno da 2 nM (LNCap) a 380 nM (HTC116). Inoltre, questo composto causa anche la progressione del ciclo cellulare, l'induzione dell'apoptosi e l'inibizione della sintesi proteica e delle dimensioni cellulari. Comporta una significativa riduzione della sintesi di pre-tRNALeu del 72%, 80% e 53% in cellule di MG63, MDA361 e HEK293 attivamente proliferanti, rispettivamente, inibendo mTORC1. Inoltre, si è scoperto che WYE-125132 induce anche la defosforilazione di Maf1 (regolatore negativo della trascrizione di Pol III) e il suo accumulo nel nucleo.
Saggio chinasico
Saggi di chinasi
I saggi enzimatici di mTOR tramite immunoassaggio a fluorescenza di lantanidi potenziato dalla dissociazione (DELFIA), saggi su matrice di ATP e saggi di chinasi del complesso immunitario di mTOR sono eseguiti come segue per WYE-125132 (WYE-132). Il TOR endogeno del lisato cellulare LNCap viene immunoprecipitato da anti-FRAP/TOR (N-19). Il lisato cellulare (1,0 mg) viene miscelato con 4 μg di anticorpo accoppiato ad agarosio proteina-G/A in 1 mL di tampone di lisi. I complessi immunitari vengono lavati sequenzialmente con tampone di lisi, tampone di lisi più 500 mM KCl e tampone di lavaggio per chinasi. I complessi immunitari vengono sottoposti a reazione chinasica per 30 minuti a 30 °C in un volume finale di 50 μL contenente 10 mM Hepes (pH 7,4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glicerofosfato e 0,5 μM microcistina LR, 1 mM DTT, 10 mM MnCl2, 100 μM ATP, 1 μg His6-S6K o 1 μg His6-4EBP1. Le reazioni chinasiche (enzimi in complesso immunitario ed enzimi purificati) vengono terminate con tampone campione NuPAGE LDS e risolte in un gel NuPAGE Bis-Tris 4-12% per Western blotting con anti-P(T389)-p70S6K e anti-P(T46)-4EBP1, anti-FRAP/TOR (N-19), anti-FLAG M2 e anti-His6 (Clone His-1). Nel saggio radioattivo, vengono utilizzati 10 μCi [γ-32P]ATP (3000 Ci/mmol) e 100 μM di ATP freddo. I prodotti marcati con 32P vengono risolti mediante SDS-PAGE e sottoposti ad autoradiogramma su pellicole radiografiche Kodak.
In vivo
WYE-125132 (WYE-132) (5 mg/kg p.o.) produce una significativa attività antitumorale e provoca un ritardo della crescita tumorale dose-dipendente nel modello tumorale MDA361 iperattivo per PI3K/mTOR e HER2. Inoltre, mostra anche una potente efficacia antitumorale nei modelli di glioma U87MG PTEN-nullo, e di carcinoma polmonare non a piccole cellule H1975 e A549.
Riferimenti

Domande Frequenti (Frequently Asked Questions)

Domanda 1:
Whether the vehicle “30% PEG400+0.5% Tween80+5% Propylene glycol” you recommended for it is a clear solution or not? What’s the suggested formula for i.p. injection?

Risposta:
The formula on our website “30% PEG400+0.5% Tween80+5% Propylene glycol” is not a clear solution and can be used for p.o. administration. For i.p. solution, there are two methods to prepare it: 1）2% DMSO+30% PEG 300+ddH2O, 2.5mg/ml, stable for 1h at RT; 2）2% DMSO+30% PEG 300+ 2% Tween80 +ddH2O, 2.5mg/ml, stable for 2h at RT.