WYE-125132 (WYE-132)

N. catalogoS2661 Lotto:S266101

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Dati tecnici

Formula

C₂₇H₃₃N₇O₄

Peso molecolare

519.6

Numero CAS

1144068-46-1

Solubilità (25°C)*

In vitro

DMSO

104 mg/mL (200.15 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	30%PEG400 1 0.5%Tween80 2 5%propylene glycol Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	30.000mg/ml (57.74mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 300 μL of 100 mg/ml clarified PEG400 stock solution to 5 μL of Tween80, mix evenly to clarify it; add 50 μL Propylene glycol to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 645 μL ddH2O to adjust the volume. to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

WYE-125132 (WYE-132) è un inibitore di mTOR altamente potente e competitivo dell'ATP con un'IC50 di 0,19 nM; è altamente selettivo per mTOR rispetto a PI3K o chinasi correlate a PI3K hSMG1 e ATR.

Target

mTOR
(Cell-free assay)

0.19 nM

In vitro

WYE-125132 (WYE-132) inibisce potentemente e in modo ATP-competitivo la chinasi mTOR ricombinante con un'IC50 di 0,19 nM e mostra anche un'elevata selettività rispetto a varie PI3K e un pannello di 230 chinasi proteiche. In vitro, mostra una significativa attività antiproliferativa contro un pannello di linee cellulari tumorali con IC50 che vanno da 2 nM (LNCap) a 380 nM (HTC116). Inoltre, questo composto causa anche la progressione del ciclo cellulare, l'induzione dell'apoptosi e l'inibizione della sintesi proteica e delle dimensioni cellulari. Comporta una significativa riduzione della sintesi di pre-tRNA^Leu del 72%, 80% e 53% in cellule di MG63, MDA361 e HEK293 attivamente proliferanti, rispettivamente, inibendo mTORC1. Inoltre, si è scoperto che WYE-125132 induce anche la defosforilazione di Maf1 (regolatore negativo della trascrizione di Pol III) e il suo accumulo nel nucleo.

In vivo

WYE-125132 (WYE-132) (5 mg/kg p.o.) produce una significativa attività antitumorale e provoca un ritardo della crescita tumorale dose-dipendente nel modello tumorale MDA361 iperattivo per PI3K/mTOR e HER2. Inoltre, mostra anche una potente efficacia antitumorale nei modelli di glioma U87MG PTEN-nullo, e di carcinoma polmonare non a piccole cellule H1975 e A549.

Caratteristiche

Un inibitore della chinasi mTOR altamente potente, competitivo dell'ATP e specifico.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[1]}	Saggi di chinasi I saggi enzimatici di mTOR tramite immunoassaggio a fluorescenza di lantanidi potenziato dalla dissociazione (DELFIA), saggi su matrice di ATP e saggi di chinasi del complesso immunitario di mTOR sono eseguiti come segue per WYE-125132 (WYE-132). Il TOR endogeno del lisato cellulare LNCap viene immunoprecipitato da anti-FRAP/TOR (N-19). Il lisato cellulare (1,0 mg) viene miscelato con 4 μg di anticorpo accoppiato ad agarosio proteina-G/A in 1 mL di tampone di lisi. I complessi immunitari vengono lavati sequenzialmente con tampone di lisi, tampone di lisi più 500 mM KCl e tampone di lavaggio per chinasi. I complessi immunitari vengono sottoposti a reazione chinasica per 30 minuti a 30 °C in un volume finale di 50 μL contenente 10 mM Hepes (pH 7,4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glicerofosfato e 0,5 μM microcistina LR, 1 mM DTT, 10 mM MnCl₂, 100 μM ATP, 1 μg His6-S6K o 1 μg His6-4EBP1. Le reazioni chinasiche (enzimi in complesso immunitario ed enzimi purificati) vengono terminate con tampone campione NuPAGE LDS e risolte in un gel NuPAGE Bis-Tris 4-12% per Western blotting con anti-P(T389)-p70S6K e anti-P(T46)-4EBP1, anti-FRAP/TOR (N-19), anti-FLAG M2 e anti-His6 (Clone His-1). Nel saggio radioattivo, vengono utilizzati 10 μCi [γ-³²P]ATP (3000 Ci/mmol) e 100 μM di ATP freddo. I prodotti marcati con ³²P vengono risolti mediante SDS-PAGE e sottoposti ad autoradiogramma su pellicole radiografiche Kodak.
Saggio cellulare:^{^[1]}	Linee cellulari MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-468, BT549, LNCap, A549, H1975, H157, H460, U87MG, A498, 786-O, HCT116, MG63, Rat1, HEK293, and HeLa Concentrazioni 0 to 10 μM Tempo di incubazione 24 hours Metodo Cell lines of MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-468, BT549, LNCap, A549, H1975, H157, H460, U87MG, A498, 786-O, HCT116, MG63, Rat1, HEK293, and HeLa are obtained from the American Type Culture Collection. Cell growth assays and IC50 determination are described as follows. For tumor cell growth assays, cells are plated in 96-well culture plates at 1000 to 3000 cells per well for 24 hours, treated with DMSO or various doses of WYE-125132 (WYE-132). Viable cell densities are determined three days later by MTS assay employing an assay kit following the kit assay protocol. The effect of each treatment is calculated as percent of control growth relative to the DMSO-treated cells grown in the same culture plate. Inhibitor dose response curves are plotted for determination of IC50 values.
Studio sugli animali:^{^[1]}	Modelli animali U87MG, MDA361, H1975, A549, A498, and 786-O cells are injected s.c. into the right flank of CD1 nu/nu mice. Dosaggi ≤50 mg/kg Somministrazione Administered via i.v. or p.o.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20068177/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20233713/

Convalida del prodotto da parte del cliente

: Dati da [ J Cell Sci , 2014 , 127(Pt 4), 788-800 ]

Sellecks WYE-125132 (WYE-132) È stato citato da 9 Pubblicazioni

Suppression of MYC by PI3K/AKT/mTOR pathway inhibition in combination with all-trans retinoic acid treatment for therapeutic gain in acute myeloid leukaemia [ Br J Haematol, 2022, 10.1111/bjh.18187]	PubMed: 35468223
Identification of New Vulnerabilities in Conjunctival Melanoma Using Image-Based High Content Drug Screening [ Cancers (Basel), 2022, 14(6)1575]	PubMed: 35326726
Expression of HYOU1 via Reciprocal Crosstalk between NSCLC Cells and HUVECs Control Cancer Progression and Chemoresistance in Tumor Spheroids [ Mol Cells, 2021, 44(1):50-62]	PubMed: 33455947
An evolutionarily young defense metabolite influences the root growth of plants via the ancient TOR signaling pathway [ Elife, 2017, 6e29353]	PubMed: 29231169
mTOR inhibitors activate PERK signaling and favor viability of gastrointestinal neuroendocrine cell lines [ Oncotarget, 2017, 8(13):20974-20987]	PubMed: 28423496
Rapalogs can promote cancer cell stemness in vitro in a Galectin-1 and H-ras-dependent manner [ Oncotarget, 2017, 8(27):44550-44566]	PubMed: 28562352
Adaptation to mTOR kinase inhibitors by amplification of eIF4E to maintain cap-dependent translation. [Cope CL, et al. J Cell Sci, 2014, 127(Pt 4):788-800]	PubMed: 24363449
Deciphering Combinations of PI3K/AKT/mTOR Pathway Drugs Augmenting Anti-Angiogenic Efficacy In Vivo [Sasore T, et al PLoS One, 2014, 9(8):e105280]	PubMed: 25144531
Murine dendritic cell rapamycin-resistant and rictor-independent mTOR controls IL-10, B7-H1, and regulatory T-cell induction. [ Blood, 2013, 121(18):3619-30]	PubMed: 23444404

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