Name: OSI-027
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S2624
Rating: 5 (40 reviews)

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Controllo Qualità

Lotto: Purezza: 99.19%

99.19

Target correlati	PI3K Akt GSK-3 ATM/ATR DNA-PK AMPK PDPK1 PTEN PP2A PDK
Altro mTOR Inibitori	Torin 1 Torin 2 AZD8055 Ridaforolimus (Deforolimus, MK-8669) Sapanisertib (MLN0128, INK-128) Torkinib (PP242) MHY1485 Vistusertib (AZD2014) KU-0063794 WYE-354

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro

Linee cellulari	Tipo di saggio	Tempo di incubazione	Descrizione dellattività
human SQ20B cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human SQ20B cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=1.3 μM
human Caki1 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human Caki1 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=1.9 μM
human SKHEP1 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human SKHEP1 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=3.2 μM
human DU145 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human DU145 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=4.1 μM
human HCT116 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human HCT116 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=5.6 μM
human ColoR cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human ColoR cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=5.8 μM
human COLO205 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human COLO205 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=5.8 μM
human OVCAR3 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human OVCAR3 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=8.1 μM
human HOP62 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human HOP62 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=41 μM
human COLO205 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human COLO205 cells after 72 hrs by MTT assay
human HOP62 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human HOP62 cells after 72 hrs by MTT assay
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità

Peso molecolare	406.44	Formula	C₂₁H₂₂N₆O₃	Conservazione (Dalla data di ricezione)	3 anni-20°Cpolvere
N. CAS	936890-98-1	Scarica SDF		Conservazione delle soluzioni stock	1 anno-80°Cin solvente 1 mese-20°Cin solvente
Sinonimi	ASP4786, CERC 006, AEVI-006			Smiles	COC1=CC=CC2=C1NC(=C2)C3=C4C(=NC=NN4C(=N3)C5CCC(CC5)C(=O)O)N

Solubilità

In vitro
Lotto:

DMSO : 18 mg/mL (44.28 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa	Concentrazione	Volume	Peso molecolare
=	×	×

Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo Lotto:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante lesperimento)

Dosaggio: mg/kg Peso medio degli animali: g Volume di dosaggio per animale:μL Numero di animali:

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non cè una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH₂O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nellaggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere allaggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno dacqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo dazione

Targets/IC₅₀/Ki	mTOR (Cell-free assay) 4 nM mTORC1 (Cell-free assay) 22 nM mTORC2 (Cell-free assay) 65 nM PI3Kγ (Cell-free assay) 0.42 μM
In vitro	OSI-027 mostra attività di inibizione selettive e competitive dell'ATP contro mTORC1 e mTORC2 con IC50 di 22 nM e 65 nM, rispettivamente. Inoltre, questo composto inibisce la segnalazione di mTOR di fosfo-4E-BP1 con una IC50 di 1 μM in saggi basati su cellule. Esibisce attività antiproliferative contro diverse linee cellulari di leucemia acuta di origine mieloide/megacariocitica in modo dose-dipendente, incluse le cellule U937, KG-1, KBM-3B, ML-1, HL-60 e MEG-01. Uno studio recente mostra che l'inibizione di mTORC1/2 da parte di questa sostanza chimica sopprime efficacemente la fosforilazione di Akt (S473) e la proliferazione cellulare nelle cellule di cancro al seno.
Saggio chinasico	Saggi biochimici
Saggio chinasico	L'inibizione di mTORC1 e mTORC2 viene analizzata utilizzando un complesso enzimatico nativo immunoprecipitato da lisati di HeLa a 1 mM di ATP. Per preparare i lisati cellulari interi dalle cellule HeLa, 25 g di pellet cellulare vengono lisati in 60 mL di tampone A freddo [40 mM HEPES (pH 7,5), 120 mM NaCl, 1 mM EDTA, 10 mM pirofosfato di sodio, 10 mM glicerofosfato, 50 mM NaF, 0,5 mM ortovanadato e inibitori delle proteasi senza EDTA contenenti 0,3% CHAPS] per 30 minuti su un agitatore magnetico in una stanza fredda. Dopo la chiarificazione dei lisati mediante centrifugazione a 13.000 g per 10 minuti, piastre a 384 pozzetti rivestite con Proteina G vengono incubate con 0,25 μg di anticorpo mTOR in 15 μL di tampone A per 1 ora a 4 °C. A ciascun pozzetto vengono aggiunti 40 μg di lisato di cellule HeLa in 15 μL di tampone A e incubati durante la notte a 4 °C per immunoprecipitare i complessi di mTOR. Le piastre vengono lavate 3 volte con tampone A e due volte con tampone di lavaggio per immunoprecipitazione [Tampone B: 50 mM HEPES (pH 7,5) e 150 mM NaCl]. OSI-027 viene aggiunto a una concentrazione di 10 μM a ciascun pozzetto e il DMSO viene aggiunto ai pozzetti di controllo. La reazione viene avviata aggiungendo 150 ng di 4E-BP1 marcato His come substrato in presenza o assenza di 100 μM di ATP a ciascun pozzetto in 25 μL di tampone chinasi appena preparato [Tampone C: 20 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 4 mM MnCl₂, 10 mM β-mercaptoetanolo e 200 μM di vanadato] e incubata a temperatura ambiente (TA) per 30 minuti. La reazione viene interrotta trasferendo 25 μL di miscela di reazione da ciascun pozzetto ai pozzetti corrispondenti di nuove piastre rivestite con Ni-chelato e incubata durante la notte a 4 °C seguita da 2 ore a 37 °C. Per rilevare la fosforilazione di 4E-BP1, le piastre vengono lavate una volta con TBST (soluzione salina tamponata con Tris contenente 0,1% Tween-20) contenente 5% di latte scremato in polvere. A ciascun pozzetto vengono aggiunti 25 μL di anticorpi fosfo-4E-BP1 diluiti 1:1.000 in TBST contenente 5% di latte scremato e incubati per 1 ora a TA. Le piastre vengono lavate una volta con TBST e poi vengono aggiunti 25 μL di HRP anti-coniglio (diluito 1:10.000) in TBST contenente 5% di latte scremato. Le piastre vengono incubate per 1 ora a TA e lavate 5 volte con TBST. Per la rilevazione di fosfo-4E-BP1, vengono aggiunti 25 μL di reagenti chemiluminescenti A+B e la chemiluminescenza viene misurata utilizzando un lettore di piastre Analyst.
In vivo	Nel xenotrapianto colorettale GEO, OSI-027 (65 mg/kg) inibisce entrambi gli effettori di mTORC1 e mTORC2, inclusa la fosforilazione di 4E-BP1, Akt e S6. Inoltre, l'inibizione combinata di mTORC1 e mTORC2 da parte di questo composto inibisce potentemente la crescita tumorale più dell'inibizione di mTORC1 da parte della rapamicina.
Riferimenti	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21363918/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21415215/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22476852/ [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21673091/

Applicazioni

Metodi	Biomarcatori	PMID
Western blot	p-mTOR / mTOR / p-AKT / AKT / p-P70S6K / P70S6K / p-4EBP1 / 4EBP1	26026051
Immunofluorescence	LC3	24610825
Growth inhibition assay	Cell viability	25823922