Opaganib (ABC294640) SPHK inibitore

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Controllo Qualità

Lotto: Purezza: 99.73%

99.73

Target correlati	PD-1/PD-L1 CXCR STING AhR Immunology & Inflammation related CD markers Interleukins Anti-infection Antioxidant COX
Altro SPHK Inibitori	PF-543 hydrochloride SKI II K6PC-5 Defensamide (MHP) SKI-V SKI-178

Coltura cellulare, trattamento e concentrazione di lavoro

Linee cellulari	Tipo di saggio	Tempo di incubazione	Descrizione dellattività	PMID
Sf9	Function assay		Inhibition of human recombinant SphK2 expressed in Sf9 cells assessed as radiolabeled products using 10 uM sphingosine and 10 uM gamma[32P]ATP by liquid scintillation counting, Ki=9.8μM	25643074
Sf9	Function assay	2 hrs	Inhibition of recombinant human full-length N-terminal His-tagged SK2 expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells using NBD-Sph as substrate measured after 2 hrs by fluorescence based HPLC analysis, Ki=9.8μM	30889352
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Informazioni chimiche, conservazione e stabilità

Peso molecolare	380.91	Formula	C₂₃H₂₅ClN₂O	Conservazione (Dalla data di ricezione)	3 anni-20°Cpolvere
N. CAS	915385-81-8	Scarica SDF		Conservazione delle soluzioni stock	1 anno-80°Cin solvente 1 mese-20°Cin solvente
Sinonimi	N/A			Smiles	C1C2CC3(CC1CC(C2)(C3)C(=O)NCC4=CC=NC=C4)C5=CC=C(C=C5)Cl

Solubilità

In vitro
Lotto:

DMSO : 76 mg/mL (199.52 mM)
(Il DMSO contaminato da umidità può ridurre la solubilità. Utilizzare DMSO fresco e anidro.)

Ethanol : 28 mg/mL

Water : Insoluble

Calcolatore di Molarità

Massa	Concentrazione	Volume	Peso molecolare
=	×	×

Calcolatore di Diluizione Calcolatore del Peso Molecolare

In vivo Lotto:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	10%DMSO 1 40%PEG300 2 5%TWEEN80 3 45%ddH2O Validato dai laboratori Selleck. Se necessiti di modifiche a questa formulazione, contatta il nostro team di vendita per test personalizzati.	24.000mg/ml (63.01mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 100 μL of 240 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 450 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

Calcolatore di formulazione in vivo (Soluzione chiara)

Passo 1: Inserire le informazioni di seguito (Consigliato: Un animale aggiuntivo per tenere conto della perdita durante lesperimento)

Dosaggio: mg/kg Peso medio degli animali: g Volume di dosaggio per animale:μL Numero di animali:

Passo 2: Inserire la formulazione in vivo (Questo è solo il calcolatore, non la formulazione. Contattateci prima se non cè una formulazione in vivo nella sezione Solubilità.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Risultati del calcolo:

Concentrazione di lavoro: mg/ml;

Metodo per preparare il liquido master di DMSO: mg farmaco predissolto in μL DMSO ( Concentrazione del liquido master mg/mL, Vi preghiamo di contattarci prima se la concentrazione supera la solubilità del DMSO del lotto del farmaco. )

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungereμL PEG300, mescolare e chiarire, quindi aggiungereμL Tween 80, mescolare e chiarire, quindi aggiungere μL ddH₂O, mescolare e chiarire.

Metodo per preparare la formulazione in vivo: Prendere μL DMSO liquido master, quindi aggiungere μL Olio di mais, mescolare e chiarire.

Nota: 1. Si prega di assicurarsi che il liquido sia limpido prima di aggiungere il solvente successivo.
2. Assicurarsi di aggiungere il/i solvente/i in ordine. È necessario assicurarsi che la soluzione ottenuta, nellaggiunta precedente, sia una soluzione limpida prima di procedere allaggiunta del solvente successivo. Metodi fisici come il vortex, gli ultrasuoni o il bagno dacqua calda possono essere utilizzati per facilitare la dissoluzione.

Meccanismo dazione

Targets/IC₅₀/Ki	SphK2 (Cell-free assay) 60 μM
In vitro	Opaganib (ABC294640) altera marcatamente il rapporto ceramide/S1P in modo coerente con l'inibizione dell'attività di SK nelle cellule MDA-MB-231. Inibisce la proliferazione delle cellule tumorali con valori di IC50 che vanno da circa 6 a 48 μM e compromette la migrazione delle cellule tumorali con perdita di microfilamenti. Questo composto induce la morte cellulare non apoptotica, cambiamenti morfologici nei lisosomi, formazione di autofagosomi e aumenti delle vescicole acide nelle cellule A-498, PC-3 e MDA-MB-231. Sia nelle cellule MCF-7 che nelle cellule HEK293 trasfettate con ER, diminuisce l'attività della luciferasi ERE stimolata da E2.
Saggio chinasico	Saggi della Sfingosina Chinasi
Saggio chinasico	I valori di IC50 per Opaganib (ABC294640) e DMS sono determinati da un nuovo saggio di attività SK basato su HPLC. In breve, i composti in esame vengono incubati con SK1 o SK2 ricombinanti e NBD-Sph nei tamponi di saggio selettivi per isoenzima dettagliati di seguito con 1 mg/ml di albumina sierica bovina priva di acidi grassi, 100 μM ATP e 400 μM MgCl₂. Il prodotto, cioè NBD-S1P, viene separato da NBD-Sph mediante HPLC come segue: sistema HPLC Waters 2795 con un rilevatore di fluorescenza Waters 2495, colonna C8 Chromolith RP-8e (100 × 4.6 mm), fase mobile da 1 ml/min (acetonitrile/tampone di fosfato di sodio 20 mM, pH 2.5, a 45:55). La fluorescenza viene monitorata con eccitazione a 465 nm ed emissione a 531 nm. Il rapporto NBD-S1P/(NBD-Sph + NBD-S1P) viene utilizzato come misura dell'attività SK. I tamponi di saggio selettivi per isoenzima SK contenevano ciascuno 20 mM Tris, pH 7.4, 5 mM EDTA, 5 mM EGTA, 3 mM β-mercaptoetanolo, 5% glicerolo, 1× inibitori di proteasi e 1× inibitori di fosfatasi. Per il tampone di saggio SK1, viene aggiunto 0.25% (finale) di Triton X-100; e per il tampone SK2, viene aggiunto 1 M (finale) di KCl. I saggi vengono eseguiti per 2 ore a temperatura ambiente, e quindi viene aggiunto un volume di metanolo pari a 1.5 per terminare la reazione della chinasi. Dopo 10 minuti, i campioni vengono centrifugati a 20.000 g per pellettare la proteina precipitata, e i surnatanti vengono analizzati mediante HPLC. Negli esperimenti per determinare il Ki per l'inibizione di SK2 da parte di questo composto, viene utilizzato il sistema di saggio ADP Quest per misurare l'attività della chinasi in presenza di concentrazioni variabili di sfingosina e del composto. Per determinare gli effetti di Opaganib sull'attività cellulare di SK, le cellule MDA-MB-231 quasi confluenti vengono private del siero durante la notte, e quindi trattate con concentrazioni variabili del composto. Le cellule vengono quindi incubate con [³H]sfingosina a una concentrazione finale di 1 μM. Le cellule assorbono la sfingosina esogena, che viene convertita in S1P tramite l'attività di SK, e [³H]S1P viene separata da [³H]sfingosina mediante estrazione e quantificata mediante conteggio per scintillazione.
In vivo	Opaganib (ABC294640) riduce significativamente la crescita tumorale nei topi portatori di xenotrapianti di adenocarcinoma mammario, associata alla deplezione dei livelli di S1P. Nei topi con immunodeficienza combinata grave (SCID) portatori di xenotrapianti A-498, ritarda la crescita tumorale ed eleva i marcatori di autofagia. Questo composto protegge anche contro l'infiammazione indotta dal trapianto di fegato e il cross-talk tra immunità innate e adattive, eventi importanti che precipitano ed esacerbano il danno da trapianto, e migliora la funzione epatica e la sopravvivenza.
Riferimenti	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20061445/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20179157/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20861237/ [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22848628/

Applicazioni

Metodi	Biomarcatori	Immagini	PMID
Western blot	c-Myc pRb / Rb H3K9ac / p21 p-STAT3 / STAT3		27517489
Growth inhibition assay	Cell proliferation		25122609

Informazioni sullo studio clinico

(dati da https://clinicaltrials.gov, aggiornato il 2024-05-22)

Numero NCT	Reclutamento	Condizioni	Sponsor/Collaboratori	Data di inizio	Fasi
NCT02939807	Withdrawn	Carcinoma Hepatocellular	Medical University of South Carolina\|National Cancer Institute (NCI)\|Apogee Biotechnology Corporation	September 30 2019	Phase 2
NCT03377179	Completed	Cholangiocarcinoma\|Cholangiocarcinoma Non-resectable\|Cholangiocarcinoma Perihilar\|Cholangiocarcinoma Extrahepatic\|Cholangiocarcinoma Intrahepatic	RedHill Biopharma Limited	March 7 2018	Phase 2
NCT02757326	Terminated	Multiple Myeloma	RedHill Biopharma Limited\|Apogee Biotechnology Corporation\|Duke University\|National Cancer Institute (NCI)	December 13 2016	Phase 1\|Phase 2
NCT02229981	Withdrawn	Diffuse Large B Cell Lymphoma\|Kaposi Sarcoma	RedHill Biopharma Limited\|Louisiana State University Health Sciences Center in New Orleans\|Apogee Biotechnology Corporation	July 2014	Phase 1\|Phase 2
NCT01488513	Completed	Pancreatic Cancer\|Unspecified Adult Solid Tumor Protocol Specific	RedHill Biopharma Limited\|Apogee Biotechnology Corporation\|Medical University of South Carolina\|FDA Office of Orphan Products Development\|National Cancer Institute (NCI)	August 2011	Phase 1

Supporto tecnico

Istruzioni per la manipolazione

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Per qualsiasi altra domanda, si prega di lasciare un messaggio.

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C7=C6/X	C7:	LOG(C7):
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Struttura chimica

Peso molecolare: 380.91