DBeQ p97 inibitore

Rapidly and potently induces activation of executioner caspases and cell death.

DBeQ blocca la degradazione di UbG76V-GFP, ODD-Luc e Luc-ODC con IC50 di 2,6 μM, 56 μM e 45 μM nelle cellule HeLa. Questo composto è almeno 50 volte meno potente nei confronti del fattore sensibile alla N-etilmaleimide (NSF) e del proteasoma 26S. Inibisce p97 in modo competitivo rispetto all'ATP, con un Ki di 3,2 μM, suggerendo che si lega al sito attivo del dominio D2. Questo composto (10 μM) blocca potentemente la degradazione di TCR -GFP nelle cellule HEK293. Induce CHOP entro 3 ore in modo concentrazione-dipendente ma non aumenta il livello di p21 nelle cellule HEK293. Questo composto (15 μM) induce un forte accumulo di LC3-II nel nucleo e nelle frazioni arricchite di membrana e citosoliche nelle cellule Hela. Agisce bloccando la degradazione autofagica di LC3-II invece di indurre l'autofagia nelle cellule HeLa. Questo composto (10 μM) promuove rapidamente l'attivazione delle caspasi “esecutrici” -3 e -7 nelle cellule HeLa. Attiva la via apoptotica intrinseca della caspasi-9 più della via estrinseca della caspasi-8, mentre STS attiva entrambe le vie in misura simile. Questo composto è cinque volte più attivo contro le cellule di mieloma multiplo (RPMI8226) rispetto ai fibroblasti polmonari fetali umani normali (MRC5), con cellule HeLa e Hek293 che mostrano sensibilità intermedie. [1] Mostra una selettività 20 volte superiore per la stabilizzazione dei substrati reporter UPS dipendenti da p97 rispetto a quelli indipendenti nelle cellule HeLa. Questa sostanza chimica compromette la degradazione dei substrati all'interno delle vie ERAD e autofagiche. [2] Esso (12 μM) inibisce la neutralizzazione intracellulare in modo dose-dipendente nelle cellule HeLa. Questo composto (10 μM), che inibisce completamente la degradazione di virus e anticorpi nell'esperimento del destino del capside, non riesce a prevenire la degradazione di IgG Fc. Esso (9 μM) riduce il gradiente iniziale di neutralizzazione in funzione della concentrazione dell'anticorpo. [3] Questo composto diminuisce la fosforilazione sia basale che stimolata dai nutrienti dei bersagli MTOR, in modo simile agli effetti della rapamicina nelle cellule U20S. [4]

Saggio manuale dell'ATPasi

Il tampone di saggio [20 μL di concentrazione 2,5×, dove 1× = 50 mM Tris (pH 7,4), 20 mM MgCl₂, 1 mM EDTA e 0,5 mM tris(2-carbossietil)fosfina (TCEP)] viene dispensato in ogni pozzetto di una piastra a 96 pozzetti. La p97 purificata (25 μL di 50 μM) viene diluita in 975 μL di tampone di saggio 1×, e 10 μL vengono dispensati in ogni pozzetto. Questo composto (10 μL) o il 5% di DMSO (10 μL) viene quindi aggiunto a ogni pozzetto, e la piastra viene incubata a temperatura ambiente per 10 min. Il saggio dell'ATPasi viene eseguito aggiungendo a ogni pozzetto 10 μL di 500 μM ATP (pH 7,5), incubando a temperatura ambiente per 60 min, e quindi aggiungendo 50 μL di reagente Kinase Glo Plus, seguito da un'incubazione finale di 10 min a temperatura ambiente al buio. La luminescenza viene letta su un Analyst AD. Questa sostanza chimica viene saggiata in un intervallo di concentrazioni (0, 0,048, 0,24, 1,2, 6 e 30 μM) in triplice copia.