In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
DBeQ (JRF 12) è un inibitore selettivo, potente, reversibile e ATP-competitivo di p97 con una IC50 di 1,5 μM.
Target
p97
1.5 μM
In vitro
DBeQ blocca la degradazione di UbG76V-GFP, ODD-Luc e Luc-ODC con IC50 di 2,6 μM, 56 μM e 45 μM nelle cellule HeLa. Questo composto è almeno 50 volte meno potente nei confronti del fattore sensibile alla N-etilmaleimide (NSF) e del proteasoma 26S. Inibisce p97 in modo competitivo rispetto all'ATP, con un Ki di 3,2 μM, suggerendo che si lega al sito attivo del dominio D2. Questo composto (10 μM) blocca potentemente la degradazione di TCR
-GFP nelle cellule HEK293. Induce CHOP entro 3 ore in modo concentrazione-dipendente ma non aumenta il livello di p21 nelle cellule HEK293. Questo composto (15 μM) induce un forte accumulo di LC3-II nel nucleo e nelle frazioni arricchite di membrana e citosoliche nelle cellule Hela. Agisce bloccando la degradazione autofagica di LC3-II invece di indurre l'autofagia nelle cellule HeLa. Questo composto (10 μM) promuove rapidamente l'attivazione delle caspasi “esecutrici” -3 e -7 nelle cellule HeLa. Attiva la via apoptotica intrinseca della caspasi-9 più della via estrinseca della caspasi-8, mentre STS attiva entrambe le vie in misura simile. Questo composto è cinque volte più attivo contro le cellule di mieloma multiplo (RPMI8226) rispetto ai fibroblasti polmonari fetali umani normali (MRC5), con cellule HeLa e Hek293 che mostrano sensibilità intermedie. Mostra una selettività 20 volte superiore per la stabilizzazione dei substrati reporter UPS dipendenti da p97 rispetto a quelli indipendenti nelle cellule HeLa. Questa sostanza chimica compromette la degradazione dei substrati all'interno delle vie ERAD e autofagiche. Esso (12 μM) inibisce la neutralizzazione intracellulare in modo dose-dipendente nelle cellule HeLa. Questo composto (10 μM), che inibisce completamente la degradazione di virus e anticorpi nell'esperimento del destino del capside, non riesce a prevenire la degradazione di IgG Fc. Esso (9 μM) riduce il gradiente iniziale di neutralizzazione in funzione della concentrazione dell'anticorpo. Questo composto diminuisce la fosforilazione sia basale che stimolata dai nutrienti dei bersagli MTOR, in modo simile agli effetti della rapamicina nelle cellule U20S.
Caratteristiche
Induce rapidamente e potentemente l'attivazione delle caspasi esecutrici e la morte cellulare.
Il tampone di saggio [20 μL di concentrazione 2,5×, dove 1× = 50 mM Tris (pH 7,4), 20 mM MgCl2, 1 mM EDTA e 0,5 mM tris(2-carbossietil)fosfina (TCEP)] viene dispensato in ogni pozzetto di una piastra a 96 pozzetti. La p97 purificata (25 μL di 50 μM) viene diluita in 975 μL di tampone di saggio 1×, e 10 μL vengono dispensati in ogni pozzetto. Questo composto (10 μL) o il 5% di DMSO (10 μL) viene quindi aggiunto a ogni pozzetto, e la piastra viene incubata a temperatura ambiente per 10 min. Il saggio dell'ATPasi viene eseguito aggiungendo a ogni pozzetto 10 μL di 500 μM ATP (pH 7,5), incubando a temperatura ambiente per 60 min, e quindi aggiungendo 50 μL di reagente Kinase Glo Plus, seguito da un'incubazione finale di 10 min a temperatura ambiente al buio. La luminescenza viene letta su un Analyst AD. Questa sostanza chimica viene saggiata in un intervallo di concentrazioni (0, 0,048, 0,24, 1,2, 6 e 30 μM) in triplice copia.
Cells are seeded on a 384-well solid white plate (5,000 cells/well). Cells are transfected with luciferase siRNA or p97 siRNA (10 nM) for 48 hours or treated with DBeQ for the indicated amount of time. Caspase-3/7 Glo, caspase-6 Glo, caspase-8 Glo, or caspase-9 Glo is added into each well and mixed by shaking at 500 rpm for 1 min. Luminescence signal is determined after incubation at room temperature for 1 hour. Cellular viability is determined with CellTiter-Glo reagen. To determine the IC50 of cellular viability, cells are treated with MG132 or this compound at seven concentrations (threefold serial dilutions starting at 33 μM) for 48 hours. IC50 values are calculated from fitting the percentage of luminescence signal normalized to DMSO treated cells).
Riferimenti
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21383145/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21606684/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23091005/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23439279/
Sellecks DBeQ È stato citato da 11 Pubblicazioni
Ubiquitin regulatory X (UBX) domain-containing protein 6 is essential for autophagy induction and inflammation control in macrophages
[ Cell Mol Immunol, 2024, 10.1038/s41423-024-01222-1]
White spot syndrome virus benefits from endosomal trafficking, substantially facilitated by a valosin-containing protein, to escape autophagic elimination and propagate in crustacean Cherax quadricarinatus
[ J Virol, 2020, JVI.01570-20]
Functional cooperativity of p97 and histone deacetylase 6 in mediating DNA repair in mantle cell lymphoma cells
[Vekaria PH Leukemia, 2019, 10.1038/s41375-018-0355-y]
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