OSI-930 c-Kit inhibiteur

OSI-930 inhibe la prolifération cellulaire dans la lignée cellulaire HMC-1 avec une IC50 de 14 nM sans effet significatif sur la croissance de la lignée cellulaire COLO-205 qui n'exprime pas de récepteur tyrosine kinase mutant constitutivement actif. De plus, ce composé induit également l'apoptose dans la lignée cellulaire HMC-1 avec une EC50 de 34 nM. [1] Une étude récente montre que ce produit chimique inactive la cytochrome P450 (P450) 3A4 purifiée et recombinante avec un K_i de 24 μM de manière dépendante du temps et de la concentration. [2]

Tests de kinases protéiques

Les tests de kinases protéiques sont effectués soit en interne par des méthodes d'analyse basées sur ELISA (Kit, KDR, PDGFRα et PDGFRβ), soit par une méthode radiométrique. Les tests ELISA internes utilisaient du poly(Glu:Tyr) comme substrat lié à la surface de plaques d'analyse à 96 puits; la phosphorylation est ensuite détectée à l'aide d'un anticorps anti-phosphotyrosine conjugué à la HRP. L'anticorps lié est ensuite quantifié à l'aide d'ABTS comme substrat de peroxydase en mesurant l'absorbance à 405/490 nm. Toutes les analyses utilisent des domaines catalytiques de kinases recombinantes purifiées qui sont exprimées soit dans des cellules d'insectes, soit dans des bactéries. La protéine Kit et EGFR utilisée pour les analyses internes est préparée en interne; d'autres enzymes sont obtenues. La protéine Kit recombinante est exprimée sous forme de protéine de fusion glutathion S-transférase NH₂-terminale dans des cellules d'insectes et est initialement purifiée comme une enzyme non phosphorylée (non activée) avec un K_m relativement élevé pour l'ATP (400 μM). Dans certains tests, une forme activée (tyrosine phosphorylée) de l'enzyme est préparée par incubation avec 1 mM d'ATP pendant 1 heure à 30 °C. La protéine phosphorylée est ensuite passée à travers une colonne de dessalement pour éliminer la majeure partie de l'ATP et stockée à -80 °C dans un tampon contenant 50 % de glycérol. La préparation résultante a une activité spécifique considérablement plus élevée et un Km plus faible pour l'ATP (25 μM) que la préparation initiale non phosphorylée. L'inhibition de l'autophosphorylation de Kit par ce composé est testée par incubation de l'enzyme non phosphorylée à 30 °C en présence de 200 μM d'ATP et de diverses concentrations de ce produit chimique. La réaction est arrêtée par le retrait d'aliquotes dans un tampon d'échantillon SDS-PAGE, suivi d'un chauffage à 100 °C pendant 5 minutes. Le degré de phosphorylation de Kit est ensuite déterminé par immunotransfert pour le Kit total et le Kit phosphorylé.

OSI-930, administré à la dose maximalement efficace de 200 mg/kg par gavage oral, présente une activité antitumorale puissante dans un large éventail de modèles de xénogreffes précliniques, y compris les modèles de xénogreffes HMC-1, NCI-SNU-5, COLO-205 et U251. [1]