Poly DYKDDDDK Tag Peptide lyophilized powder

Confronto Prodotto

Descrizione

Poly DYKDDDDK Tag Peptide in polvere liofilizzata (3X DYKDDDDK Tag Peptide) è un polipeptide composto da 23 amminoacidi con un peso molecolare di 2864 Da, che può legare lanticorpo Anti-DYKDDDDK Tag per competizione, in modo che lanticorpo legato allanticorpo Anti-DYKDDDDK Tag possa essere eluito durante limmunoprecipitazione della proteina di fusione DYKDDDDK Tag. Il motivo Asp-Tyr-Lys-Xaa-Xaa-Asp nel polipeptide si ripete tre volte, e gli 8 amminoacidi al C-terminale costituiscono il classico DYKDDDDK Tag (Asp-Tyr-Lys-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys).

Proprietà

Applicazione

Per luso nelleluizione competitiva delle proteine di fusione DYKDDDDK dallanticorpo monoclonale ANTI-DYKDDDDK Tag in soluzione o legato ad agarosio sulle sfere Anti-DYKDDDDK.

Attenzione

1. Leggere attentamente il manuale utente prima del primo utilizzo;

2. Evitare il congelamento, lessiccazione e la centrifugazione ad alta velocità durante luso e la conservazione delle sfere;

3. Questo prodotto è solo per uso di ricerca e sviluppo, non per uso farmaceutico, domestico o altro. Si prega di consultare la scheda di sicurezza per informazioni sui pericoli e sulle pratiche di manipolazione sicura.

Procedura

Eluizione peptidica della proteina di fusione DYKDDDDK dalle sfere Anti-DYKDDDDK

1. Sospendere accuratamente il gel di affinità Anti-DYKDDDDK Tag nel flaconcino, per ottenere una sospensione uniforme della resina. Trasferire rapidamente 10 μl della sospensione di gel (circa 5 μl di volume di gel impaccato) in una nuova provetta.

2. Aggiungere 0,6 mL di TBS. Sospendere accuratamente il gel di affinità Anti-DYKDDDDK Tag mediante pipettaggio. Centrifugare la resina a 5000 rpm per 30 secondi e rimuovere con attenzione il surnatante. Assicurarsi di rimuovere tutto il tampone di lavaggio senza scartare la resina. Ripetere 3-4 volte.

3. Aggiungere 500 μL di estratti periplasmatici cellulari alla resina lavata.

4. Agitare delicatamente i campioni per 2 ore a 4°C.

5. Centrifugare la resina per 30 secondi a 5000 rpm. Trasferire i surnatanti in una nuova provetta.

6. Lavare la resina con 0,5 mL di TBS fino a quando lOD280 del surnatante sia <0,05.

7. Eluizione della proteina di fusione DYKDDDDK per competizione con il peptide Poly DYKDDDDK. Eluire la proteina di fusione DYKDDDDK legata mediante eluizione competitiva con cinque aliquote di un volume di colonna di una soluzione contenente 200-400 ug/mL di peptide Poly DYKDDDDK in TBS.

8. Riciclo delle sfere Anti-DYKDDDDK
Il peptide Poly DYKDDDDK potrebbe non eluire tutta la proteina di fusione DYKDDDDK legata alle sfere Anti-DYKDDDDK. Si raccomanda di rigenerare le sfere Anti-DYKDDDDK immediatamente dopo luso lavando con tre aliquote da 5 mL di glicina HCl 0,1 M, pH 3,5. Il gel deve essere immediatamente riequilibrato in TBS fino a quando leffluente non abbia un pH neutro.

Nota: Non lasciare le sfere Anti-DYKDDDDK in glicina HCl per più di 20 minuti.
9. Conservazione delle sfere Anti-DYKDDDDK Lavare le sfere Anti-DYKDDDDK tre volte con 5 mL di glicerolo al 50% con 10 mM di fosfato di sodio, 150 mM di cloruro di sodio, pH 7,4, contenente 0,02% (p/v) di sodio azide. Quindi aggiungere altri 5 mL di glicerolo al 50% con 10 mM di fosfato di sodio, 150 mM di cloruro di sodio, pH 7,4, contenente 0,02% (p/v) di sodio azide e conservare a -20°C senza drenare.

Conservazione (dalla data di ricezione)

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