Olverembatinib (GZD824) dimesylate Bcr-Abl inhibiteur

Le GZD824 inhibe puissamment la croissance des cellules Ba/F3 exprimant le Bcr-Abl de type sauvage avec un IC50 de 1,0 nM. Très cohérent avec l'inhibition biochimique de la kinase et l'affinité de liaison protéique forte, le GZD824 inhibe également fortement la prolifération des cellules Ba/F3 exprimant le mutant Bcr-AblT315I et 14 autres mutants de Bcr-Abl pertinents pour la résistance. De plus, le GZD824 supprime efficacement l'activation de Bcr-Abl ainsi que de Crkl et STAT5 en aval de manière dépendante de la concentration dans les cellules K562 CML. [1]

Dosage Z′-Lyte basé sur le FRET détectant la phosphorylation du substrat peptidique

Les kinases ABL1, ABL1(E255K), ABL1 (G250E), ABL1(T315I) et ABL1(Y253F) sont des protéines recombinantes humaines pleine longueur P3049, PV3864, PV3865, PV3866 et PV3863, exprimées dans des cellules d'insectes et marquées par l'histidine. Les activités inhibitrices des inhibiteurs contre Abl1 et ses mutants sont réalisées dans des plaques de 384 puits à l'aide du système de dosage Z′-Lyte basé sur le FRET. En bref, le substrat de la kinase est dilué dans 5 μL de tampon de réaction de la kinase; et la kinase est ajoutée. Les composés (10 nL) avec les concentrations indiquées sont ensuite délivrés à la réaction à l'aide d'un distributeur de liquide Echo, et le mélange est incubé pendant 30 minutes à température ambiante. Ensuite, 5 μL de solution 2X ATP sont ajoutés pour initier la réaction, et le mélange est incubé pendant 2 heures supplémentaires à température ambiante. Les réactions résultantes contiennent 10 μM (pour Abl1 de type sauvage, et les mutants Y253F, Q252H, M351T et H396P) ou 5 μM (pour les mutants E255K, G250E, T315I) d'ATP, 2 μM de substrat peptidique Tyr2 dans 50 mM HEPES (pH 7,5), 0,01% BRIJ-35, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 0,0247 μg/mL Abl1, et des inhibiteurs selon les besoins. Ensuite, 5 μL de réactif de développement sont ajoutés, et le mélange est incubé pendant 2 heures à température ambiante avant l'ajout de 5 μL de solution d'arrêt. Le rapport de signal de fluorescence de 445 nm (Coumarine)/520 nm (fluorescéine) est examiné sur un lecteur multimodale EnVision. Les données sont analysées à l'aide de Graphpad Prism5. Les données représentent la valeur moyenne de trois expériences.

Le GZD824, à des doses de 5 et 10 mg/kg/jour, inhibe la croissance tumorale de manière dose-dépendante dans le xénogreffe tumoral K562 et le modèle de xénogreffe Ku812 sans mortalité ni perte de poids significative. En outre, le GZD824 (20 mg/kg/jour) supprime la croissance tumorale chez les souris porteuses de cellules Ba/F3 allogreffées exprimant Bcr-AblWT et Bcr-AblT315I. [1]