Home Neuronal Signaling CaMK remmer NH125

uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

NH125 CaMK remmer

Cat.Nr.S7436

NH125 is een selectieve eEF-2 kinase remmer met een IC50 van 60 nM, >125-voudige selectiviteit over PKC, PKA, en CaMKII, en ook een krachtige histidine kinase remmer.
NH125 CaMK remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Moleculair gewicht: 524.56

Ga naar

Kwaliteitscontrole

Batch: S743601 DMSO]100 mg/mL]false]Ethanol]100 mg/mL]false]Water]Insoluble]false Zuiverheid: 99.91%
99.91

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit

Moleculair gewicht 524.56 Formule

C27H45IN2

 Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)
CAS-nr. 278603-08-0 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles CCCCCCCCCCCCCCCCN1C=C[N+](=C1C)CC2=CC=CC=C2.[I-]

Oplosbaarheid

In vitro
Batch:

DMSO : 100 mg/mL (190.63 mM)
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : 100 mg/mL

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Moleculair gewicht
Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo
Batch:

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH2O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme

Targets/IC50/Ki
eEF-2 kinase
60 nM
In vitro
In C6 glioomcellen verlaagt NH125 het cellulaire gehalte aan fosfo-eEF-2 zonder het totale eEF-2 gehalte te beïnvloeden, en blokkeert het de celcyclusovergang bij de G1-S-grens. Deze verbinding remt krachtig de levensvatbaarheid van 10 kankercellen met IC50 variërend van 0,7 tot 4,8 μM. Het remt effectief histidine proteïnekinasen, waaronder Envz, PhoQ, BvgS, EvgS, en produceert daardoor krachtige antibacteriële activiteiten op oxacilline-resistente Staphylococcus aureus (ORSA), vancomycine-resistente Enterococcus faecalis (VRE), penicilline-resistente Streptococcus pneumoniae (PRS), en andere Gram-positieve en Gram-negatieve bacteriën. EEF2K-remming door deze chemische stof maakt tumorcellen gevoeliger voor curcumine en velcade, die ER-stress-inducerende werking bezitten.
Kinase Assay
eEF-2 Kinase Assay
eEF-2 kinase-activiteit wordt gemeten met twee methoden: (a) een filtergebaseerde test; en (b) door immunoblotting met anti-fosfo-eEF2-antilichaam. Voor beide worden reacties uitgevoerd in 20 μl totaal volume dat 50 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl2, 1,5 mM CaCl2, 100 μg/ml calmoduline, 2 μM His-gelabelde eEF-2 en 400 nM GST-eEF-2 kinase, en ATP-mengsel [50 μM ATP met 1μCi (γ-33P)ATP] bevat. Het kinasemengsel zonder ATP wordt op ijs bereid en vervolgens gedurende 15 min bij kamertemperatuur voorgeïncubeerd. Kinase-reacties worden gestart door ATP toe te voegen en gedurende 30 min bij 30°C te laten verlopen. Voor de filtergebaseerde test wordt de reactie beëindigd door 20 μl koude 1,5% fosforzuur toe te voegen, en 5 μl van de reactie wordt aangebracht op P81 Whatman fosfocellulosepapier. Het papier wordt driemaal gewassen in 500 ml 0,5% fosforzuur en eenmaal met 200 ml aceton. Het papier wordt vervolgens aan de lucht gedroogd en ondergedompeld in 10 ml scintillatiemengsel. Radioactiviteit wordt geteld met een Beckton-Dickinson vloeistofscintillatieteller. Voor immunoblotting worden de reacties gestopt door toevoeging van 20 μl 3× Lamelli-buffer [190 mM Tris (pH 6,8), 6% SDS, 30% glycerol, 15% 2-mercaptoethanol, en 0,003% broomfenolblauwe kleurstof]. Monsters worden 5 min gekookt en gescheiden door 7% SDS-PAGE en verwerkt voor Western blotting zoals hieronder beschreven. Condities voor beide assays zijn gekozen om de lineariteit van de reactie met betrekking tot incubatietijd en enzymconcentratie te waarborgen.
In vivo
NH125 verlaagt de bloeddruk bij SHR en ROS-productie, inductie van ontstekingsmoleculen en hypertrofie in de superieure mesenteriale slagader van SHR.
Referenties
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23812389/

Technische ondersteuning

Gebruiksaanwijzing

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Als u nog andere vragen heeft, kunt u een bericht achterlaten.

Gelieve uw naam in te voeren.
Gelieve uw e-mailadres in te voeren. Voer een geldig e-mailadres in.
Schrijf alstublieft iets voor ons.