Name: Anisomycin (Flagecidin)
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S7409
Rating: 5 (85 reviews)

Ga naar

Kwaliteitscontrole

Batch: Zuiverheid: 99.93%

99.93

Gerelateerde doelwitten	ERK p38 MAPK Raf MEK Ras KRas S6 Kinase MAP4K TAK1 Mixed Lineage Kinase
Overige JNK Inhibitoren	CC-90001 SP600125 JNK-IN-8 JNK Inhibitor IX Tanzisertib Hydrochloride (CC-930) JNK Inhibitor VIII Polyphyllin I DTP3 BI-78D3 Bentamapimod (AS602801)

Celkweek, behandeling & werkconcentratie

Cellijnen	Assaytype	Concentratie	Incubatietijd	Activiteitsbeschrijving	PMID
HEK293	Function assay			Inhibitory concentration required to produce cytotoxicity against HEK293 cells, IC50=0.02μM.	16005213
HeLa	Function assay	10 uM		Inhibition of translation in human HeLa cells at 10 uM by 35S-methionine metabolic labeling study	15165136
HEK293	Function assay	100 uM	15 mins	Increase of JNK phosphorylation in U50488 treated untransfected HEK293 cells at 100 uM after 15 mins	17702750
HEK293	Function assay	50 uM	15 mins	Increase of U50488-induced JNK phosphorylation in untransfected HEK293 cells at 50 uM after 15 mins	17702750
RAW264.7	Function assay	5 uM	30 mins	Activation of p38MAPK in mouse RAW264.7 cells assessed as phosphorylation at Thr180/Tyr182 at 5 uM after 30 mins by Western blotting analysis	23294286
Sf9	Function assay	10 uM	6 to 24 hr	Increase of ATP level in Spodoptera frugiperda (fall armyworm) Sf9 cells at 10 uM after 6 to 24 hr by luminescent cell viability assay	ChEMBL
Sf9	Cytotoxicity assay	10 uM	72 hr	Cytotoxicity against Spodoptera frugiperda (fall armyworm) Sf9 cells at 10 uM after 72 hr by trypan blue dye exclusion test	ChEMBL
VERO-E6	Function assay		48 hrs	Determination of IC50 values for inhibition of SARS-CoV-2 induced cytotoxicity of VERO-E6 cells after 48 hours exposure to 0.01 MOI SARS CoV-2 virus by high content imaging, IC50=0.09μM.	ChEMBL
VERO-E6	Function assay		48 hrs	Toxicity CC50 against VERO-E6 cells determined at 48 hours by high content imaging (same conditions as 2_LEY without exposure to 0.01 MOI SARS CoV-2 virus), CC50=0.1μM.	ChEMBL
Vero E6	Function assay			CC50 determination at MOI 0.004 using CellTiter- Glo (CTG) assay, performed 3 days post-infection in Vero E6 cells, CC50<0.39μM.	ChEMBL
Vero E6	Function assay			CC50 determination at MOI 0.01 using CellTiter- Glo (CTG) assay, performed 3 days post-infection in Vero E6 cells, CC50<0.39μM.	ChEMBL
Klik om meer experimentele gegevens over de cellijn te bekijken

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit

Moleculair gewicht	265.3	Formule	C₁₄H₁₉NO₄	Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)	3 jaar-20°Cpoeder
CAS-nr.	22862-76-6	SDF downloaden		Opslag van stamoplossingen	1 jaar-80°Cin oplosmiddel 1 maand-20°Cin oplosmiddel

Oplosbaarheid

In vitro
Batch:

DMSO : 53 mg/mL (199.77 mM)
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : 16 mg/mL

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa	Concentratie	Volume	Moleculair gewicht
=	×	×

Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo Batch:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor aangepaste tests.	2.650mg/ml (9.99mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 53 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor aangepaste tests.	0.850mg/ml (3.20mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 17 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

Dosering: mg/kg Gemiddeld gewicht van dieren: g Doseervolume per dier:μL Aantal dieren:

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH₂O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme

Targets/IC₅₀/Ki	JNK
In vitro	Anisomycin (3 μM) vermindert de eiwitsynthese in MDA16- en MDA-MB-468-cellen en vermindert de kolonieformatie door MDA-MB-468-cellen. Deze verbinding veroorzaakt een toename van het aantal apoptotische cellen in MDA-MB-468-culturen, maar niet in MDA16-culturen. Het activeert JNK-fosforylering in MDA-MB-468-cellen. In U251- en U87-cellen remt deze chemische stof (0.01-8 μM) de celgroei op een tijd- en concentratie-afhankelijke manier met IC50 (48 uur) waarden van respectievelijk 0.233 en 0.192 μmol/L. Het (4 μM) veroorzaakt respectievelijk 21.5% en 25.3% apoptose in U251- en U87-cellen, en activeert p38 MAPK en JNK, terwijl ERK1/2 geïnactiveerd wordt. Deze verbinding (4 μM) vermindert het niveau van de PP2A/C-subeenheid op een tijd-afhankelijke manier in U251- en U87-cellen. Het remt de EAC-celproliferatie op een concentratie-afhankelijke manier.
Kinase Assay	JNK-fosforylering
Kinase Assay	500.000 cellen/putje worden gezaaid in 6-wells platen en overnacht geïncubeerd. Cellen worden vervolgens gedurende 1 uur geïncubeerd met testverbindingen of DMSO als vehikelcontrole (eindconcentratie 1% v/v). Puromycine wordt toegevoegd (eindconcentratie van 18 μM) en cellen worden nog 10 minuten geïncubeerd om nieuwe polypeptideketens te labelen. Achtergrondlabeling wordt bepaald door cellen zonder puromycine te incuberen. Cellen worden vervolgens gewassen in HBSS, geoogst door te schrapen en gecentrifugeerd (300 g, 5 min). Cellen worden geresuspendeerd in 0.5 mL 50 mM DTT dat fosfatase-remmers bevat en geïncubeerd bij 95℃ gedurende 10 min. Monsters worden vervolgens direct ingevroren in vloeibare stikstof en opgeslagen bij -20℃ totdat ze geblot worden. Monsters (20–30 μg eiwit/monster) worden geblot op een PVDF-membraan. Het membraan wordt geblokkeerd en overnacht geïncubeerd met anti-fosfo-Thr183/Tyr185-JNK antilichaam bij 4℃. Secundaire antilichamen worden gebruikt om het primaire antilichaam te labelen en gedetecteerd met behulp van een infraroodscanner. De intensiteit van het fluorescentiesignaal voor anti-fosfo-JNK antilichaam wordt achtergrond gecorrigeerd en genormaliseerd voor lading.
In vivo	Peritumorale toediening van Anisomycin (5 mg/kg) onderdrukt significant de groei van Ehrlich ascites carcinoom (EAC), wat resulteert in een overleving van ongeveer 60% van de muizen 90 dagen na EAC-inoculatie.
Referenties	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9154836/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24333448/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22684030/ [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23525555/

Toepassingen

Methoden	Biomarkers	PMID
Western blot	p-Keratin 20 / Keratin 20 / p-Keratin 18 / Keratin 18 / p-Keratin 8 / Keratin 8 / p-MK2 / p-hHSPB1 / hHSPB1 PP2A / PP2C p-ERK / ERK / p-JNK / JNK / p-p38 / ATF3	20724476
Immunofluorescence	p-Keratin 8 / p-Keratin 18 / p-Keratin 20	20724476
Growth inhibition assay	Cell viability	22684030