Name: BIX-01294 trihydrochloride
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S8006
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Cibles apparentées	HDAC JAK BET PKC PARP HIF PRMT EZH2 AMPK Histone Acetyltransferase
Autre Histone Methyltransferase Inhibiteurs	Pinometostat (EPZ5676) 3-Deazaneplanocin A (DZNep) Hydrochloride UNC1999 EPZ015666 (GSK3235025) EPZ004777 MM-102 (HMTase Inhibitor IX) Chaetocin SGC 0946 EPZ005687 UNC0638

Culture cellulaire, traitement et concentration de travail

Lignées cellulaires	Type dessai	Concentration	Temps dincubation	Description de lactivité	PMID
HeLa cells	Function assay			Inhibition of ERK5 phosphorylation in sorbitol-stimulated human HeLa cells, IC50=0.059 μM	23656407
HeLa	Function assay		4.5 hrs	Inhibition of Ebolavirus glycoprotein/matrix protein VP40 entry in human HeLa cells after 4.5 hrs beta-lactamase reporter assay, IC50 = 0.966 μM.	29624387
BL21 (DE3)-Gold	Function assay		20 mins	Inhibition of N-terminal hexahistidine-tagged human G9a (913 to 1193 residues) expressed in Escherichia coli BL21 (DE3)-Gold cells using histone H3 (1 to 15 residues) as substrate preincubated for 20 mins followed by substrate addition by mass spectrometr, IC50 = 1.9 μM.	27720557
HL60	Antiproliferative assay		48 hrs	Antiproliferative activity against human HL60 cells after 48 hrs by CCK8 assay, IC50 = 2.2 μM.	27393948
A549	Antiproliferative assay		48 hrs	Antiproliferative activity against human A549 cells after 48 hrs by CCK8 assay, IC50 = 2.8 μM.	27393948
HepG2	Antiproliferative assay		48 hrs	Antiproliferative activity against human HepG2 cells after 48 hrs by CCK8 assay, IC50 = 3.7 μM.	27393948
K562	Antiproliferative assay		48 hrs	Antiproliferative activity against human K562 cells after 48 hrs by CCK8 assay, IC50 = 3.9 μM.	27393948
MDA-MB-231	Function assay		2 days	Inhibition of G9a in human MDA-MB-231 cells assessed as reduction in H3K9me2 level after 2 days by immunofluorescence in-cell western analysis, IC50 = 4.563 μM.	29541353
K562	Function assay	0.5 to 2 uM	72 hrs	Inhibition of histone methyltransferase G9a in human K562 cells assessed as reduction in histone H3K9me2 levels at 0.5 to 2 uM after 72 hrs by Western blot analysis	27393948
TC32	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for TC32 cells	29435139
DAOY	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for DAOY cells	29435139
SJ-GBM2	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SJ-GBM2 cells	29435139
A673	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for A673 cells	29435139
SK-N-MC	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-MC cells	29435139
BT-37	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for BT-37 cells	29435139
NB-EBc1	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB-EBc1 cells	29435139
Saos-2	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Saos-2 cells	29435139
SK-N-SH	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-SH cells	29435139
NB1643	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB1643 cells	29435139
LAN-5	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for LAN-5 cells	29435139
BT-12	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for BT-12 cells	29435139
Rh18	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Rh18 cells	29435139
OHS-50	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for OHS-50 cells	29435139
RD	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for RD cells	29435139
MG 63 (6-TG R)	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for MG 63 (6-TG R) cells	29435139
wild type fibroblast cells	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for control Hh wild type fibroblast cells	29435139
Rh41	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Rh41 cells	29435139
NB1643	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for NB1643 cells	29435139
A673	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for A673 cells)	29435139
SK-N-MC	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for SK-N-MC cells	29435139
SJ-GBM2	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for SJ-GBM2 cells	29435139
BT-37	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for BT-37 cells	29435139
TC32	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for TC32 cells	29435139
Rh41	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for Rh41 cells	29435139
RD	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for RD cells	29435139
Rh30	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for Rh30 cells	29435139
OHS-50	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for OHS-50 cells	29435139
SK-N-SH	qHTS assay			qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for SK-N-SH cells	29435139
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Informations chimiques, stockage et stabilité

Poids moléculaire	600.02	Formule	C₂₈H₃₈N₆O₂.3HCl	Stockage (À partir de la date de réception)	3 ans-20°Cpoudre
N° CAS	1392399-03-9	Télécharger le SDF		Stockage des solutions mères	1 an-80°Cen solvant 1 mois-20°Cen solvant
Synonymes	N/A			Smiles	CN1CCCN(CC1)C2=NC3=CC(=C(C=C3C(=N2)NC4CCN(CC4)CC5=CC=CC=C5)OC)OC.Cl.Cl.Cl

Solubilité

In vitro
Lot:

DMSO : 98 mg/mL (163.32 mM)
(Le DMSO contaminé par lhumidité peut réduire la solubilité. Utiliser du DMSO frais et anhydre.)

Water : 98 mg/mL

Ethanol : 8 mg/mL

Calculateur de molarité

Masse	Concentration	Volume	Poids moléculaire
=	×	×

Calculateur de dilution Calculateur de poids moléculaire

In vivo Lot:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

Calculateur de formulation in vivo (Solution claire)

Étape 1 : Entrez les informations ci-dessous (Recommandé : Un animal supplémentaire pour tenir compte des pertes pendant lexpérience)

Dosage : mg/kg Poids moyen des animaux : g Volume de dosage par animal :μL Nombre danimaux :

Étape 2 : Entrez la formulation in vivo (Ceci nest que le calculateur, pas la formulation. Veuillez nous contacter dabord sil ny a pas de formulation in vivo dans la section Solubilité.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Résultats du calcul :

Concentration de travail : mg/ml;

Méthode de préparation du liquide maître DMSO : mg médicament prédissous dans μL DMSO ( Concentration du liquide maître mg/mL, Veuillez nous contacter dabord si la concentration dépasse la solubilité du DMSO du lot de médicament. )

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, ajouter ensuiteμL PEG300, mélanger et clarifier, ajouter ensuiteμL Tween 80, mélanger et clarifier, ajouter ensuite μL ddH₂O, mélanger et clarifier.

Méthode de préparation de la formulation in vivo : Prendre μL DMSO liquide maître, ajouter ensuite μL Huile de maïs, mélanger et clarifier.

Remarque : 1. Assurez-vous que le liquide est clair avant dajouter le solvant suivant.
2. Assurez-vous dajouter le(s) solvant(s) dans lordre. Vous devez vous assurer que la solution obtenue lors de lajout précédent est une solution claire avant de procéder à lajout du solvant suivant. Des méthodes physiques telles que le vortex, les ultrasons ou le bain-marie peuvent être utilisées pour faciliter la dissolution.

Mécanisme daction

Targets/IC₅₀/Ki	G9a (Cell-free assay) 2.7 μM
In vitro	Le BIX01294 est un inhibiteur sélectif de l'histone méthyltransférase G9a et n'affecte pas SUV39H1(H320R) et PRMT1 dans la gamme de concentrations testées. Le BIX-01294 a spécifiquement inhibé G9a (H3K9me2) et, à un degré moindre, l'enzyme GLP étroitement apparentée (principalement H3K9me3), avec une IC50 de 1,7 μM pour G9a et de 38 μM pour GLP. Le BIX-01294 inhibe G9a de manière incompétitive avec SAM. Le BIX-01294 (4,1 μM) réduit les niveaux de H3K9me2 dans les préparations d'histones en vrac provenant de cellules ES wt, de fibroblastes embryonnaires de souris et de cellules HeLa, mais pas dans les cellules souches déficientes en G9a. Le BIX-01294 est un inhibiteur précieux pour la modulation transitoire du H3K9me2 chromosomique. Le BIX-01294 réduit le H3K9me2 au niveau de plusieurs gènes cibles de G9a, y compris Bim1 et Serac1. Le BIX01294 pourrait réactiver l'expression du VIH-1 à partir de cellules latentes infectées telles que ACH-2 et OM10.1.
Kinase Assay	Essais HMTase
Kinase Assay	Des essais d'immunofluorescence à lanthanide à dissociation améliorée (DELFIA) sont réalisés dans des plaques à 384 puits blanches et opaques, revêtues de Neutravidine. Les composés testés sont dilués à 12 μg/ml dans 50 mM Tris-HCl pH 8,5 contenant 4 % de DMSO et 10 μl sont distribués dans les puits. Les puits blancs et de contrôle ne reçoivent que le tampon du composé. Le GST-G9a à 10 μg/ml et le SAM à 40 μM sont dilués dans 50 mM Tris HCl pH 8,5/10 mM DTT et ajoutés dans un volume de 20 μL. Les puits blancs ne reçoivent que le tampon Tris/DTT. Les réactions sont initiées par l'ajout de 800 nM de substrat H3(1-20)-cysbiotine dans 50 mM Tris pH 8,5 dans un volume de 10 μl, et incubées à température ambiante pendant 60 minutes. Les plaques sont lavées 3 fois avec 100 μl de tampon de lavage. Ensuite, 50 μl de tampon de fluoroimmunodosage (FI) contenant 5 ng d'α-2X-di-meth H3-K9 et 5 ng de chélate Eu d'anticorps de chèvre anti-lapin sont ajoutés à tous les puits de la plaque, et la plaque est incubée pendant une heure supplémentaire à température ambiante. Les plaques sont lavées 3 fois avec 100 μL de tampon de lavage, et 50 μl de solution d'amélioration sont ajoutés à chaque puits. La fluorescence résolue dans le temps est mesurée après 45 minutes sur un imageur de microplaques Viewlux, pendant 15 secondes.
Références	[1] http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=17289593 [2] http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=20335163 [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33147463/

Applications

Méthodes	Biomarqueurs	PMID
Western blot	Cyclin D1 / CDK2 / CDK4 / CDK 6 / Cyclin E G9a / H3K9me2 Atg7 / Atg5 / Atg5-Atg12 / Atg3 / Atg12 / LC3B	25198515
Immunofluorescence	Ran / H3K9me3	30565836
Growth inhibition assay	Cell viability	26013382