Zotarolimus (ABT-578)

Zotarolimus (ABT-578) è un analogo semisintetico della rapamicina, ottenuto sostituendo un anello tetrazolico al gruppo idrossilico nativo in posizione 42 nella rapamicina. Questo composto è altamente efficace nell'inibire la proliferazione sia delle cellule muscolari lisce che delle cellule endoteliali, con valori di IC50 di 2,9 nM e 2,6 nM, rispettivamente. [1] È meccanicamente simile al sirolimus, avendo un legame ad alta affinità con l'immunofilina FKBP12 e una potenza comparabile per l'inibizione della proliferazione in vitro di cellule T umane e di ratto. Zotarolimus inibisce la proliferazione di cellule T umane e di ratto indotta da Con A con IC50 di 7,0 nM e 1337 nM rispettivamente. [2]

Zotarolimus (ABT-578) riduce efficacemente la formazione di neointima in un modello suino ben caratterizzato di restenosi dell'arteria coronarica di 28 giorni. Sembra efficace nel prevenire l'ispessimento neointimale, riducendo la perdita tardiva da 1,03 a 0,62 mm con una riduzione del 47% del TVF rispetto agli stent a metallo nudo (dal 15,4% con lo stent Driver all'8,1% con lo stent Endeavor). [1] Questo composto è efficace nel sopprimere DTH adiuvante, EAE e rigetto di allotrapianto cardiaco con valori ED50 rispettivamente di 1,72, 1,17 e 3,71 mg/kg/giorno. [2]

• Affinità di legame a FKBP12

  Le piastre per microtitolazione a 96 pozzetti vengono prima rivestite con la proteina di fusione FKBP-12 CMP-KDO sintetasi a 10 μg/mL, 100 μL/pozzetto per 2-3 ore, seguita dall'aggiunta di 50 μL/pozzetto di tampone A (2% BSA e 0,2% Tween-20 in D-PBS) per 30-60 min. Le piastre per microtitolazione vengono quindi lavate tre volte con tampone B (0,2% Tween in D-PBS, pH aggiustato a 7,4). Cinquanta microlitri di tampone A (per il massimo), 20 μM di FK506 in tampone A (per il fondo), o varie concentrazioni di Zotarolimus (ABT-578) (10 pM-1 μM) in tampone A vengono aggiunti a ciascun pozzetto, seguiti dall'aggiunta di 50 μL di A-79397 (un analogo di FK506)-coniugato con fosfatasi alcalina in tampone A. Le piastre per microtitolazione vengono incubate a temperatura ambiente per 2-2,5 ore, seguite da tre lavaggi con tampone B. Circa 100 μL di pNPP (p-nitrofenil-fosfato) in 0,1 M di amminometilpropanolo vengono aggiunti a ciascun pozzetto e le piastre vengono incubate a temperatura ambiente per 90-120 min. L'assorbanza a 405 nM viene letta utilizzando una piastra ELISA

• Linee cellulari

  Human coronary artery cells

• Concentrazioni

  ~1 μM

• Tempo di incubazione

  5 days

• Metodo

  Cell proliferation is assayed by measuring tritiated thymidine incorporation in vitro. Human coronary artery cells (hCa) are seeded into tissue culture flasks for expansion and applied to 96-well plates at desired density in complete media (5000 hCaSMC; 10 000 hCaEC). After 2 days, complete media is replaced with incomplete media to synchronize cells and induce G0 state. Two days later, incomplete media are removed and replaced with complete media (serum/growth factors) to induce G0 to G1 transition. Complete media also contain Zotarolimus (ABT-578) at desired concentrations to determine its effects on cell proliferation. On day 7, ³H-thymidine is added to cells to monitor DNA synthesis, and cells are harvested after overnight incorporation of radioactivity. After an incubation period of 72 h, 25 μL (1 μCi/well) of ³H-thymidine are added to each well. The cells are incubated at 37°C for 16-18 h to allow for incorporation of ³H-thymidine into newly synthesized DNA and the cells harvested onto 96-well plates containing bonded glass fibre filters . The filter plates are air-dried overnight, MicroScint-20 (25 μL) added to each filter well and counted. Drug activity is determined by the inhibition of ³H-thymidine incorporation into newly synthesized DNA relative to cells grown in complete media.

• Modelli animali

  Male Sprague-Dawley rats

• Dosaggi

  2.5 mg/kg

• Somministrazione

  intravenous or oral