WZ4003

N. catalogoS7317 Lotto:S731701

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Dati tecnici

Formula

C25H29ClN6O3
Peso molecolare 496.99 Numero CAS 1214265-58-3
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 10 mg/mL (20.12 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 0.350mg/ml (0.70mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 7 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 0.350mg/ml (0.70mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 7 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione WZ4003 è un inibitore altamente specifico della NUAK chinasi con un IC50 di 20 nM e 100 nM per NUAK1 e NUAK2 in saggi cellulari, rispettivamente, senza inibizione significativa su altre 139 chinasi.
Target
NUAK1
(Cell-free assay)		 NUAK2
(Cell-free assay)
20 nM 100 nM
In vitro Nelle cellule HEK-293 che esprimono NUAK1 wild-type, WZ4003 (3–10 μM) sopprime marcatamente la fosforilazione di MYPT1 mediata da NUAK1. Inoltre, questo composto (10 μM) inibisce la fosforilazione di MYPT1 Ser445, nonché la migrazione, l'invasione e la proliferazione cellulare in misura simile al knock out in MEF o al knock down nelle cellule U2OS di NUAK1. Esibisce anche un'alta, specifica affinità per il mutante L858R/T790M dell'EGFR, mentre un IC50 cellulare significativamente ridotto è stato osservato contro le cellule Ba/F3 contenenti T790M.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:[1]
  • Determinazione dell'IC50

    Gli enzimi attivi GST–NUAK1, GST–NUAK1[A195T] e GST–NUAK2 vengono purificati usando glutatione–Sepharose da lisati cellulari di HEK-293 36–48 ore dopo la transfezione transitoria di costrutti mammiferi pEBG2T che esprimono NUAK1, NUAK1[A195T] o NUAK2 N-terminale marcati con GST. Per i saggi di chinasi peptidica, vengono utilizzate piastre a 96 pozzetti e ogni reazione viene eseguita in triplicato. Ogni reazione è impostata in un volume totale di 50 μL contenente 100 ng di NUAK1 (wild-type o mutante A195T) o NUAK2 in 50 mM Tris/HCl (pH 7,5), 0,1 mM EGTA, 10 mM magnesio acetato, 200 μM Sakamototide, 0,1 mM [γ -32P]ATP (450–500 c.p.m./pmol) e le concentrazioni indicate di inibitori disciolti in DMSO. Dopo incubazione per 30 min a 30°C, le reazioni vengono terminate aggiungendo 25 mM (finale) di EDTA per chelare il magnesio. Quindi, 40 μL del mix di reazione vengono spotati su carta P81 e immersi in acido ortofosforico 50 mM. I campioni vengono lavati tre volte in acido ortofosforico 50 mM seguiti da un singolo risciacquo con acetone e asciugatura all'aria. L'incorporazione di [γ -32P]ATP nel Sakamototide viene quantificata mediante conteggio Cerenkov. I valori sono espressi come percentuale del controllo DMSO. Le curve IC50 vengono sviluppate e i valori IC50 vengono calcolati utilizzando il software GraphPad Prism.
Saggio cellulare:[1]
  • Linee cellulari

    U2OS cells, and MEFs

  • Concentrazioni

    ~10 μM

  • Tempo di incubazione

    5 days

  • Metodo

    Cell proliferation assays are carried out colorimetrically in 96-well plates using the CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay kit following the manufacturer’s protocol. Initially, 2000 cells per well are seeded for U2OS cells and 3000 cells per well are seeded for MEFs. The proliferation assays are carried out over 5 days in the presence or absence of 10 μM this compound.

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24171924/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20033049/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>The AMPK inhibitor, WZ4003, and the p38 MAPK inhibitor, SB203580, could inhibit the APN-induced overexpression of CXCL1 and CXCL8 and h-JBMMSCs chemotaxis. After treated with WZ4003 and SB203580, the expression of CXCL1 (A and B) and CXCL8 (C and D) in the cells and supernatants of h-JBMMSCs treated with or without APN was evaluated by the ELISA assay (n = 3; *P < 0.05; **P < 0.01)</p>

, , J Cell Mol Med, 2017, 21(7):1411-1419

Indicated cells were treated with LPS (200 ng/ml) in the absence or presence of indicated AMPK activators (AICAR [100 μM] and A-769662 [2 μM]) or inhibitors (compound C [200 nM] and WZ4003 [100 nM]) for 24 hours. OCR and ECAR were monitored (n=3, *p < 0.05 versus single LPS group).

Dati da [ , , Brain Behav Immun, 2018, 72:89-100 ]

Sellecks WZ4003 È stato citato da 15 Pubblicazioni

NUAK1 activates STAT5/GLI1/SOX2 signaling to enhance cancer cell expansion and drives chemoresistance in gastric cancer [ Cell Rep, 2024, 43(7):114446] PubMed: 38996065
The Roles and Regulatory Mechanisms of Tight Junction Protein Cingulin and Transcription Factor Forkhead Box Protein O1 in Human Lung [ Int J Mol Sci, 2024, 25(3):1411.] PubMed: 38338691
The Roles and Regulatory Mechanisms of Tight Junction Protein Cingulin and Transcription Factor Forkhead Box Protein O1 in Human Lung Adenocarcinoma A549 Cells and Normal Lung Epithelial Cells [ Int J Mol Sci, 2024, 25(3)1411] PubMed: 38338691
Localized Inhibition of Protein Phosphatase 1 by NUAK1 Promotes Spliceosome Activity and Reveals a MYC-Sensitive Feedback Control of Transcription. [ Mol Cell, 2020, 77(6):1322-1339] PubMed: 32006464
Dual targeting of NUAK1 and ULK1 using the multitargeted inhibitor MRT68921 exerts potent antitumor activities [ Cell Death Dis, 2020, 11(8):712] PubMed: 32873786
Microglia-Derived Extracellular Vesicles Carrying miR-711 Alleviate Neurodegeneration in a Murine Alzheimer's Disease Model by Binding to Itpkb [ Front Cell Dev Biol, 2020, 8:566530] PubMed: 33240878
Safflor yellow A protects vascular endothelial cells from ox-LDL-mediated damage [ J Recept Signal Transduct Res, 2020, 1-8] PubMed: 33167774
WZ4003 sensitizes non-small cell lung cancer cells to gefitinib via inhibition of ARK5 and epithelial-to-mesenchymal transition [ Am J Transl Res, 2020, 12(11):7377-7385] PubMed: 33312374
Endothelial HNF4α potentiates angiogenic dysfunction via enhancement of vascular endothelial growth factor resistance in T2DM. [ J Cell Biochem, 2019, 120(8):12989-13000] PubMed: 30873661
An Ancient Chinese Herbal Decoction Containing Angelicae Sinensis Radix, Astragali Radix, Jujuba Fructus, and Zingiberis Rhizoma Recens Stimulates the Browning Conversion of White Adipocyte in Cultured 3T3-L1 Cells. [ Evid Based Complement Alternat Med, 2019, 2019:3648685] PubMed: 31316571

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