WAY-600

N. catalogoS2689 Lotto:S268901

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Dati tecnici

Formula

C₂₈H₃₀N₈O

Peso molecolare

494.59

Numero CAS

1062159-35-6

Solubilità (25°C)*

In vitro

DMSO

22 mg/mL (44.48 mM)

Ethanol

2 mg/mL (4.04 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	1.100mg/ml (2.22mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 22 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.	0.180mg/ml (0.36mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 3.6 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

WAY-600 è un inibitore potente, ATP-competitivo e selettivo di mTOR con un IC50 di 9 nM; questo composto blocca mTORC1/P-S6K(T389) e mTORC2/P-AKT(S473) ma non P-AKT(T308); è selettivo per mTOR rispetto a PI3Kα (>100 volte) e PI3Kγ (>500 volte).

Target

mTOR

9 nM

In vitro

Il saggio della chinasi in immunocomplessi mostra che il substrato specifico di mTORC2 His6-AKT o il substrato di mTORC1 His6-S6K sono inibiti in modo dose-dipendente da WAY-600. Questo composto inibisce globalmente la segnalazione di mTOR e la funzione di AKT in modelli cellulari in modo dose-dipendente. Inibisce profondamente la sintesi proteica cap-dipendente e globale nelle cellule di cancro al seno umano MDA361. Questa sostanza chimica mostra effetti antiproliferativi in varie linee cellulari tumorali che coinvolgono l'arresto del ciclo cellulare in fase G1 e l'apoptosi selettiva. Down-regola i fattori angiogenici, VEGF e HIF-1α, nelle cellule U87MG, MDA361 e LNCap.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[1]}	Formato DELFIA di FLAG-TOR purificato I saggi di routine con FLAG-TOR purificato (FL e 3.5) vengono eseguiti in piastre a 96 pozzetti come segue. Gli enzimi vengono prima diluiti nel tampone di saggio della chinasi (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glicerofosfato, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 lM microcistina LR e 100 lg/mL BSA). Ad ogni pozzetto, 12 μL dell'enzima diluito vengono miscelati brevemente con 0.5 μL di inibitore di prova o veicolo di controllo dimetilsolfossido (DMSO). La reazione della chinasi viene avviata aggiungendo 12.5 μL di tampone di saggio della chinasi contenente ATP e His6-S6K per ottenere un volume di reazione finale di 25 μL contenente 800 ng/mL di FLAG-TOR, 100 μM di ATP e 1.25 μM di His6-S6K. La piastra di reazione viene incubata per 2 ore (lineare da 1 a 6 ore) a temperatura ambiente con agitazione delicata e quindi terminata aggiungendo 25 μL di tampone di arresto (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA e 20 mM EGTA). La rilevazione DELFIA dell'His6-S6K fosforilato (Thr-389) viene eseguita a temperatura ambiente utilizzando un anticorpo monoclonale anti-P(T389)-p70S6K (1A5) marcato con Europio-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu per anticorpo). Quarantacinque microlitri della miscela di reazione della chinasi terminata vengono trasferiti in una piastra MaxiSorp contenente 55 μL di PBS. L'His6-S6K viene lasciato aderire per 2 ore, dopodiché i pozzetti vengono aspirati e lavati una volta con PBS. Vengono aggiunti cento microlitri di tampone DELFIA con 40 ng/mL di anticorpo Eu-P(T389)-S6K. Il legame dell'anticorpo viene continuato per 1 ora con agitazione delicata. I pozzetti vengono quindi aspirati e lavati quattro volte con PBS contenente 0.05% di Tween 20 (PBST). Vengono aggiunti cento microlitri di soluzione di potenziamento DELFIA a ciascun pozzetto e le piastre vengono lette in un lettore di piastre PerkinElmer modello Victor. I dati ottenuti vengono utilizzati per calcolare l'attività enzimatica e l'inibizione enzimatica da parte di potenziali inibitori.
Saggio cellulare:^{^[1]}	Linee cellulari MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells Concentrazioni 0-100 μM Tempo di incubazione 24 or 48 hours Metodo For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Saggio della chinasi:^{^[1]}

Formato DELFIA di FLAG-TOR purificato
I saggi di routine con FLAG-TOR purificato (FL e 3.5) vengono eseguiti in piastre a 96 pozzetti come segue. Gli enzimi vengono prima diluiti nel tampone di saggio della chinasi (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glicerofosfato, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 lM microcistina LR e 100 lg/mL BSA). Ad ogni pozzetto, 12 μL dell'enzima diluito vengono miscelati brevemente con 0.5 μL di inibitore di prova o veicolo di controllo dimetilsolfossido (DMSO). La reazione della chinasi viene avviata aggiungendo 12.5 μL di tampone di saggio della chinasi contenente ATP e His6-S6K per ottenere un volume di reazione finale di 25 μL contenente 800 ng/mL di FLAG-TOR, 100 μM di ATP e 1.25 μM di His6-S6K. La piastra di reazione viene incubata per 2 ore (lineare da 1 a 6 ore) a temperatura ambiente con agitazione delicata e quindi terminata aggiungendo 25 μL di tampone di arresto (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA e 20 mM EGTA). La rilevazione DELFIA dell'His6-S6K fosforilato (Thr-389) viene eseguita a temperatura ambiente utilizzando un anticorpo monoclonale anti-P(T389)-p70S6K (1A5) marcato con Europio-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu per anticorpo). Quarantacinque microlitri della miscela di reazione della chinasi terminata vengono trasferiti in una piastra MaxiSorp contenente 55 μL di PBS. L'His6-S6K viene lasciato aderire per 2 ore, dopodiché i pozzetti vengono aspirati e lavati una volta con PBS. Vengono aggiunti cento microlitri di tampone DELFIA con 40 ng/mL di anticorpo Eu-P(T389)-S6K. Il legame dell'anticorpo viene continuato per 1 ora con agitazione delicata. I pozzetti vengono quindi aspirati e lavati quattro volte con PBS contenente 0.05% di Tween 20 (PBST). Vengono aggiunti cento microlitri di soluzione di potenziamento DELFIA a ciascun pozzetto e le piastre vengono lette in un lettore di piastre PerkinElmer modello Victor. I dati ottenuti vengono utilizzati per calcolare l'attività enzimatica e l'inibizione enzimatica da parte di potenziali inibitori.

Saggio cellulare:^{^[1]}

Linee cellulari
MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells
Concentrazioni
0-100 μM
Tempo di incubazione
24 or 48 hours
Metodo
For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Riferimenti

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=WYE-687

Convalida del prodotto da parte del cliente

: Dati da [ , , Biochem Biophys Res Commun, 2016, 474(2):330-7. ]

Sellecks WAY-600 È stato citato da 3 Pubblicazioni

Disruption of FOXO3a-miRNA feedback inhibition of IGF2/IGF-1R/IRS1 signaling confers Herceptin resistance in HER2-positive breast cancer [ Nat Commun, 2021, 12(1):2699]	PubMed: 33976188
A Regulatory Circuit Orchestrated by Novel-miR-3880 Modulates Mammary Gland Development [ Front Cell Dev Biol, 2020, 8:383]	PubMed: 32656203
MEK-ERK inhibition potentiates WAY-600-induced anti-cancer efficiency in preclinical hepatocellular carcinoma (HCC) models [Wang K, et al. Biochem Biophys Res Commun, 2016, 474(2):330-7]	PubMed: 27107695

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