Vorinostat (SAHA)

Vorinostat (SAHA) inibisce le attività di HDAC1 e HDAC3 con IC50 di 10 nM e 20 nM, rispettivamente, e provoca anche una marcata iperacetilazione dell'istone H4. [1] Questo composto inibisce la crescita di tre linee cellulari di cancro alla prostata LNCaP, PC-3 e TSU-Pr1 a concentrazioni micromolari (2,5-7,5 μM) e induce la morte cellulare dose-dipendente nelle cellule LNCaP. [2] Il suo trattamento nelle cellule MCF-7 inibisce la proliferazione cellulare con un IC50 di 0,75 μM, con conseguente accumulo di cellule nelle fasi G1 e G2-M del ciclo cellulare. Induce anche la differenziazione nella linea cellulare SKBr-3 negativa al recettore degli estrogeni e nella linea cellulare MDA-468 negativa al retinoblastoma. [3] Il trattamento con questo composto a 1 μM per 8 ore o più è sufficiente per indurre irreversibilmente l'apoptosi delle cellule di mieloma multiplo (MM) umano. I profili di espressione genica delle cellule MM trattate con Vorinostat non sono caratterizzati da un'attivazione trascrizionale globale, ma da cambiamenti trascrizionali coordinati di specifici gruppi funzionali di geni come le cascate di segnalazione proliferativa/di sopravvivenza indotte dalle citochine, oncogeni-geni oncosoppressori, regolatori dell'apoptosi, sintesi-riparazione del DNA e ciclo cellulare, e funzione proteasoma-ubiquitina. [4]

L'amministrazione di Vorinostat (SAHA) (~100 mg/kg/die) inibisce significativamente la crescita degli xenotrapianti di prostata umana CWR22 in topi nudi con riduzioni tumorali del 78%, 97% e 97%, a dosi rispettivamente di 25 mg/kg/die, 50 mg/kg/die e 100 mg/kg/die, rispetto al controllo. Questo composto induce l'accumulo di istoni core acetilati e l'espressione dell'mRNA dell'antigene prostatico specifico nelle cellule CWR22, con conseguenti livelli sierici di antigene prostatico specifico più elevati di quanto previsto dal solo volume tumorale. [2] L'amministrazione orale di esso (0,67 g/L) attraversa la barriera emato-encefalica, aumenta l'acetilazione istonica nel cervello e migliora drasticamente il deterioramento motorio nel modello murino R6/2 della malattia di Huntington. [5]

• Saggi di Immunoprecipitazione-HDAC

  Il lisato di cellule Jurkat viene incubato per 1 ora su ghiaccio e chiarificato mediante centrifugazione a 12.000 g per 10 minuti a 4 °C. I surnatanti vengono pre-chiarificati con 30 μL di sospensione di proteina G-Sepharose al 50% per 1 ora a 4 °C. Le perle vengono centrifugate e i surnatanti vengono incubati per 1 ora a 4 °C con 10 μg di frazione IgG da antisieri policlonali anti-HDAC1 o HDAC3 (pre-incubati 2 ore a temperatura ambiente con il peptide immunizzante omologo o eterologo). Entrambi gli antisieri sono prodotti in conigli contro il peptide carbossiterminale di HDAC1 e HDAC3 utilizzando peptidi sintetici accoppiati a emocianina di limacina chiave. Vengono aggiunti 30 μL di sospensione di proteina G-Sepharose al 50% per 1 ora a 4 °C. I complessi immuni vengono centrifugati e lavati tre volte con 1 mL di tampone di lisi. Le perle vengono risospese in 200 μL di tampone HDAC (20 mM Tris-HCl, pH 8,0/150 mM NaCl/10% glicerolo) e il saggio HDAC viene eseguito con un peptide ³H-acetilato corrispondente agli amminoacidi 1-24 dell'istone H4. L'acido [³H]acetico rilasciato viene quantificato mediante conteggio a scintillazione. Per gli studi di inibizione, i complessi immunoprecipitati vengono pre-incubati con le diverse concentrazioni di Vorinostat (SAHA) per 30 minuti a 4 °C.

• Linee cellulari

  LNCaP, PC-3, and TSU-Pr1

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~7.5 μM

• Tempo di incubazione

  1, 2, 3 and 4 days

• Metodo

  Vorinostat (SAHA) is exposed to cells at various concentrations for 1, 2, 3 and 4 days. Cell viability is assessed by trypan blue dye exclusion.

• Modelli animali

  Male BALB/c nude (nu/nu) mice implanted with CWR22 tumor cells

• Dosaggi

  25, 50, and 100 mg/kg/day

• Somministrazione

  Injection i.p.