Vismodegib (GDC-0449)

Vismodegib (GDC-0449) ha come bersaglio la via di segnalazione Hedgehog, bloccando le attività dei recettori di superficie cellulare PTCH e/o SMO del ligando Hedgehog e sopprimendo la segnalazione Hedgehog. Questo composto previene numerosi trasportatori ABC (ATP-binding cassette) e blocca anche ABCG2, Pgp e MRP1, importanti trasportatori ABC associati alla MDR. È un potente inibitore dei trasportatori ABC, ABCG2/BCRP e ABCB1/Pgp, ed è un lieve inibitore di ABCC1/MRP1. Nelle cellule HEK293 che sovraesprimono ABCG2, aumenta la ritenzione del substrato fluorescente BODIPY di ABCG2 e resensibilizza queste cellule. Nelle cellule renali canine Madin-Darby II ingegnerizzate per sovraesprimere Pgp o MRP1, aumenta la ritenzione di calceina-AM e le resensibilizza. Resensibilizza anche le cellule di carcinoma polmonare non a piccole cellule umane NCI-H460/par e NCI-H460/MX20, che sovraesprimono ABCG2 in risposta a SN-38. I valori di IC50 per la prevenzione di ABCG2 e Pgp sono rispettivamente di circa 1,4 μM e 3,0 μM. [2] Inoltre, altera l'omeostasi intracellulare del Ca²⁺ e inibisce la crescita cellulare nelle cellule di cancro al polmone resistenti. [3]

Vismodegib (GDC-0449) è stato utilizzato per trattare il medulloblastoma in modelli animali. [2] Previene la crescita di xenotrapianti pancreatici primari senza inibire in modo non specifico la proliferazione delle cellule pancreatiche. La somministrazione orale di questo composto provoca regressioni tumorali nel modello di allotrapianto di medulloblastoma Ptch(+/-) a dosi ≥25 mg/kg e inibizione della crescita tumorale a dosi fino a 92 mg/kg somministrate due volte al giorno in due modelli di cancro colorettale ligando-dipendenti, D5123 e 1040830. L'analisi dell'attività della via Hh e la modellizzazione PK/PD rivelano che inibisce Gli1 con un IC50 simile sia nei modelli di medulloblastoma che di D5123 (rispettivamente 0,165 μM e 0,267 μM). La modulazione della via è collegata all'efficacia utilizzando un modello PK/PD integrato che rivela una relazione ripida in cui > 50% dell'attività di GDC-0449 è associata a > 80% di repressione della via Hh. [4]

• Linee cellulari

  MDCKII cells

• Concentrazioni

  20 μM

• Tempo di incubazione

  2 hours

• Metodo

  MDCKII cells are seeded into 24-well plates at a density of 3 × 10⁵ cells per well and are allowed to attach. Medium is then changed to that containing different drugs (50 μM VP, or 20 μM Vismodegib (GDC-0449) in DMSO or DMSO alone as control, and nonfluorescent calcein-AM is added to a final concentration of 1.0 μM and incubated at 37 °C for 2 hours. It is then used in subsequent steps. Cells are washed twice with Ca²⁺, Mg²⁺-containing Hank's balanced salt solution buffer and lysed by shaking in 0.01% Triton X-100 in PBS buffer for 1 hour at room temperature or overnight at 4 °C. The lysate is then transferred into 96-well plates, and the fluorescence signal caused by the cell-derived calcein is quantified spectrophotometrically with a SpectraMax M5 Multi-Detection Readerusing an excitation wavelength of 495 nm and an emission wavelength of 515 nm. All manipulations are performed in the dark. All readings are expressed as mean ?SEM normalized to the control.

• Modelli animali

  Ptch(+/-) allograft model, D5123 and 1040830

• Dosaggi

  ~ 100 mg/kg

• Somministrazione

  Orally