PLX4032 (Vemurafenib)

N. catalogoS1267 Lotto:S126716

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Dati tecnici

Formula

C23H18ClF2N3O3S
Peso molecolare 489.92 Numero CAS 918504-65-1
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 98 mg/mL (200.03 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
4%DMSO 30%PEG300 5%Tween80 61%ddH2O

Convalidato dai laboratori Selleck. Se sono necessarie modifiche a questa formulazione, contattare il nostro team di vendita per test personalizzati.

 1.250mg/ml (2.55mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 40 μL of 31.25 mg/ml clarified DMSO stock solution to 300 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 610 μL of ddH2O to make it clear. Volume up to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Vemurafenib (PLX4032, RG7204, RO5185426) è un nuovo e potente inibitore di B-RafV600E con IC50 di 31 nM in saggio senza cellule. Selettivo 10 volte per B-RafV600E rispetto al B-Raf wild-type in saggi enzimatici e la selettività cellulare può superare le 100 volte. Vemurafenib (PLX4032, RG7204) induce l'Autophagy.
Target
SRMS
(Cell-free assay)		 ACK1
(Cell-free assay)		 B-Raf (V600E)
(Cell-free assay)		 C-Raf
(Cell-free assay)		 MAP4K5 (KHS1)
(Cell-free assay)		 Visualizza altro
18 nM 19 nM 31 nM 48 nM 51 nM
In vitro Vemurafenib (PLX4032) inibisce B-RAFV600E, C-RAF, così come B-RAF wildtype, con IC50 di 31 nM, 48 nM e 100 nM, rispettivamente. Questo composto inibisce anche diverse chinasi non-RAF, tra cui ACK1, KHS1 e SRMS, con IC50 da 18 nM a 51 nM. Nelle linee cellulari di melanoma, l'effetto inibitorio dipende dallo stato mutazionale di B-RAF, poiché inibisce potentemente quelle che ospitano mutanti B-RAF V600, inclusi V600E, V600D, V600K e V600R, ma non il tipo wildtype o altri mutanti. I valori di IC50 su queste cellule, inclusi MALME-3M, Colo829, Colo38, A375, SK-MEL28 e A2058, vanno da 20 nM a 1 μM. In queste cellule, Vemurafenib (da 0,1 μM a 30 μM) inibisce anche la fosforilazione sia di MEK1/2 che di ERK1/2. È altamente efficace nel trattamento del melanoma, per la sua capacità di inibire B-RAFV600E. Tuttavia, questo composto mostra un effetto limitato nei pazienti con cancro del colon che portano anche l'oncoproteina B-RAFV600E. La ragione di ciò è che, nelle cellule di cancro del colon, l'inibizione di B-RAFV600E da parte di esso si traduce in una rapida attivazione di feedback dell'EGFR, che compensa la proliferazione cellulare inibita da PLX4032.
In vivo In modelli di xenotrapianto di topi mutanti B-RAFV600E, Vemurafenib (PLX4032) (6 mg/kg–20 mg/kg) inibisce la crescita tumorale. In modelli di xenotrapianto di topi con cellule LOX, Colo829 e A375, questo composto (12,5 mg/kg–100 mg/kg) inibisce la crescita tumorale e prolunga la sopravvivenza dei topi.
Caratteristiche Un nuovo e potente inibitore dell'oncoproteina B-RAFV600E.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Misurazioni dell'attività chinasica di RAF

    Le attività chinasiche di RAF wild-type e mutanti sono determinate misurando la fosforilazione della proteina BAD biotinilata in presenza di Vemurafenib (PLX4032). Per ogni enzima (0,01 ng), vengono eseguite reazioni da 20 μL in 20 mM Hepes (pH 7,0), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0,01% (v/v) Tween-20, 50 nM di proteina biotina-BAD e 1 mM di ATP a temperatura ambiente. Le reazioni vengono interrotte a 5 minuti con 5 μL di una soluzione contenente 20 mM Hepes (pH 7,0), 200 mM NaCl, 80 mM EDTA, 0,3% (p/v) di albumina sierica bovina (BSA). La soluzione di arresto include anche anticorpi anti-fosfo-BAD (Ser112), perline donatrici rivestite di streptavidina e perline accettrici di proteina A. L'anticorpo e le perline vengono pre-incubati nella soluzione di arresto al buio a temperatura ambiente per 30 minuti. La diluizione finale dell'anticorpo è 1/2000 e la concentrazione finale di ogni perlina è 10 μg/mL. Le piastre del saggio vengono incubate a temperatura ambiente per un'ora e poi lette su un lettore PerkinElmer AlphaQuest. Le attività mutanti sono la media di due diversi lotti di proteine purificate saggiate in duplicato in tre diversi esperimenti.
Saggio cellulare:

[2]
  • Linee cellulari

    MALME-3M, Colo829, Colo38, A375, SK-MEL28, and A2058 cells

  • Concentrazioni

    0–10 μM , dissolved in DMSO

  • Tempo di incubazione

    5 days

  • Metodo

    Cellular proliferation is evaluated by MTT assay. Briefly, cells are plated in 96-well microtiter plates at a density of 1000 to 5000 cells per well in a volume of 180 μL. Vemurafenib (PLX4032) is prepared at 10 times the final assay concentration in media containing 1% DMSO. Twenty-four hours after cell plating, 20 μL of the appropriate dilution of this compound are added to plates in duplicate. The plates are assayed for proliferation 6 days after the cells are plated. Percent inhibition is calculated and the IC50 is determined from the regression of a plot of the logarithm of the concentration versus percent inhibition.
Studio sugli animali:

[2]
  • Modelli animali

    Mice (athymic nude) xenograft models of LOX, Colo829, and A375 cells

  • Dosaggi

    12.5 mg/kg–100 mg/kg

  • Somministrazione

    Oral gavage twice daily

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20823850/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20551065/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22281684/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15808862/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22180495/

Convalida del prodotto da parte del cliente

The regressing tumour microenvironment stimulates the outgrowth, infiltration and metastasis of drug-resistant clones. b, Bioluminescent signal of drug-resistant A375RTGL cells in vemurafenib-sensitive, A375 tumours, treated with vehicle or vemurafenib for 5 days (vehicle, n = 36; vemurafenib, n = 15 tumours). D, day. c, EdU incorporation in A375R-TGL cells in A375/A375R-TGL tumours treated with vehicle or vemurafenib for 4 days, as determined by FACS (vehicle, n = 8; vemurafenib, n = 6 tumours). d, Bioluminescent signal of A375R-TGL tumours alone, treated with vehicle or vemurafenib for 5 days (vehicle, n 5 38; vemurafenib, n = 15 tumours). e, Bioluminescent signal of TGLexpressing drug-resistant cancer cells (A375R, M249R4, PC9 and H2030) in drug-sensitive tumours (Colo800, LOX, UACC62, M249, H3122 and HCC827) treated with vehicle or drugs (vemurafenib, crizotinib and erlotinib) for 5 days (n (from left to right on the graph) = 6, 7, 12, 12, 9, 9, 25, 26, 9, 12, 12, 12, 16 and 11 tumours). f, Spontaneous lung metastasis by A375R cells in mice bearing A375/A375R-TGL tumours treated with vehicle or vemurafenib (10 days), visualized by BLI (n = 4).

Dati da [ Nature , 2015 , 520(7547), 368-72 ]

FRA1 downregulation during RAFi treatment drives the reactive secretome. c, Relative mRNA levels of FRA1 during vemurafenib exposure [0.1-1 uM]. d, Representative immunofluorescence staining of A375/A375R tumours for GFP (A375R, green) and FRA1 (red) after vehicle or vemurafenib treatment (5 days). DAPI, 49,6-diamidino-2-phenylindole. Scale bars, 50 um.

Dati da [ Nature , 2015 , 520(7547), 368-72 ]

The B-Raf inhibitor PLX4032 decreases cell surface DR5 levels . BCPAP cells were treated with the indicated concentrations of PLX4032 for 12 h and then harvested for extraction of cellular total RNA and subsequent RT-PCR to detection of DR5.

Dati da [ Oncogene , 2015 , 10.1038/onc.2015.97 ]

Acquired EGFR expression in BRAF(V600E) mutant melanoma after vemurafenib resistance. Immunohistochemical (IHC) analysis (ultraView DAB stain, brown) showing increased EGFR expression in formalin-fixed paraffin embedded (FFPE) (Patient number 1-5) and frozen (Patient number 6) melanoma tissue sections from BRAF(V600E) mutant melanoma patients who developed resistance to vemurafenib, dabrafenib or trametinib as indicated. For each patient, the first biopsy is from the pre-treatment tumour; the second biopsy was performed after the tumour had progressed under treatment. For patient number 4, the first biopsy was performed when the patient was in partial response, but rapidly developed secondary resistance. Then 4.5 months later, the second biopsy was taken.

Dati da [ Nature , 2014 , 508(7494), 118-22 ]

Sellecks PLX4032 (Vemurafenib) È stato citato da 714 Pubblicazioni

Pan-inhibition of super-enhancer-driven oncogenic transcription by next-generation synthetic ecteinascidins yields potent anti-cancer activity [ Nat Commun, 2025, 16(1):512] PubMed: 39779693
Blocking interplay between TERT and c-Myc: a new therapeutic strategy for BRAFV600E/pTERT double mutated tumors [ Int J Biol Sci, 2025, 21(11):4961-4978] PubMed: 40860184
Downregulated ALDH2 Contributes to Tumor Progression and Targeted Therapy Resistance in Human Metastatic Melanoma Cells [ Cells, 2025, 14(12)913] PubMed: 40558540
Inter-Relationship Between Melanoma Vemurafenib Tolerance Thresholds and Metabolic Pathway Choice [ Cells, 2025, 14(12)923] PubMed: 40558548
Exploiting Paradoxical Activation of Oncogenic MAPK Signaling by Targeting Mitochondria to Sensitize NRAS Mutant-Melanoma to Vemurafenib [ Int J Mol Sci, 2025, 26(6)2675] PubMed: 40141318
Acquired resistance to vemurafenib restrains thyroid cancer stem cell self-renewal by suppressing STAT3 activation [ Cell Signal, 2025, 133:111845] PubMed: 40345509
Dihydrotanshinone I enhanced BRAF mutant melanoma treatment efficacy by inhibiting the STAT3/SOX2 signaling pathway [ Front Oncol, 2025, 15:1429018] PubMed: 39944829
Suppression of Sebum Production by Vemurafenib Through Paradoxical ERK Activation Resulted in the Inhibition of the mTOR Pathway in 5α-Dihydrotestosterone-Differentiated Hamster Sebocytes In Vitro [ Exp Dermatol, 2025, 34(8):e70150] PubMed: 40817681
Selective inhibition of p300 by a novel small molecule EPS496 promotes cell death in vemurafenib-resistant BRAFV600E mutated melanoma cells [ Biochem Biophys Res Commun, 2025, 750:151382] PubMed: 39884005
Increased Mitochondrial Superoxide Level Is Partially Associated With Vemurafenib-Induced Renal Tubular Toxicity [ Basic Clin Pharmacol Toxicol, 2025, 136(4):e70015] PubMed: 40018909

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