In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile. * Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto. * Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)
Preparazione delle soluzioni stock
Attività biologica
Descrizione
UNC0638 una sonda chimica potente, selettiva e cellulo-penetrante per la metiltransferasi istonica G9a e GLP con IC50 rispettivamente di <15 nM e 19 nM, mostrando selettivit su una vasta gamma di bersagli epigenetici e non epigenetici. Questo composto possiede attivit antivirali.
Target
G9a (Cell-free assay)
GLP (Cell-free assay)
<15 nM
19 nM
In vitro
UNC0638 una sonda chimica potente, selettiva e cellulo-penetrante per G9a e GLP, con un rapporto tossicit /funzione >100, rispetto a <6 per BIX01294. Questo composto un inibitore selettivo di G9a e GLP su una vasta gamma di bersagli epigenetici e non epigenetici. pi di 10.000 volte selettivo contro SET7/9 (una HMTasi H3K4), SET8 (una HMTasi H4K20), PRMT3 e SUV39H2. Nelle cellule MDA-MB-231, questa sostanza chimica (esposizione di 48 h) riduce i livelli di H3K9me2 in modo concentrazione-dipendente con una IC50 di 81 nM. Il suo trattamento di una variet di linee cellulari si traduce in livelli globali di H3K9me2 inferiori, equivalenti ai livelli osservati per il knockdown di G9a e GLP mediante small hairpin RNA, con la potenza funzionale di questo composto ben separata dalla sua tossicit . Riduce marcatamente la clonogenicit delle cellule MCF7, riduce l'abbondanza di marcatori H3K9me2 ai promotori di geni endogeni noti regolati da G9a e ha influenzato in modo sproporzionato diversi loci genomici che codificano per i microRNA. Nelle cellule staminali embrionali di topo, questa sonda riattiva i geni silenziati da G9a e un gene reporter retrovirale in modo concentrazione-dipendente senza promuovere la differenziazione.
In vivo
Negli studi di metabolismo e farmacocinetica del farmaco nei topi, UNC0638 ha mostrato un'elevata clearance, una breve emivita, un elevato volume di distribuzione e una bassa esposizione dopo somministrazione endovenosa, orale o intraperitoneale. Pertanto, sebbene questo composto probabilmente non sia adatto per studi in vivo su animali a causa dei bassi livelli di esposizione, la sua elevata stabilit in condizioni di saggio cellulare, in combinazione con l'elevata potenza e selettivit , lo rende uno strumento chimico ideale per studi basati su cellule.
Questo saggio utilizza SAHH per idrolizzare il prodotto di metiltransferasi S-adenosilomocisteina in omocisteina e adenosina in presenza di adenosina deaminasi che converte l'adenosina in inosina. La concentrazione di omocisteina viene quindi determinata mediante coniugazione del suo gruppo solfidrilico libero a un fluoroforo sensibile al tiolo, ThioGlo. Per le determinazioni di IC50, le miscele di saggio sono preparate in tampone fosfato di potassio 25 mM pH 7.5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl2, 0.01% Triton X 100 con 5 M SAHH, 0.3 U/mL di adenosina deaminasi, 25 M SAM e 15 M ThioGlo. G9a, EHMT1, SETD7, SETD8, PRMT3 e SUV39H2 sono saggiati a 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 1 M e 100 nM, rispettivamente. UNC0638 aggiunto a concentrazioni che vanno da 4 nM a 16 M. Dopo 2 minuti di incubazione, le reazioni sono avviate con l'aggiunta dei peptidi istonici: 10 M H3(1-25) per G9a, 20 M H3(1-25) per EHMT1, 100 M H3(1-25) per SETD7, 500 M H4(1-24) per SETD8, 10 M H4(1-24) per PRMT3 e 200 M H3K9Me1 (1-15) per SUV39H2. La reazione di metilazione seguita monitorando l'aumento della fluorescenza usando un lettore di piastre Biotek Synergy2 con filtro di eccitazione 360/40 nm e filtro di emissione 528/20 nm per 20 min in formato a 384 pozzetti. I valori di attivit sono corretti sottraendo il fondo causato dal peptide o dalla proteina. I valori di IC50 sono calcolati usando Sigmaplot. Le deviazioni standard sono calcolate da due esperimenti indipendenti.
Approximately 5×105 cells were plated onto 75 cm2 flasks. MCF7 and U2OS cells were grown in Minimal Essential Media (MEM) without phenol red supplemented with Earl's salts, 10% FBS, 1 mM Pyruvate, 2 mM Glutamine, and 1×non-essential amino acids. H1299 cells were grown in Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) with phenol red supplemented with 10% FBS and 1×Anti-Anti. At the time of cell plating, media was supplemented with 3 μM UNC638A or the equivalent DMSO vehicle. The media with 3 μM this compound but without any cells was also used as a control. All flasks were incubated at 37℃/5% CO2. After 65 hours, media was collected from the cells and centrifuged to remove any cell debris. The media (10 to 15 mL) from each of study groups was mixed with HPLC grade chloroform (7 to 12 mL). After the mixture was gently shaken, it was allowed to sit until the organic layer and the aqueous layer separated. The organic layer was collected, dried over anhydrous Na2SO4, and concentrated in vacuo. The resulting residue was dissolved in 100 μL of methanol and the solution was analyzed using an Agilent 6110 LC/MS Series system with UV detector set to at 254 nm. Samples were injected (10 μL) onto a Phenomenex Kinetex 2.1 x 100 nm, 2.6 μM, C18 column at room temperature and eluted with 72% B (MeCN) with A being H2O + 0.1% formic acid. The flow rate was 0.3 mL/min. No degradation products of this chemical were observed for any of treatment groups.
Coordinated repression of totipotency-associated gene loci by histone methyltransferase EHMT2 through binding to LINE-1 regulatory elements
[ bioRxiv, 2024, 2024.12.18.629181]
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