UNC0631

N. catalogoS7610 Lotto:S761001

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Dati tecnici

Formula

C₃₇H₆₁N₇O₂

Peso molecolare

635.93

Numero CAS

1320288-19-4

Solubilità (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (157.25 mM)

Ethanol

5 mg/mL (7.86 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione

UNC 0631 è un potente inibitore della Histone Methyltransferase G9a con un IC50 di 4 nM. Riduce potentemente i livelli di H3K9me2 nelle cellule MDA-MB-231 con un IC50 di 25 nM.

Target

G9a

In vitro

Nelle cellule MCF7, 22RV1 e IMR90, UNC0631 riduce potentemente i livelli di H3K9me2 e mostra un'eccellente separazione tra potenza funzionale e tossicità cellulare. Questo composto può quindi essere utilizzato come strumento per la comunità di ricerca biomedica per indagare ulteriormente la biologia di G9a e il suo ruolo nel rimodellamento della cromatina.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:^{^[1]}	Saggi accoppiati a SAHH Questo saggio utilizza SAHH per idrolizzare il prodotto di metiltransferasi SAH in omocisteina e adenosina in presenza di adenosina deaminasi che converte l'adenosina in inosina. La concentrazione di omocisteina viene quindi determinata mediante la coniugazione della sua porzione solfidrilica libera a un fluoroforo sensibile ai tioli, ThioGlo. Per le determinazioni di IC50, le miscele di saggio vengono preparate in tampone fosfato di potassio 25 mM pH 7,5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl₂, 0,01% Triton X-100 con 5 μM SAHH, 0,3 U/mL di adenosina deaminasi, 25 μM SAM e 15 μM ThioGlo. G9a, GLP, SETD7, SETD8, PRMT3 e SUV39H2 vengono saggiati rispettivamente a 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 500 nM e 100 nM. Questo composto viene aggiunto a concentrazioni che vanno da 4 nM a 16 μM. Dopo 2 min di incubazione, le reazioni vengono avviate mediante l'aggiunta dei peptidi istonici: 10 μM H3(1–25) per G9a, 20 μM H3(1–25) per GLP, 100 μM H3(1–25) per SETD7, 500 μM H4(1–24) per SETD8, 10 μM H4(1–24) per PRMT3 e 200 μM H3K9Me1 (1–15) per SUV39H2. La reazione di metilazione viene seguita monitorando l'aumento della fluorescenza utilizzando un lettore di piastre Biotek Synergy2 con filtro di eccitazione 360/40 nm e filtro di emissione 528/20 nm per 20 min in formato piastra a 384 pozzetti. I valori di attività vengono corretti sottraendo il fondo causato dal peptide o dalla proteina. I valori di IC50 vengono calcolati utilizzando Sigmaplot. Le deviazioni standard vengono calcolate da due esperimenti indipendenti.
Saggio cellulare:^[1]	Linee cellulari MDA-MB-231, PC3, HCT116, 22RV1, MCF7 and IMR90 cells Concentrazioni ~10 μM Tempo di incubazione 48 hours Metodo MDA-MB-231, PC3, HCT116 cells are cultured in RPMI with 10% FBS, 22RV1 cells in alphaMEM and 10% FBS, MCF7 and IMR90 cells in DMEM with 10% FBS. Cells are treated with inhibitors for 48 h. The media is removed and replaced with DMEM 10% FBS without phenol red supplemented with 1mg/mL of MTT and incubated for 1–2 h. Live cells reduce yellow MTT to purple formazan. The resulting formazanis solubilized in acidified isopropanol and 1% Triton. Formazan signal absorbance is measured at 570 nm and corrected for the 650 nm background. IC50s are calculated using GraphPad Prizm statistical package with sigmoidal variable slope dose response curve fit.

Saggio della chinasi:^{^[1]}

Saggi accoppiati a SAHH
Questo saggio utilizza SAHH per idrolizzare il prodotto di metiltransferasi SAH in omocisteina e adenosina in presenza di adenosina deaminasi che converte l'adenosina in inosina. La concentrazione di omocisteina viene quindi determinata mediante la coniugazione della sua porzione solfidrilica libera a un fluoroforo sensibile ai tioli, ThioGlo. Per le determinazioni di IC50, le miscele di saggio vengono preparate in tampone fosfato di potassio 25 mM pH 7,5, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl₂, 0,01% Triton X-100 con 5 μM SAHH, 0,3 U/mL di adenosina deaminasi, 25 μM SAM e 15 μM ThioGlo. G9a, GLP, SETD7, SETD8, PRMT3 e SUV39H2 vengono saggiati rispettivamente a 25 nM, 100 nM, 200 nM, 250 nM, 500 nM e 100 nM. Questo composto viene aggiunto a concentrazioni che vanno da 4 nM a 16 μM. Dopo 2 min di incubazione, le reazioni vengono avviate mediante l'aggiunta dei peptidi istonici: 10 μM H3(1–25) per G9a, 20 μM H3(1–25) per GLP, 100 μM H3(1–25) per SETD7, 500 μM H4(1–24) per SETD8, 10 μM H4(1–24) per PRMT3 e 200 μM H3K9Me1 (1–15) per SUV39H2. La reazione di metilazione viene seguita monitorando l'aumento della fluorescenza utilizzando un lettore di piastre Biotek Synergy2 con filtro di eccitazione 360/40 nm e filtro di emissione 528/20 nm per 20 min in formato piastra a 384 pozzetti. I valori di attività vengono corretti sottraendo il fondo causato dal peptide o dalla proteina. I valori di IC50 vengono calcolati utilizzando Sigmaplot. Le deviazioni standard vengono calcolate da due esperimenti indipendenti.

Saggio cellulare:^[1]

Linee cellulari
MDA-MB-231, PC3, HCT116, 22RV1, MCF7 and IMR90 cells
Concentrazioni
~10 μM
Tempo di incubazione
48 hours
Metodo
MDA-MB-231, PC3, HCT116 cells are cultured in RPMI with 10% FBS, 22RV1 cells in alphaMEM and 10% FBS, MCF7 and IMR90 cells in DMEM with 10% FBS. Cells are treated with inhibitors for 48 h. The media is removed and replaced with DMEM 10% FBS without phenol red supplemented with 1mg/mL of MTT and incubated for 1–2 h. Live cells reduce yellow MTT to purple formazan. The resulting formazanis solubilized in acidified isopropanol and 1% Triton. Formazan signal absorbance is measured at 570 nm and corrected for the 650 nm background. IC50s are calculated using GraphPad Prizm statistical package with sigmoidal variable slope dose response curve fit.

Riferimenti

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21780790/

Sellecks UNC0631 È stato citato da 1 Pubblicazione

Epigenetic Reprogramming with Antisense Oligonucleotides Enhances the Effectiveness of Androgen Receptor Inhibition in Castration-Resistant Prostate Cancer [ Cancer Res, 2018, 78(20):5731-5740]	PubMed: 30135193

Epigenetic Reprogramming with Antisense Oligonucleotides Enhances the Effectiveness of Androgen Receptor Inhibition in Castration-Resistant Prostate Cancer [ Cancer Res, 2018, 78(20):5731-5740]

PubMed: 30135193

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