Lersivirine (UK-453061)

Lersivirine (UK-453061) si lega alla Reverse Transcriptase (RT) HIV-1 wt con un K_d di 624 nM. È un inibitore molto debole della DNA polimerasi beta umana, con una IC50 media geometrica estrapolata di circa 20 mM, che si traduce in un indice di selettività previsto di 166.000. Questo composto è in grado di inibire la replicazione del virus HIV-1 nelle cellule MT-2 infettate con wt NL4-3, con un EC50 che varia da 5 nM a 35 nM contro un MOI che varia da 0,005 a 0,5. Mantiene l'attività contro l'80% dei virus con genotipi contenenti K103N come singola mutazione NNRTI (rispetto al 7% per l'efavirenz), il 57% dei virus con genotipi contenenti Y181C come singola mutazione NNRTI (43% per l'efavirenz) e il 46% dei virus con genotipi contenenti G190A come singola mutazione NNRTI (0% per l'efavirenz). Lersivirine inibisce la replicazione del ceppo Ba-L in PBL, con un EC50 medio geometrico pari a 3,38 nM (IC 95%, 2,26-5,05 nM) e un EC90 pari a 9,87 nM (IC 95%, 6,63-14,7 nM), senza citotossicità osservata fino a 50 μM. Le combinazioni di esso con farmaci della classe NRTI (abacavir, didanosina, emtricitabina, lamivudina, tenofovir e zidovudina) determinano interazioni sinergiche. [1]

Nei topi, Lersivirine (UK-453061) non è teratogeno.[3]

• Saggi enzimatici della RT

  Le attività di Lersivirine (UK-453061) e efavirenz contro la RT wt (ceppo BH10) sono determinate utilizzando un saggio di estensione del primer che incorpora un primer/stampo DNA/RNA. Il DNA del primer biotinilato in 5' è un oligo(dT) di 16mer, che viene ricotto a uno stampo di poli(rA) di circa 300 basi di lunghezza. L'incorporazione di [³H]TTP(dTTP) mediante Reverse Transcriptase determina l'estensione del primer. Durante la reazione il primer/stampo è legato a una flashplate rivestita di streptavidina (NEN). I nucleotidi tritiati incorporati possono quindi stimolare lo scintillante a produrre un segnale che viene misurato utilizzando un contatore a scintillazione. I composti che inibiscono l'attività della DNA polimerasi RNA-dipendente della RT producono un segnale ridotto.

• Linee cellulari

  SupT1 cells

• Concentrazioni

  increasing concentrations from 5 nM

• Tempo di incubazione

  Every 7 days

• Metodo

  For inhibitor escalation studies, SupT1 cells are initially infected with HIV-1 NL4-3 wt for 1 h at 37°C and the virus-infected cells are passaged weekly in SupT1 cells in the presence of increasing concentrations of lersivirine (UK-453061) from a starting concentration of 5 nM (IC50 in this assay system) in 12-well plates (6 × 10⁵ cells/well). Throughout the passaging period, ongoing virus replication is monitored weekly by observing cytopathic effects (syncytia). Every 7 days, virus supernatant is passaged onto fresh cells at the same density with fresh medium containing this compound. The concentration of it is increased by 2-fold and 5-fold that of the previous concentration upon subsequent passage whenever evidence of viral replication is observed. Virus stocks for phenotypic characterization are produced in SupT1 cells in the absence of compound and are tested for their sensitivity to lersivirine in an antiviral assay using HeLaP4 cells.

• Modelli animali

  Mated Crl:CD1(ICR) mice

• Dosaggi

  150 mg/kg, 350 mg/kg, 500 mg/kg

• Somministrazione

  Oral gavage