U-73122

U73122 inibisce significativamente l'aggregazione delle piastrine umane indotta da una varietà di agonisti, tra cui collagene, trombina, ADP, acido arachidonico, con IC50 di 1-5 μM. Questo composto (10 μM) inibisce la produzione di IP3 e il successivo rapido aumento di Ca²⁺ citosolico indotto sia dalla trombina che da U-46619 attraverso l'inibizione dell'idrolisi del fosfatidil[³H]inositolo e del fosfatidil[³H]inositolo 4,5-bisfosfato catalizzata da una frazione solubile di piastrine (K_i=9 e 40 μM, rispettivamente). Inibisce la produzione di trombossano B indotta dal collagene inibendo la mobilizzazione dell'acido arachidonico accoppiata al recettore. Questa sostanza chimica inibisce anche l'aggregazione dei neutrofili polimorfonucleati umani indotta da FMLP e la produzione associata di IP3 e diacilglicerolo. [1]

Questo composto causa un'inibizione concentrazione-dipendente del rilascio di MPO e B12-BP indotto da C5a, FMLP, PAF e LTB4 da PMN trattati con citochalasin B. I valori di IC50 sono 60 (FMLP), 110 (LTB4), 115 (C5a) e 120 (PAF) nM per il rilascio di MPO; e 105 (FMLP), 110 (LTB4), 120 (C5a) e 140 (PAY) nM per il rilascio di B12-BP. È anche un potente inibitore della produzione di anioni superossido da parte di PMN trattati con citochalasin B attivati con C5a o FMLP con IC50 di 160 e 300 nM, rispettivamente. Questa sostanza chimica causa la soppressione dell'aumento di [Ca²⁺]_i, della produzione di IP3 e della produzione di DAG in PMN stimolati da FMLP con IC50 di 500 nM, 2 μM e 2 μM, rispettivamente. 3 μM di questo composto causano un'inibizione del 100% dell'attività GTPasi indotta da FMLP. Causa un'inibizione concentrazione-dipendente dell'associazione indotta da FMLP della PKC con la frazione particolata estraibile dei PMN, ma non una preparazione solubile di PKC dei PMN. [2]

Inibisce significativamente la PLC-β2 umana ricombinante, con un IC50 di ~6 μM. Questo composto ha scarso effetto su PLC-β1, PLC-β3 o PLC-β4. Riduce il flusso di Ca²⁺ e la chemiotassi indotti da interleuchina-8 e leucotriene B4 nei neutrofili umani con IC50 di ~6 μM e ~5 μM, rispettivamente. [3]

1 μM di questo composto blocca gli aumenti di Ca²⁺ intracellulare libero indotti dalla bradichinina (BK) nelle cellule NG108-15 indifferenziate. L'IC50 per un'esposizione di 20 minuti è di circa 200 nM. 1 μM di questa sostanza chimica produce un piccolo ma significativo aumento di [Ca²⁺]_i che deriva dal rilascio di Ca²⁺ da un deposito intracellulare. Nelle cellule NG108-15 differenziate blocca completamente l'influsso di Ca²⁺ indotto dalla depolarizzazione. Al contrario, nei neuroni DRG questo composto inibisce solo leggermente i canali Ca²⁺ voltaggio-dipendenti. [4]

È un inibitore relativamente specifico dell'attivazione della fosfolipase C mediata da proteine G negli acini pancreatici. Questo composto inibisce l'idrolisi del fosfatidilinositolo (PI) alla stimolazione con colecistochinina (dell'81%) o carbacholo (del 73%) a una concentrazione di effetto massimo di 10 μM. Questa sostanza chimica (10 μM) inibisce gli aumenti di [Ca²⁺]_i stimolati da alte concentrazioni di secretagoghi in acini caricati con fura-2. Inibisce anche il segnale [Ca²⁺]_i generato stimolando direttamente le proteine G con fluoruro di sodio. Questo composto inibisce rapidamente il segnale oscillante [Ca²⁺]_i elicitato da basse concentrazioni di colecistochinina o carbacholo. [5]

Aumenta l'attività della hPLCβ3 in modo concentrazione- e tempo-dipendente in un sistema micellare privo di cellule, con un aumento fino a 8 volte dell'attività enzimatica e un EC50 di 13,6 μM. L'attivazione della hPLCβ3 da parte di questo composto richiede la modifica covalente delle cisteine. Questa sostanza chimica (10 μM) attiva anche hPLCγ1 (>10 volte) e hPLCβ2 (~2 volte); la PLC δ1 non viene né attivata né inibita. [6]

U73122 (30 mg/kg i.p.) blocca il gonfiore della zampa posteriore dei ratti del 65 e dell'80% a 1 e 3 ore dopo la sfida con carragenina. Questo composto (0,1 mg/mL) inibisce l'accumulo di macrofagi e linfociti indotto da carragenina nelle camere sottocutanee nei cani del 65 e 74%, rispettivamente. Questa sostanza chimica (30 mg/kg i.p.) inibisce totalmente l'aumento indotto da LPS dell'infiltrazione di macrofagi e linfociti e della produzione di prostaglandina E2 (dell'80%) in un modello di peritonite murina, e inibisce l'edema auricolare indotto da 12-O-tetradecanoil-forbolo-13-acetato nei topi. [3]

• Saggio dell'attività della fosfolipase C specifica dei fosfoinositidi

  Le miscele di saggio (0,2 mL) contengono tampone di saggio (senza leupeptina), CaCl₂ (una quantità calcolata per produrre un tampone Ca-EGTA con la concentrazione di Ca²⁺ libero richiesta), frazione solubile piastrinica (5-15 μg di proteina) e 4 nmol di fosfatidil[³H]inositolo o fosfatidil[³H]inositolo 4,5-bisfosfato. Le miscele di substrato consistono in fosfatidil[³H]inositolo (3,4 Ci/mol) più 1-palmitoil-2-oleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (rapporto 1:0,4 M) o fosfatidil[³H]inositolo 4,5-bisfosfato (7 Ci/mol) più 1-palmitoil 2-oleoil-sn-glicero-3-fosfoetanolamina (rapporto 1:4 M). Le miscele di substrato sono preparate come sospensioni 10× di piccole vescicole unilamellari mediante consonizzazione dei lipidi nel tampone di saggio (sonicatore a microsonda Vibra Cell, 75 W, 2 volte 60 sec). U-73122 viene aggiunto alle miscele di saggio in 2 μL di DMSO. Questa quantità di DMSO ha un effetto trascurabile sull'attività della fosfolipase C in queste condizioni. Questo composto viene incubato in provette di vetro a 37 ℃ per 10 min e quindi bloccato con 1,6 mL di cloroformio/metanolo/HCl (1 N) (108:108:25, in vol). Dopo vigorosa miscelazione e centrifugazione (500 g per 10 min), una porzione (0,7 mL) dello strato superiore acquoso (0,9 mL) viene trasferita in una fiala da scintillazione che contiene 10 mL di liquido di scintillazione ACS. Il tritio nei prodotti idrosolubili (>90% sono inositolo fosfati) viene misurato mediante spettrometria a scintillazione liquida. L'idrolisi del fosfoinositide in queste condizioni non supera mai il 10% del totale aggiunto e procede a una velocità costante per tutto il periodo di incubazione. I valori di bianco sono determinati da miscele di saggio in cui la frazione solubile piastrinica viene aggiunta dopo il reagente di arresto.

• Modelli animali

  Swiss-Webster mic

• Dosaggi

  30 mg/kg

• Somministrazione

  i.p.