Trametinib (GSK1120212)

Trametinib (GSK1120212) inibisce la fosforilazione di MBP indipendentemente dall'isotipo di Raf e MEK, con IC50 che vanno da 0,92 nM a 3,4 nM. Non dimostra inibizione delle attività chinasiche di c-Raf, B-Raf, ERK1 e ERK2. Inoltre, questo composto non mostra una drastica attività inibitoria contro le altre 98 chinasi. Mostra una potente attività inibitoria contro le linee cellulari di cancro colorettale umano. Le cellule HT-29 e COLO205, che sono note per avere un mutante B-Raf costitutivamente attivo, sono le più sensibili ad esso con IC50 0,48 nM e 0,52 nM, rispettivamente. Le linee cellulari che portano una mutazione K-Ras mostrano un'ampia gamma di sensibilità ad esso con IC50 di 2,2-174 nM. Al contrario, le cellule COLO320 DM, che portano il gene wild-type sia in B-Raf che in K-Ras, sono resistenti anche a 10 μM. Il trattamento per 24 ore induce l'arresto del ciclo cellulare nella fase G1 in tutte le linee cellulari sensibili. Coerentemente, porta all'upregulation di p15^INK4b e/o p27^KIP1 nella maggior parte delle linee cellulari di cancro colorettale. Inibisce la fosforilazione costitutiva di ERK in tutte le linee cellulari sensibili. Questo composto induce l'apoptosis sia nelle cellule HT-29 che COLO205, ma le cellule COLO205 sono più sensibili delle cellule HT-29 in termini di induzione dell'apoptosis. [1] Blocca la produzione di fattore di necrosi tumorale-α e interleuchina-6 dalle cellule mononucleari del sangue periferico (PBMC). [2]

La somministrazione orale di Trametinib (GSK1120212) a 0,3 mg/kg o 1 mg/kg una volta al giorno per 14 giorni è efficace nell'inibire la crescita dello xenotrapianto HT-29, e 1 mg/kg di questo composto blocca quasi completamente l'aumento del tumore. La fosforilazione di ERK1/2 è completamente inibita nei tessuti tumorali stabiliti da una singola dose orale di 1 mg/kg, e i livelli proteici di p15^INK4b e p27^KIP1 sono aumentati dopo 14 giorni di trattamento. Nel modello di xenotrapianto COLO205, si osserva una regressione tumorale anche a una dose di 0,3 mg/kg. A una dose di 1 mg/kg, si ottiene una regressione completa in 4 su 6 topi in cui il tumore degenera al punto che il volume tumorale non è misurabile. [1] La somministrazione a 0,1 mg/kg sopprime quasi completamente l'artrite indotta da adiuvante (AIA) e l'artrite indotta da collagene di tipo II (CIA) in ratti Lewis o topi DBA1/J, rispettivamente. [2]

• Saggio chinasi a cascata Raf-MEK-ERK

  La proteina basica della mielina non fosforilata (MBP) viene rivestita su una piastra ELISA e la forma attiva di B-Raf/c-Raf viene miscelata con MEK1/MEK2 non fosforilata ed ERERK2 in 10 μM di ATP e 12,5 mM di MgCl₂ contenente tampone MOPS in presenza di varie concentrazioni di Trametinib (GSK1120212). La fosforilazione di MBP viene rilevata mediante l'anticorpo anti-fosfo-MBP.

• Linee cellulari

  HT-29, HCT-15, HCT116, COLO205, LS-174T, SW480, SW620, T84, LoVo and COLO320

• Concentrazioni

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Tempo di incubazione

  3 or 4 days

• Metodo

  Exponentially growing cells are precultured in 96-well tissue culture plates for 24 hours and then exposed to Trametinib (GSK1120212). Cell growth is determined by an in vitro toxicology assay kit, sulforhodamine B based. For apoptosis assay, both floating and adherent cells are collected and fixed with 70% ethanol. After washing with PBS, the cells are suspended in 100 μg/mL RNase and 25 μg/mL propidium iodide (PI) and incubated at 37 °C for 30 minutes in the dark. The DNA content of each single cell is determined using the flow cytometer Cytomics FC500 or Guava EasyCyte plus.

• Modelli animali

  Female BALB/c-nu/nu mice inoculated subcutaneously with HT-29 or COLO205 cells

• Dosaggi

  ~1 mg/kg/day

• Somministrazione

  Orally