Trametinib DMSO solvate (GSK1120212B)

GSK1120212 inibisce la fosforilazione di MBP indipendentemente dall'isotipo di Raf e MEK, con IC50 che vanno da 0,92 nM a 3,4 nM. GSK1120212 non dimostra alcuna inibizione delle attività chinasiche di c-Raf, B-Raf, ERK1 ed ERK2. Inoltre, GSK1120212 non mostra una drastica attività inibitoria contro le altre 98 chinasi. GSK1120212 mostra una potente attività inibitoria contro le linee cellulari di cancro del colon-retto umano. Le cellule HT-29 e COLO205, note per avere un mutante B-Raf costitutivamente attivo, sono le più sensibili a GSK1120212 con IC50 di 0,48 nM e 0,52 nM, rispettivamente. Le linee cellulari che portano una mutazione K-Ras mostrano un'ampia gamma di sensibilità a GSK1120212 con IC50 di 2,2-174 nM. Al contrario, le cellule COLO320 DM, che portano il gene wild-type sia in B-Raf che in K-Ras, risultano resistenti a GSK1120212 anche a 10 μM. Il trattamento con GSK1120212 per 24 ore induce l'arresto del ciclo cellulare nella fase G1 in tutte le linee cellulari sensibili. Coerentemente, il trattamento con GSK1120212 porta all'upregolazione di p15INK4b e/o p27KIP1 nella maggior parte delle linee cellulari di cancro del colon-retto. GSK1120212 inibisce la fosforilazione costitutiva di ERK in tutte le linee cellulari sensibili. GSK1120212 induce apoptosis sia nelle cellule HT-29 che COLO205, ma le cellule COLO205 sono più sensibili a GSK1120212 rispetto alle cellule HT-29 in termini di induzione dell'apoptosis.[1] GSK1120212 blocca la produzione di fattore di necrosi tumorale-α e interleuchina-6 dalle cellule mononucleate del sangue periferico (PBMC).[2]

La somministrazione orale di GSK1120212 a 0,3 mg/kg o 1 mg/kg una volta al giorno per 14 giorni è efficace nell'inibire la crescita dello xenotrapianto HT-29, e 1 mg/kg di GSK1120212 blocca quasi completamente l'aumento del tumore. La fosforilazione di ERK1/2 è completamente inibita nei tessuti tumorali stabiliti da una singola dose orale di 1 mg/kg di GSK1120212, e i livelli proteici di p15INK4b e p27KIP1 sono sovraregolati dopo 14 giorni di trattamento con GSK1120212. Nel modello di xenotrapianto COLO205, si osserva una regressione tumorale anche a una dose di 0,3 mg/kg. A una dose di 1 mg/kg, si ottiene una regressione completa in 4 su 6 topi in cui il tumore degenera al punto che il volume tumorale non è misurabile.[1] La somministrazione di GSK1120212 a 0,1 mg/kg sopprime quasi completamente l'artrite indotta da adiuvante (AIA) e l'artrite indotta da collagene di tipo II (CIA) in ratti Lewis o topi DBA1/J, rispettivamente.[2]

• Saggio chinasi a cascata Raf-MEK-ERK

  La proteina basica della mielina (MBP) non fosforilata viene rivestita su una piastra ELISA e la forma attiva di B-Raf/c-Raf viene miscelata con MEK1/MEK2 non fosforilata ed ERERK2 in 10 μM di ATP e 12,5 mM di MgCl2 contenente tampone MOPS in presenza di varie concentrazioni di GSK1120212. La fosforilazione della MBP viene rilevata mediante l'anticorpo anti-fosfo-MBP.

• Linee cellulari

  HT-29, HCT-15, HCT116, COLO205, LS-174T, SW480, SW620, T84, LoVo and COLO320 cells

• Concentrazioni

  ~10 μM

• Tempo di incubazione

  3 or 4 days

• Metodo

  Exponentially growing cells are precultured in 96-well tissue culture plates for 24 hours and then exposed to GSK1120212. Cell growth is determined by an in vitro toxicology assay kit, sulforhodamine B based. For apoptosis assay, both floating and adherent cells are collected and fixed with 70% ethanol. After washing with PBS, the cells are suspended in 100 μg/mL RNase and 25 μg/mL propidium iodide (PI) and incubated at 37 °C for 30 minutes in the dark. The DNA content of each single cell is determined using the flow cytometer Cytomics FC500 or Guava EasyCyte plus.

• Modelli animali

  Female BALB/c-nu/nu mice inoculated subcutaneously with HT-29 or COLO205 cells

• Dosaggi

  ~1 mg/kg/day

• Somministrazione

  o.g.