Dubermatinib(TP-0903)

Nelle cellule di cancro pancreatico (PSN-1), Dubermatinib (TP-0903) mostra una forte attività antiproliferativa con IC50 di 6 M. Induce anche un forte arresto G2/M inibendo potentemente Aurora A e B. [1] Nelle cellule B della LLC di tutti i pazienti con LLC, questo composto provoca un'induzione dose-dipendente di apoptosi massiva prendendo di mira Axl fosforilato e supera la protezione mediata da BMSC della LLC delle cellule B della LLC dall'apoptosi. [2]

Nell'ippocampo di ratto adulto, la somministrazione intracerebroventricolare di Dubermatinib (TP-0903) (2,5 nM) aumenta significativamente il numero di cellule di nuova generazione e prolunga la sopravvivenza delle cellule ippocampali. [3] Nei topi, questo composto (20 μg/g, i.p.) previene efficacemente le anomalie dello sviluppo cerebellare neonatale indotte da GC. [4]

• Saggio di attività della Axl Chinasi

  I composti in esame vengono diluiti alle concentrazioni desiderate in tampone di reazione per la chinasi (50 mM HEPES pH 7,5, 10 mM MgCl², 1 mM EGTA, 2 mM DTT e 0,01% v/v Tween-20) e vengono brevemente incubati con la chinasi Axl. La chinasi Axl utilizzata è la chinasi Axl umana ricombinante (dominio catalitico, aminoacidi 473-894) con un tag istidinico. La reazione viene avviata con l'aggiunta di ATP e substrato poli-GT marcato (poli Glu:Tyr, polimero 4:1). Le concentrazioni dei vari componenti nel saggio (volume di reazione 10 µL) sono: 1% DMSO, 93 ng/mL di chinasi Axl, 20 µM di ATP e 200 nM di substrato poli-GT. Dopo l'aggiunta di ATP e substrato poli-GT, l'incubazione è di 60 minuti a temperatura ambiente, la reazione enzimatica viene interrotta con l'aggiunta di 10 µL di anticorpo anti-fosfotirosina PY20 marcato con terbio in tampone contenente EDTA. La concentrazione finale di EDTA e anticorpo dopo l'aggiunta alla reazione è di 10 mM e 2 nM, rispettivamente. L'anticorpo coniugato con terbio genera un segnale FRET risolto nel tempo con la molecola (legata al substrato poli-GT) quando il substrato è fosforilato. Dopo un'ora di incubazione a temperatura ambiente, la fluorescenza viene misurata con eccitazione a 320 nm e doppia emissione a 495 e 520 nm su un lettore di micropiastre EnVision. Il segnale è espresso in termini di rapporto TR-FRET (intensità di fluorescenza a 520 nm rispetto a 495 nm).

• Linee cellulari

  PSN-1 cells

• Concentrazioni

  --

• Tempo di incubazione

  96 hours

• Metodo

  For cell proliferation assays with Dubermatinib(TP-0903), 45 µL containing 1000 cells per well are seeded into solid white 384-well plates in appropriate cell growth media containing 10% FBS and incubated overnight at 37 °C and 5% CO₂. The following day, this compound is diluted in serum free growth media to 10x desired concentrations and 5 µL is added to each well. Combined compound and cells are incubated for 96 hours. Following incubation, 40 µL of ATP-Lite solution is added to each well, incubated for an additional 10 minutes at room temperature and luminescence is measured on an EnVision microplate reader. Percent cell viability for it is calculated by comparing treated wells to appropriate controls (e.g. vehicle treated) included on each plate.