Tofacitinib (CP-690550)

N. catalogoS2789 Lotto:S278909

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Dati tecnici

Formula

C16H20N6O
Peso molecolare 312.37 Numero CAS 477600-75-2
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 62 mg/mL (198.48 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Tofacitinib è un nuovo inibitore di JAK3 con un IC50 di 1 nM in saggi acellulari, 20-100 volte meno potente contro JAK2 e JAK1. Questo composto inibisce l'espressione di BCL-A1 e BCL-XL antiapoptotici nelle cellule dendritiche plasmacitoidi umane (PDC) e induce l'apoptosi delle PDC.
Target
JAK3
(Cell-free assay)		 JAK2
(Cell-free assay)		 JAK1
(Cell-free assay)
1 nM 20 nM 112 nM
In vitro CP-690550 è un inibitore orale specifico di JAK3, è 20-100 volte meno potente per JAK2 e JAK1 con IC50 di 20 nM e 112 nM, rispettivamente. Questo composto non ha una potente attività contro altre 30 chinasi (tutte le IC50 mediane > 3000 nM). Inibisce la proliferazione indotta da IL-2 con una potenza 30 volte superiore rispetto ai suoi effetti sulla proliferazione indotta da GM-CSF. Questa sostanza chimica inibisce efficacemente una reazione linfocitaria mista murina (MLR) (IC50 = 91 nM). Inibisce potentemente l'upregulation di CD23 indotta da IL-4 (IC50=57 nM) e l'espressione del complesso maggiore di istocompatibilità di classe II (MHCII) (IC50=71 nM) sulle cellule B murine. Una ricerca recente indica che una bassa dose di questo composto accelera l'insorgenza dell'encefalomielite autoimmune sperimentale potenziando la differenziazione Th17.
In vivo In un modello murino di trapianto cardiaco eterotopico (cuore donatore DBA2 in ospite C57/BL6), Tofacitinib determina un aumento dose-dipendente della sopravvivenza dei cuori trapiantati. L'EC50 (concentrazione del farmaco nel sangue alla quale il 50% dei topi manterrà il proprio innesto per >28 giorni) è di circa ~60 ng/mL. Questo composto previene il rigetto di reni allogenici in primati non umani (NHP, Macaca fascicularis) (MST di 62 e 83 giorni per i gruppi da 50 a 100 ng/ml e da 200 a 400 ng/ml, rispettivamente). I topi trattati cronicamente con questo composto (1,5-15 mg/kg/die) dimostrano alterazioni dose e tempo-dipendenti nei sottogruppi linfocitari quando esaminati mediante citometria a flusso. Il cambiamento più drammatico osservato è una riduzione del 96% nel numero di cellule spleniche NK1.1+TCRb dopo 21 giorni di trattamento. Le risposte di ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) in topi sensibilizzati sono ridotte in modo dose-dipendente dopo il trattamento con questa sostanza chimica (1,87–30 mg/kg, s.c.). La sopravvivenza prolungata dei cuori neonatali Balb/c impiantati nel padiglione auricolare di topi C3H/HEN con MHC non corrispondente è osservata con questa monoterapia (10–30 mg/kg/die), ma migliorata in combinazione con la ciclosporina (10 mg/kg/die).

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggio della chinasi JAK3

    Un frammento che codifica il dominio catalitico di JAK3 umana (785aa a 1125aa, dominio catalitico JH1) viene amplificato mediante PCR dal cDNA a lunghezza intera e clonato nel sito EcoRI del vettore di trasferimento di baculovirus pVL1393. Il baculovirus ricombinante viene utilizzato per infettare le cellule Sf9 (Spodoptera frugipedra) e la proteina di fusione GSTJAK3 ricombinante viene isolata su sefarosio di glutatione. La proteina di fusione viene eluita con glutatione ridotto e conservata in un tampone contenente 50 mM Tris, pH 7,5, 10 mM DTT e 10% di glicerolo. L'attività della chinasi JAK3 viene misurata mediante ELISA come segue: Le piastre vengono rivestite durante la notte con un copolimero casuale di acido L-glutammico e tirosina (4:1) (100 ug/mL). Le piastre vengono lavate e la JAK3 JH1:GST ricombinante (100 ng/pozzetto) con o senza inibitori viene incubata a temperatura ambiente per 30 minuti, dopodiché viene aggiunto l'anticorpo anti-fosfotirosina PY20 coniugato con HRP (ICN) e sviluppato mediante TMB (3,3',5,5'-tetrametilbenzidina). Altre chinasi (Tabella 1) vengono prodotte in E. coli o in cellule di insetto, a seconda di ciò che risulta ottimale per la data chinasi. L'attività catalitica delle tirosina chinasi viene misurata utilizzando l'ELISA sopra menzionato, mentre le serina/treonina chinasi vengono saggiate utilizzando saggi enzimatici radioattivi.
Saggio cellulare:

[1]
  • Linee cellulari

    Human T blasts cell

  • Concentrazioni

    0-4000 nM

  • Tempo di incubazione

    4 days

  • Metodo

    To measure IL-2-dependent proliferation, isolated lymphocytes are resuspended to a cell density of 1-2 × 106/mL in complete RPMI medium (RPMI 1640 containing 10% (w/v) fetal calf serum (FCS), 1%(w/v) penicillin and treptomycin).Phytohemagluttinin (PHA) is added to a final concentration of 10mg/mL, and the culture incubated for 3 days at 37 °C in a humidified 5% (v/v) CO2 incubator to upregulate IL-2R and JAK3 expression. IL-2 (200U/mL), with or without this compound is then added and the cells are incubated for 72 hours at 37 °C in a humidified 5% (v/v) CO2 incubator, after which 50 mL of 3H-thymidine (5mCi/mL) is added. The plates are incubated for an additional 18 hours, harvested with a 96-well harvester, and counted on a scintillation counter. HUO3 cells are maintained in culture with granulocyte-macrophage colony stimulating factor and human foreskin fibroblasts are maintained in culture with 10% fetal calf serum. This compound is added to freshly plated cells and cultured for 4 days. 3Hthymidine is added during the last 18 hours of the culture period.
Studio sugli animali:

[1]
  • Modelli animali

    DBA/2 and C57/BL6 mice

  • Dosaggi

    0-136 ng/mL

  • Somministrazione

    Administered via osmotic minipump infusion

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14593182/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14678034/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18242596/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22252297/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16378072/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14678034/

Convalida del prodotto da parte del cliente

TRAP-positive multinucleated cell differentiation depends on JAK and is inhibited by tofacitinib in vitro. Effect of tofacitinib on the differentiation of TRAP-positive multi-nucleated cells in vitro (n =3 wells/experiment). Original magnification x 100.

Dati da [ Arthritis Rheumatol , 2014 , 66(1), 121-9 ]

Effect of a panel of IFN inhibitors on BUNΔNSs virus growth in A549 cells. The inhibitor panel consists of small molecules that target the IKK2 (TPCA-1) and TBK1 (BX795, MRT6884, MRT6707) components of the IFN induction pathway and JAK1 (Cyt387, AZD1480, Ruxolitinib, Tofacitinib) a component of the IFN signaling pathway. Effect of the inhibitors was compared with A549 cells constitutively expressing viral IFN antagonists that block IFN production (BVDV-Npro) or IFN signaling (PIV5-V). Effect of various inhibitor concentrations on plaque size formation. Plaques were visualized 2 days post-infection by crystal violet staining.

Dati da [ PLoS One , 2014 , 9(11), e112014 ]

Effects of CP-690550 on NKTCL cell lines. NK-S1, KHYG-1 cells were treated with CP-690550 for 48 hours, and the effect on STAT5 phosphorylation was evaluated by Western blotting.

Dati da [ Cancer Discov , 2012 , 2(7), 591-7 ]

AE cells were treated with vehicle control (DMSO), a MEK inhibitor (PD98059), a PI3K inhibitor (LY294002) or a JAK2 inhibitor (CP690550) at indicated concentrations for 24 hours, followed by lysis for immunoblotting.

Dati da [ Blood , 2012 , 120(4), 709-19 ]

Sellecks Tofacitinib (CP-690550) È stato citato da 195 Pubblicazioni

A patient-derived T cell lymphoma biorepository uncovers pathogenetic mechanisms and host-related therapeutic vulnerabilities [ Cell Rep Med, 2025, S2666-3791(25)00102-8] PubMed: 40147445
In silico modeling guides identification of novel JAK1 variants associated with immune dysregulation [ EMBO Mol Med, 2025, 10.1038/s44321-025-00317-0] PubMed: 41136770
Differential effects of tofacitinib on macrophage activation contribute to lack of response in ulcerative colitis patients [ J Crohns Colitis, 2025, 19(6)jjaf076] PubMed: 40320713
Keloids and inflammation: the crucial role of IL-33 in epidermal changes [ Front Immunol, 2025, 16:1514618] PubMed: 40230853
Rheumatoid arthritis associated cytokines and therapeutics modulate immune checkpoint receptor expression on T cells [ Front Immunol, 2025, 16:1534462] PubMed: 39981237
Polarization of Vδ2 T cells to a Th2-like phenotype promotes plasmablast differentiation and possesses pro-fibrotic properties in IgG4-related disease [ Front Immunol, 2025, 16:1550405] PubMed: 40213561
Membrane-bound IL-15 co-expression powers a potent and persistent CD70-targeted TRuC T-cell therapy [ Front Immunol, 2025, 16:1609658] PubMed: 40519930
Associations between ionomic profile and metabolic abnormalities in a murine model of sodium sulfide induced alopecia areata [ Front Pharmacol, 2025, 16:1507348] PubMed: 40438604
Targeting interferon responses in juvenile dermatomyositis: Siglec-1 as an in vitro biomarker for JAK inhibitor efficacy [ Rheumatology (Oxford), 2025, keaf227] PubMed: 40372702
Unidirectional Crosstalk Between NTRK1 and IGF2 Drives ER Stress in Chronic Pain [ Biomedicines, 2025, 13(7)1632] PubMed: 40722704

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