CP-690550 (Tofacitinib) Citrate

N. catalogoS5001 Lotto:S500109

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Dati tecnici

Formula

C16H20N6O.C6H8O7
Peso molecolare 504.49 Numero CAS 540737-29-9
Solubilità (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (198.21 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Aggiungere i solventi al prodotto singolarmente e in ordine.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml significa leggermente solubile o insolubile.
* Si prega di notare che Selleck testa la solubilità di tutti i composti internamente e la solubilità effettiva può differire leggermente dai valori pubblicati. Ciò è normale ed è dovuto a leggere variazioni da lotto a lotto.
* Spedizione a temperatura ambiente (I test di stabilità mostrano che questo prodotto può essere spedito senza alcuna misura di raffreddamento.)

Preparazione delle soluzioni stock

Attività biologica

Descrizione Il citrato di tofacitinib (CP-690550, Tasocitinib) è un nuovo inibitore di JAK con IC50 di 1 nM, 20 nM e 112 nM rispettivamente contro JAK3, JAK2 e JAK1. Ha anche attività Anti-infection.
Target
JAK3
(Cell-free assay)		 JAK2
(Cell-free assay)
1 nM 20 nM
In vitro Il citrato di Tofacitinib inibisce la proliferazione dei blasti delle cellule T umane mediata da IL-2 e l'espressione di CD69 indotta da IL-15 con IC50 di 11 nM e 48 nM, rispettivamente. Il citrato di Tofacitinib previene la reazione linfocitaria mista con IC50 di 87 nM. Il trattamento di cellule murine Patersen-recettore dell'eritropoietina (FDCP-EpoR) dipendenti da fattori che ospitano JAK2 umano wild-type o V617F con citrato di Tofacitinib porta alla prevenzione della proliferazione cellulare con IC50 di 2,1 µM e 0,25 µM, rispettivamente. Il citrato di Tofacitinib inibisce la fosforilazione di STAT1 e STAT3 indotta dall'interleuchina-6 con IC50 di 23 nM e 77 nM, rispettivamente. Inoltre, il citrato di Tofacitinib genera un significativo effetto pro-apoptotico sulle cellule murine FDCP-EpoR che trasportano JAK2VV617F, mentre un effetto minore è osservato per le cellule che trasportano JAK2 wild-type. Questa attività è accoppiata con l'inibizione della fosforilazione degli effettori di segnalazione a valle chiave dipendenti da JAK2V617F trasduttore di segnale e attivatore di trascrizione (STAT)3, STAT5 e omologo dell'oncogene virale del timoma murino v-akt (AKT). Inoltre, il citrato di Tofacitinib previene l'espressione di CD69 indotta da IL-15 nelle cellule NK e CD8+ T umane e di scimmia cinomolga in vitro.
In vivo Il citrato di Tofacitinib diminuisce una risposta di ipersensibilità di tipo ritardato e prolunga la sopravvivenza dell'allotrapianto cardiaco in modelli murini. Inoltre, il trattamento con citrato di Tofacitinib di progenitori eritroidi espansi ex vivo da pazienti PV positivi per JAK2V617F si traduce in un'attività antiproliferativa specifica (IC50 = 0,2 μM) e pro-apoptotica. Al contrario, i progenitori espansi da controlli sani sono meno sensibili al citrato di Tofacitinib nei saggi di proliferazione (IC50 > 1,0 μM) e apoptosi. Durante 2 settimane di somministrazione di citrato di Tofacitinib a 10 e 30 mg/kg/die, si osserva una diminuzione significativa e tempo-dipendente del numero di cellule NK rispetto al trattamento con veicolo. Il numero di cellule CD8+ della memoria effettore nel gruppo trattato con citrato di Tofacitinib è inferiore del 55% rispetto a quello osservato negli animali trattati con veicolo.

Protocollo (da riferimento)

Saggio della chinasi:

[1]
  • Saggi enzimatici

    I saggi chinasici JAK1, JAK2 e JAK3 utilizzano una proteina espressa in cellule SF9 infettate da baculovirus (una proteina di fusione di GST e il dominio catalitico dell'enzima JAK umano) purificata mediante cromatografia di affinità su glutatione-Sepharose. Il substrato per la reazione è acido poliglicina-tirosina [PGT (4:1)], rivestito su piastre Nunc Maxi Sorp a 100 μg/mL durante la notte a 37 °C. Le piastre vengono lavate tre volte e l'enzima JAK viene aggiunto ai pozzetti, che contenevano 100 μL di tampone chinasico (50 mM HEPES, pH 7,3, 125 mM NaCl, 24 mM MgCl2) + ATP + 1 mM di ortovanadato di sodio. Per CP-690550 (Tofacitinib) Citrate, viene anche aggiunto per il saggio chinasico a diverse dosi. Dopo incubazione a temperatura ambiente per 30 minuti, le piastre vengono lavate tre volte. Il livello di tirosina fosforilata in un dato pozzetto viene determinato mediante saggio ELISA standard utilizzando un anticorpo anti-fosfotirosina.
Saggio cellulare:

[2]
  • Linee cellulari

    FDCP-EpoR JAK2WT and JAK2V617F cell lines

  • Concentrazioni

    0-4 μM

  • Tempo di incubazione

    72 hours

  • Metodo

    Determination of growth inhibition by Tofacitinib citrate is performed using identical culture conditions for both FDCP-EpoR JAK2WT and JAK2V617F cell lines. Briefly, 1 × 105 cells/mL are cultured in 96-well flat-bottom plates at 37 °C in a humidified 5% CO2 atmosphere using RPMI 1640 supplemented with 1.25% FCS, and 5% WEHI supernatant. Decreased FCS concentration is necessary to prevent binding between Tofacitinib citrate and serum proteins. Growth inhibition assays are terminated by addition of 20 μL CellTiter96 One Solution Reagent. Flat-bottom plates are incubated for an additional 3 hours for MTT assay. Absorbance is determined at 595 nm on a BioTek Synergy-HT microplate reader. Results are the average standard deviation of three independent determinations.
Studio sugli animali:

[2]
  • Modelli animali

    Mauritius-origin adult cynomolgus monkeys

  • Dosaggi

    10, 30 mg/kg/d

  • Somministrazione

    Oral gavage

Riferimenti

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21105711/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18482053/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15371489/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14593182/

Convalida del prodotto da parte del cliente

<p>CP-690550 reduced the severity of ischemic damage. (A) CP-690550 (10 μM) suppressed IL-17 production by cdT cells and activated memory T cells. cdT cells and CD4+ CD44+ memory T cells isolated from C5BL6J mice through flow cytometry were stimulated for 24 h with plate-bound monoclonal antibodies to CD3 (2 ng/ml) and CD28 (1 ng/ml) in the presence or absence of IL-23 (25 ng/ml). IL-17A production and IL-17A expression level were measured by quantitative RT-PCR (a) and ELISA (b). (B) CBF reduction after brain ischemia. (C) Time-dependent changes in neurological score. *p < 0.05. (D) Infarct volume as visualized through TTC staining on day 3 in CP-690550 (CP)- and vehicle-treated mice.</p><div><div> </div></div><p> </p>

Dati da [ Biochem Biophy Res Commun , 2010 , 402, 500–506 ]

<p>CP690,550 is effective in treating collagen-induced arthritis in vivo. 6-week-old DBA/J1 male mice were given an initial injection of type 2 collagen on day 21 and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15mg/kg/day) was administered interperitoneally once daily for 2 weeks from day 0 (n = 4 per group). Tissue specimens from the ankle of CIA mice administered vehicle or CP690,550 were stained with safranin O and methyl green. Bar, 100 μM. Representatives of at least two independent experiments are shown.</p>

, , Dr. Akihiko Yoshimura of Akihiko Yoshimura

<p>STAT3-inhibition antagonizes arthritis effects in vivo. (A) 6-week-old DBA/J1 male mice were given initial injection of type 2 collagen on day -21, and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15mg/kg/day) was administered intraperitoneally once daily for 2 weeks from day 7 (n = 4per group). Arthritis scores were measured three times a week. (B) Total RNA was prepared from the tissue of hind paws of CIA induced mice after 2 weeks of treatment by vehicle or CP690,550, and expression of IL-6 cytokine families (IL-6, OSM, IL-11 and LIF) relative to β-actin was analyzed by a quantitative real-time PCR. (C) IL 6 serum levels in sera of CIA induced mice after 2 weeks of treatment by vehicle or CP690,550 were assessed by ELISA. (D) Specimens of ankle joints from CIA mice treated with vehicle or CP690,550 for 2 weeks were subjected to immunofluorescence staining for pSTAT3. Nuclei were visualized by TOTO3. Bar, 100 μm. (E) Whole cell lysates were made from ankle joint tissues of CIA mice treated with or without CP690,550 for 2 weeks. Phosphorylated-STAT3 was then analyzed by western blot (upper panel) and ELISA (lower panel). Results are representative of at least three independent experiments.</p>

, , Saraswati Sukumar of Johns Hopkins University School of Medicine

<p>The STAT3 inhibitor CP690,550 inhibits arthritis in vivo and the expression of IL-6 cytokine family in vitro. (A) Whole-cell lysates from MC3T3-E1 cells stimulated with IL-1β (10 ng/ml) plus CP690,550 at the indicated concentrations were analyzed by immunoblotting to detect pSTAT3 and STAT3. Actin served as an internal control. (B) 6-week-old DBA/1 male mice were given an initial injection of type 2 collagen on day -21, and arthritis was induced with a second injection on day 0. Vehicle or CP690,550 (15 mg/kg/day) was administered intraperitoneally once daily for 2 weeks from day 0 (n = 4 per group). Arthritis scores were measured three times a week. (C and D) Total RNA was prepared from primary osteoblasts treated with IL-1β (10ng/ml), TNFα (10 ng/ml) or OSM (50 ng/ml) with (+) or without (-) CP690,550 (100nM) for 24 hours, and IL-6 expression relative to β-actin was analyzed by quantitative real-time PCR. Data are means ±SD of IL-6/β-actin. (*P < 0.001; n = 3). (E) IL-6 protein levels in the supernatant of osteoblasts treated with IL-1β (left panel) or TNF (right panel) plus indicated concentrations of CP690,550 for 24 hours were assessed by ELISA. Data are means ±SD of IL-6 (pg/ml).</p>

, , Dr. Akihiko Yoshimura of Akihiko Yoshimura

Sellecks CP-690550 (Tofacitinib) Citrate È stato citato da 198 Pubblicazioni

Unveiling the Anti-Angiogenic Potential of Small-Molecule (Kinase) Inhibitors for Application in Rheumatoid Arthritis [ Cells, 2025, 14(2)102] PubMed: 39851530
Pharmacological evaluation of drug therapies in Aicardi-Goutières syndrome: insights from patient-derived neural stem cells [ Front Pharmacol, 2025, 16:1549183] PubMed: 40183101
JAK/STAT3 represents a therapeutic target for colorectal cancer patients with stromal-rich tumors [ J Exp Clin Cancer Res, 2024, 43(1):64] PubMed: 38424636
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
A panel of janus kinase inhibitors identified with anti-inflammatory effects protect mice from lethal influenza virus infection [ Antimicrob Agents Chemother, 2024, 68(4):e0135023.] PubMed: 38470034
Tofacitinib to prevent anti-drug antibody formation against LMB-100 immunotoxin in patients with advanced mesothelin-expressing cancers [ Front Oncol, 2024, 14:1386190] PubMed: 38706610
Metabolic signature and proteasome activity controls synovial migration of CDC42hiCD14+ cells in rheumatoid arthritis [ Front Immunol, 2023, 14:1187093] PubMed: 37662900
Comprehensive protocols for culturing and molecular biological analysis of IBD patient-derived colon epithelial organoids [ Front Immunol, 2023, 14:1097383] PubMed: 36911731
In vitro and in vivo modelling of mutant JAK3/STAT5 signaling in leukemia [ Heliyon, 2023, 9(11):e22085] PubMed: 38053908
Cap analysis of gene expression (CAGE) 法を用いた nestin-induced Ikk2 deficient マウスにおける皮膚炎の分子病態解析 [ University of Toyama Graduate School of Medical and Pharmaceutical Education (Doctoral Course), 2023, ] PubMed: none

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